王琪琳 (聊城大學生命科學學院，聊城 252059)

凋亡對于維持組織的自穩(wěn)態(tài)和正常發(fā)育非常重要。與凋亡相關的信號通路主要有兩個:一個是配體結(jié)合誘導的外部凋亡通路，另一個是線粒體依賴的內(nèi)部凋亡通路。c-FLIP是外部凋亡通路中的一個重要負調(diào)控因子，它的13個剪切突變體基因已經(jīng)被鑒定，但是只有三個能翻譯成蛋白質(zhì)(c-FLIPL、c-FLIPS和c-FLIPR)。c-FLIPL是一個55 kD的蛋白質(zhì)，結(jié)構(gòu)類似于Caspase-8前體，氨基端有兩個DED結(jié)構(gòu)域，羧基端有一個Caspase結(jié)構(gòu)域。但由于c-FLIPL的羧基端結(jié)構(gòu)域缺乏半胱氨酸(Cys)，因此缺乏酶的活性。c-FLIPS和c-FLIPR在氨基端也含有兩個DED結(jié)構(gòu)域，但是其羧基末端都比c-FLIPL羧基末端短。在c-FLIPS和c-FLIPR中，兩個DED結(jié)構(gòu)域被一串氨基酸連接，在蛋白質(zhì)的泛素化和降解方面可能具有重要作用［1］。c-FLIP的表達可以在轉(zhuǎn)錄水平和翻譯后水平進行調(diào)節(jié)，并受磷酸化和泛素化的影響。在許多腫瘤細胞中，c-FLIP表達較高，用c-FLIP抑制劑與TRAIL或者與傳統(tǒng)化療聯(lián)合處理，可使c-FLIP表達下調(diào)，進而誘導細胞凋亡。因此c-FLIP在癌癥治療中可作為一個重要的分子靶標。

1 c-FLIP

1．1 腫瘤細胞中c-FLIP的過表達 c-FLIP在一系列癌癥，如結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌、黑色素瘤、卵巢癌、前列腺癌中表達較高。在大多數(shù)情況下，c-FLIPL在惡性腫瘤中表達增加;另有研究表明c-FLIPS表達也上調(diào)，如在胃癌SNU-216細胞和胰腺癌中c-FLIPS表達上調(diào)［2］。c-FLIP的過表達可增加拮抗 Fas、TRAIL介導的細胞凋亡。研究證實，在某些組織中c-FLIP的高表達水平還與腫瘤的遷徙有關。在結(jié)腸癌、宮頸癌、伯基特淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤和膀胱癌中，c-FLIP的表達水平升高與不良預后有關［3，4］。c-FLIP 異構(gòu)體在腫瘤細胞中過表達，其表達水平不僅與死亡受體靶向的治療有關，還與傳統(tǒng)治療有關，因為c-FLIP抑制抗癌藥物誘導的細胞凋亡。

1．2 c-FLIP的作用 在外部凋亡通路中，c-FLIP募集到DISC中可以抑制Caspase-8前體的二聚化和活性，從而抑制凋亡事件的發(fā)生。c-FLIPL與Caspase-8前體可以形成一個異源二聚體，c-FLIPL與Caspase-8前體的異源二聚化，可以誘導Caspase-8的活性［5］。復合體中Caspase-8的有限激活可以產(chǎn)生p43-c-FLIP和p41/p43-Caspase-8亞單元，然而由于c-FLIPL缺乏蛋白酶水解活性，進一步的切割不能發(fā)生，切割的產(chǎn)物繼續(xù)與DISC結(jié)合，阻止凋亡信號的進一步轉(zhuǎn)導。盡管如此，活化的Caspase-8能夠接近部分底物，如RIP。RIP在細胞膜上不同的切割，可以導致由Fas配體激活c-FLIPL和c-FLIPS對下游信號通路中 c-Fos或者 NF-κB的不同調(diào)節(jié)［6］。

2 c-FLIP的轉(zhuǎn)錄表達調(diào)節(jié)

越來越多的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子被發(fā)現(xiàn)結(jié)合在c-FLIP的啟動子上，轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子對c-FLIP異構(gòu)體的不同調(diào)節(jié)，可能是以一種細胞依賴的方式，在特定刺激條件下決定細胞的命運。

實驗證明，調(diào)控c-FLIP的轉(zhuǎn)錄因子有NF-κB、p53、p63、FOXO3a、EGR1、AR、Sp1、E2F1、c-Myc、IRF5、c-Fos、NFATc2 和 hnRNPk［7-12］。NF-κB、p53、p63、NFAT、EGR1、hnRNPK、AR 和 Sp1 誘導 c-FLIP的表達;而 c-Myc、FOXO3a、c-Fos、IRF5 和 Sp3 抑制c-FLIP的轉(zhuǎn)錄。許多信號通路通過激活這些轉(zhuǎn)錄因子來調(diào)控c-FLIP，其中涉及到TNF配體、生長因子、白介素、趨化因子、DNA損傷試劑或者非傳統(tǒng)的化療試劑。TNF-α和 CD40配體可激活 NF-κB，導致c-FLIP表達上調(diào)從而抑制Fas、TNFR1和TRAIL受體介導的細胞凋亡［13］。另外 PI3K、Akt、MAPK信號通路的激活或者生長因子刺激，也可以誘導c-FLIP的轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)。趨化因子IL-8在前列腺癌細胞系中，通過激活NF-κB和雄性激素依賴的轉(zhuǎn)錄方式而增加 c-FLIPS和 c-FLIPL的 mRNA水平［14］。干擾素-β介導的IRF5(Interferon regulatory factor 5)的激活與PMA或者TRAIL誘導的c-Fos的激活可抑制 c-FLIP 的表達［15］。

c-FLIP異構(gòu)體的調(diào)節(jié)機制現(xiàn)在還不完全清楚，可能依賴于轉(zhuǎn)錄因子或者激活的信號通路，還可能依賴于特定的細胞系。在肺癌中，E2F1可抑制c-FLIPS而不是c-FLIPL的表達［2］;在活性T-細胞中c-FLIPS的表達上調(diào)特別依賴于 NFATc2［11］;CD40介導的c-FLIPR的表達上調(diào)可抑制Fas誘導的細胞凋亡。盡管c-FLIPL和c-FLIPS都受NF-κB調(diào)節(jié)，但在紅白血病細胞系TF-1中，c-FLIPR的表達是以不依賴于 NF-κB 的方式被 TNF 激活所誘導［16］。在HaCat細胞系中用RNAi篩選p63靶標發(fā)現(xiàn)，同一種轉(zhuǎn)錄因子對不同c-FLIP異構(gòu)體的調(diào)節(jié)可能不同。p63可能專門誘導c-FLIPR的表達，而抑制c-FLIPR并不影響c-FLIPL表達水平［7］。因此，有必要在不同細胞中研究c-FLIP異構(gòu)體的表達調(diào)控機制。

2．1 PKCε/NF-κB 信號通路對 c-FLIP 的調(diào)節(jié)NF-κB是真核細胞的轉(zhuǎn)錄因子，幾乎存在于所有的細胞中。在有害刺激(如病毒、脂多糖、佛波酯及dsRNA)等作用下，PKCε活化并激活NF-κB轉(zhuǎn)位到細胞核，與多種細胞因子、應激相關等基因啟動子和增強子上的κB序列特異結(jié)合，促進細胞因子的過表達和細胞在應激條件下的存活和生長。研究發(fā)現(xiàn)［17］，PKCε 的活化可以增強 c-FLIP mRNA 的轉(zhuǎn)錄，誘導c-FLIP表達上調(diào);而NF-κB活性的抑制則能抑制PKCε誘導的c-FLIP的表達上調(diào)。人T細胞白血?、裥筒《景┑鞍譼ax可以通過激活NF-κB誘導c-FLIP的表達，抑制Fas介導的細胞凋亡［18］。NF-κB抑制劑 DHMEQ可抑制 CLL細胞內(nèi) NF-κB的活性誘導細胞凋亡，并伴隨NF-κB依賴的抗凋亡基因，如c-IAP、Bfl-1、Bcl-xL和 c-FLIP等基因的表達下調(diào)［19］。由此可見在上調(diào) c-FLIP表達的過程中，PKCε/NF-κB 信號通路以及 NF-κB 的活性起了至關重要的作用。

2．2 PI3K/Akt信號通路對c-FLIP的調(diào)節(jié) PI3K/Akt信號通路與細胞生長、增殖及癌變密切相關，是細胞內(nèi)一條重要的信號轉(zhuǎn)導通路。PI3K催化磷脂酰肌醇(PI)磷酸化生成PIP3，在PIP3存在的情況下，磷脂酰肌醇依賴性激酶-1(Phosphoinositide-dependent kinase-1，PDK-1)能磷酸化Akt/PKB并使之活化。在腫瘤細胞內(nèi)，PI3K通過Akt的磷酸化可增強c-FLIP mRNA的轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)表達水平［20］。PI3K抑制劑下調(diào)c-FLIP的表達，增強Fas介導的HL-60細胞凋亡的敏感性。盡管在口腔磷狀上皮細胞癌(OSCC)中，PI3K抑制劑Waltman和LY294002不影響OSCC細胞中Fas的表達，卻能強烈抑制Akt的磷酸化、顯著降低細胞內(nèi)c-FLIP的水平，促進Fas介導的細胞凋亡［20］。c-Myc作為一個癌基因，在細胞增殖和細胞凋亡中具有雙重作用。PI3K/Akt信號通路的激活可誘導c-Myc的轉(zhuǎn)錄，而c-Myc表達增加可使c-FLIP表達降低，促進TRAIL誘導的細胞凋亡［21，22］。染色質(zhì)免疫沉淀及熒光標記分析顯示，c-Myc結(jié)合并抑制了c-FLIP的啟動子，c-Myc的表達增強了TRAIL誘導的DISC中Caspase-8的活性，從而促進了c-FLIP的降解。在對TRAIL敏感的細胞系中，c-Myc的表達水平與細胞對TRAIL的敏感性呈正相關。過表達c-Myc或激活融合的Myc-ER(雌激素受體)，可增加TRAIL耐受細胞對TRAIL敏感性;如果用siRNA抑制c-Myc活性，能顯著降低c-Myc的表達和TRAIL誘導的細胞凋亡。c-FLIP是c-Myc的直接靶向作用蛋白，無論是在培養(yǎng)細胞還是在c-Myc誘導腫瘤發(fā)生的小鼠動物模型中，過表達c-Myc或者活化Myc-ER都能降低c-FLIP的表達水平，而用siRNA抑制c-Myc的活性則能增強c-FLIP的表達［21］。另外，補體C5b-9復合物可以抑制凋亡蛋白Caspase-8的活化以及對Bid的切割，顯著提高c-FLIPL蛋白的表達水平。但是，PI3K抑制劑LY294002可逆轉(zhuǎn)C5b-9復合物的抗凋亡效應［23］。綜上所述，PI3K/Akt信號通路對 c-FLIP的表達調(diào)控具有很重要的作用。

2．3 轉(zhuǎn)錄因子E2F1對c-FLIP的調(diào)節(jié) 轉(zhuǎn)錄因子E2F1是在細胞周期S期及細胞凋亡過程中起作用的轉(zhuǎn)錄因子。研究發(fā)現(xiàn)［24］，低水平表達E2F1的肺癌細胞中，c-FLIPs特異性過表達;在不同的肺癌細胞系中，E2F1可以通過下調(diào)c-FLIPS并激活死亡誘導信號復合體DISC中Caspase-8，誘導細胞凋亡。E2F1可促進Fas和TRAIL介導的腫瘤細胞凋亡，增強T淋巴細胞抗腫瘤的細胞毒效應。在原發(fā)性肺癌細胞中低水平的E2F1可能是促成細胞癌變的一個重要因素，其表達水平的下調(diào)將促成腫瘤細胞的免疫逃逸。因此，在死亡受體介導的細胞凋亡通路中，E2F1是一個至關重要的細胞凋亡轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。

2．4 其他 干細胞因子(SCF)可增強 c-FLIP mRNA的轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)表達，減弱IFN-γ誘導的細胞凋亡。研究認為［25］，雄激素可以提供前列腺上皮細胞生存信號，前列腺中雄激素的去除會誘導細胞凋亡。在雄激素存在的情況下，雄激素受體被募集到c-FLIP基因的啟動子上，誘導c-FLIP基因的表達，研究表明在雄激素作用下，雄激素受體可以通過調(diào)節(jié)c-FLIP基因影響前列腺細胞的存活和凋亡。TRAIL誘導腫瘤細胞凋亡的敏感性，除了與c-Myc和MEK/Erk誘導的Caspases活性增強之外，發(fā)現(xiàn)Akt-mTOR途徑也調(diào)控TRAIL介導的細胞凋亡，該途徑不是增強細胞對TRAIL的敏感性及Akt的表達，而是通過mTOR及其靶蛋白S6激酶和eIF-4E起作用，選擇性地增強抗凋亡蛋白c-FLIPS的翻譯，阻抑TRAIL介導的細胞凋亡［26］。

3 c-FLIP的翻譯后表達調(diào)節(jié)

除了轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)外，c-FLIP的異構(gòu)體在轉(zhuǎn)錄后水平還特別受到一些化合物的調(diào)節(jié)。這些化合物可以誘導c-FLIP的降解，增加死亡受體介導的細胞凋亡的敏感性。c-FLIP異構(gòu)體是半衰期比較短的蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)或RNA合成抑制劑可降低它們的表達水平［27］。c-FLIP異構(gòu)體的表達還受熱激效應、E3泛素連接酶Itch激活的JNK通路以及泛素蛋白酶體途徑所調(diào)節(jié)，這些調(diào)節(jié)是磷酸化依賴的或者非依賴的方式。

c-FLIP通過蛋白酶體降解途徑比較復雜，可能因為c-FLIP異構(gòu)體不同的調(diào)節(jié)機制以及c-FLIP異構(gòu)體不同的轉(zhuǎn)錄后修飾。c-FLIPS對泛素化降解更敏感，可能由于其獨特的 C-末端尾巴［28］。E3-泛素連接酶Itch是由JNK調(diào)控的，它可以使c-FLIP結(jié)合上泛素化鏈而通過蛋白酶體途徑進行降解［1］。在FasL介導的細胞凋亡過程中，ROS也是通過蛋白酶體誘導c-FLIP下調(diào)［29］。NF-κB可通過抑制細胞中的ROS水平而抑制JNK活性，導致Itch連接酶活性的降低，從而穩(wěn)定細胞中c-FLIP的表達水平。c-FLIPL能被Itch泛素化，但c-FLIPL的泛素化并不需要CUL3，它也是一個E3連接酶，可以介導Caspase-8的泛素化。現(xiàn)已證明Itch是c-FLIPS的泛素化的關鍵調(diào)節(jié)者。c-FLIPL和c-FLIPS也可以不依賴于JNK 的方式進行降解［30］。

c-FLIP的蛋白水平也受磷酸化的重要調(diào)節(jié)。c-FLIPS的Ser193磷酸化可以抑制它的泛素化，從而穩(wěn)定c-FLIPS在細胞中的表達水平而促進細胞的存活［31］。c-FLIPL的Ser273可以被Akt以一種JNK和Itch依賴的方式磷酸化，這對于降低c-FLIP的水平是非常重要的［32］。相反，Akt能促進E3連接酶Itch的多泛素化和降解，從而穩(wěn)定 c-FLIPs的表達［33］。在老鼠巨噬細胞中，蛋白激酶p38和c-Cbl可以使c-FLIPs特定氨基酸殘基磷酸化，促進 c-FLIPs和 E3連接酶 c-Cbl之間的相互作用［34］。

4 靶向c-FLIP的癌癥治療

c-FLIP的過表達可拮抗FasL和TRAIL誘導的細胞凋亡，而抑制c-FLIP可以克服這種抗性。因此靶向c-FLIP，特別是與TRAIL或者傳統(tǒng)化療聯(lián)合處理，可能是癌癥治療的有效方法。

新陳代謝抑制劑，如蛋白質(zhì)合成抑制劑cycloheximide、anisomycin和RNA合成抑制劑actinomycin D最初用來研究抑制c-FLIP表達的分子機制［35，36］。研究顯示這幾種化合物能夠下調(diào)c-FLIP。用5-FU進行化療也能夠下調(diào)結(jié)腸癌細胞系中c-FLIPS和c-FLIPL的表達水平［37］。

蛋白酶體抑制劑在許多不同的細胞系中被廣泛研究，作用效果依賴于所研究的細胞系。在不同腫瘤細胞中，用Bortezomib或者小分子蛋白酶體抑制劑MG132處理之后可以增加或者降低c-FLIP的表達水平［38-44］，但 Bortezomib和 MG132都可以增加TRAIL誘導的細胞凋亡敏感性。

DNA損傷試劑可以降低腫瘤細胞中c-FLIP的表達水平，然而這種表達水平在不同類型的細胞中是不同的。一些化療藥物可使c-FLIP表達水平升高，相反另外一些化療試劑可以降低c-FLIP表達水平。在卵巢癌細胞系中，Cisplatin可以使c-FLIP以p53依賴的方式進行泛素化降解，主要是與p53、Itch形成一個三元復合體［45］。三元復合體所導致的c-FLIPL/S的泛素化是由Akt信號通路控制的。在p53野生型結(jié)腸癌 HCT116細胞中，oxaliplatin和CPT11都可以誘導c-FLIPS/L的表達下調(diào);而在p53突變的 HT29細胞中，oxliplatin和 CPT11誘導 c-FLIP表達下調(diào)，并且藥物處理之后的細胞對TRAIL誘導的細胞凋亡更加敏感，表明細胞凋亡與p53的狀態(tài)沒有關系［37］。在黑素瘤中 Cisplatin能下調(diào)c-FLIPs的表達，但不是 c-FLIPL;Cisplatin處理后，c-FLIPL脫磷酸化［46］。在膠質(zhì)瘤中 c-FLIPL被CaMKII磷酸化之后可以促進c-FLIPL的在DISC中的募集而抑制Caspase-8結(jié)合，因此推斷c-FLIP的脫磷酸化會減弱它的抑制活性而促進細胞凋亡［47］。

組蛋白脫乙酰化酶抑制劑和拓撲異構(gòu)酶Ⅰ抑制劑是新的癌癥治療藥物，能夠調(diào)節(jié)c-FLIP的表達水平。TSA處理可以降低卵巢癌細胞中c-FLIP的mRNA和蛋白質(zhì)表達水平，但并不影響c-FLIPs的表達水平。EGFR信號通路抑制劑可以阻抑TSA對c-FLIPL的調(diào)節(jié)。在肝癌細胞系中［48］，ITF2357和丙戊酸可以降低c-FLIP的mRNA和蛋白質(zhì)水平，但是研究并沒有區(qū)分不同的異構(gòu)體［49］。另外，通過RNAi干擾直接抑制 c-FLIP的翻譯可能是下調(diào)c-FLIP的最專一的方法［50］。但是在這些研究中，損傷或者修飾DNA的試劑靶向c-FLIP可能會有一定困難，因為作用于c-FLIP的效果在細胞類型之間是不同的，可能會影響兩種或者一種c-FLIP異構(gòu)體。盡管在體外研究中，用RNAi干擾直接靶向c-FLIP可以增加細胞對TRATL或者FasL誘導的凋亡更加敏感，然而在體內(nèi)使用RNAi干擾技術有許多限制，因此在臨床上抗用RNAi干擾方法靶向c-FLIP可能還需要一段時間。

5 展望

c-FLIP的選擇性抑制劑與一些配體(如TRAIL或者FasL)或傳統(tǒng)的化療藥物(如5-FU)聯(lián)合，可成為一種有效的腫瘤治療方法。合理的設計或者篩選c-FLIP的有效抑制劑，需要深入理解該種蛋白質(zhì)的調(diào)節(jié)機制以及不同異構(gòu)體的功能。另外，希望能開發(fā)一系列新的化合物，這些化合物可能會調(diào)節(jié)惡性腫瘤中c-FLIP不同異構(gòu)體的表達水平(通過結(jié)構(gòu)類似物競爭，蛋白酶體降解或者轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)節(jié))，甚至調(diào)控它們的比例。專門調(diào)節(jié)c-FLIP不同異構(gòu)體的表達可恢復死亡受體介導的細胞凋亡的敏感性，通過調(diào)控配體介導的細胞凋亡為癌癥治療提供更有效的方法。

1 Chang L，Kamata H，Solinas G et al．The E3 ubiquitin ligase itch couples JNK activation to TNFalpha-induced cell death by inducing c-FLIP(L)turnover［J］．Cell，2006;124:601-613．

2 Salon C，Eymin B，Micheau O et al．E2F1 induces apoptosis and sensitizes human lung adenocarcinoma cells to death-receptormediated apoptosis through specific downregulation of c-FLIP(short)［J］．Cell Death Differ，2006;13:260-272．

3 Ullenhag G J，Mukherjee A，Watson N F et al．Overexpression of FLIPL is an independentmarker of poor prognosis in colorectal cancer patients［J］．Clin Cancer Res，2007;13:5070-5075．

4 Duiker EW，van der Zee A G，de Graeff P etal．The extrinsic apoptosis pathway and its prognostic impact in ovarian cancer［J］．Gynecol Oncol，2010;116:549-555．

5 Micheau O，Thome M，Schneider P et al．The long form of FLIP is an activator of caspase-8 at the Fas death-inducing signaling complex［J］．JBiol Chem，2002;277:45162-45171．

6 Wajant H，Haas E，Schwenzer R et al．Inhibition of death receptormediated gene induction by a cycloheximide-sensitive factor occurs at the level of or upstream of Fas-associated death domain protein(FADD)［J］．JBiol Chem，2000;275:24357-24366．

7 BorrelliS，CandiE，Alotto D etal．p63 regulates the caspase-8-FLIP apoptotic pathway in epidermis［J］．Cell Death Differ，2009;16:253-263．

8 Mahalingam D，Natoni A，Keane M et al．Early growth response-1 is a regulator of DR5-induced apoptosis in colon cancer cells［J］．Br JCancer，2010;102:754-764．

9 Ganapathy M，Ghosh R，Jianping X etal．Involvementof FLIP in 2-methoxyestradiol-induced tumor regression in transgenic adenocarcinoma of mouse prostatemodel［J］．Clin Cancer Res，2009;15:1601-1611．

10 Hu G，Barnes B J．IRF-5 is a mediator of the death receptor-induced apoptotic signaling pathway［J］．JBiol Chem，2009;284:2767-2777．

11 Ueffing N，Schuster M，Keil E et al．Up-regulation of c-FLIP short by NFAT contributes to apoptosis resistance of short-term activated T cells［J］．Blood，2008;112:690-698．

12 Chen LC，Chung IC，Hsueh C etal．The antiapoptotic protein，F(xiàn)LIP，is regulated by heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K and correlates with poor overallsurvivalof nasopharyngeal carcinoma patients［J］．Cell Death Differ，2010;17:1463-1473．

13 TravertM，Ame-Thomas P，PangaultC etal．CD40 ligand protects from TRAIL-induced apoptosis in follicular lymphomas through NF-kappaB activation and up-regulation of c-FLIP and Bcl-xL ［J］．J Immunol，2008;181:1001-1011．

14 Wilson C，Wilson T，Johnston PG etal．Interleukin-8 signalingattenuates TRAIL-and chemotherapy-induced apoptosis through transcriptional regulation of c-FLIP in prostate cancer cells［J］．Mol Cancer Ther，2008;7:2649-2661．

15 Zhang X，LiW，Olumi A F．Low-dose 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate enhances tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand induced apoptosis in prostate cancer cells［J］．Clin Cancer Res，2007;13:7181-7190．

16 Rushworth SA，Taylor A，Langa S et al．TNF signaling gets FLIPped off:TNF-induced regulation of FLIP ［J］．Cell Cycle，2008;7:194-199．

17 Wang Q，Wang X，Zhou Y etal．PKCdelta-mediated regulation of FLIP expression in human colon cancer cells［J］．Int JCancer，2006;118:326-334．

18 Okamoto K，F(xiàn)ujisawa J，Reth M et al．Human T-cell leukemia virus type-Ioncoprotein Tax inhibits Fas-mediated apoptosis by inducing cellular FLIP through activation of NF-kappaB ［J］．Genes Cells，2006;11:177-191．

19 Horie R，Watanabe M，Okamura T et al．DHMEQ，a new NF-kappaB inhibitor，induces apoptosis and enhances fludarabine effects on chronic lymphocytic leukemia cells［J］．Leukemia，2006;20:800-806．

20 Kondo G，I was e M，Watanabe H etal．Enhancementof susceptibility to Fas-mediated apoptosis in HL-60 cells through down-regulation of cellular FLICE-inhibitory protein by phosphatidylinositol3-kinase inhibitors［J］．Oncol Rep，2005;14:1215-1222．

21 RicciM S，Jin Z，Dews M et al．Direct repression of FLIP expression by c-myc is amajor determinantof TRAIL sensitivity［J］．Mol Cell Biol，2004;24:8541-8555．

22 Bangert A，Cristofanon S，Eckhardt I et al．Histone deacetylase inhibitors sensitize glioblastoma cells to TRAIL-induced apoptosis by c-mycmediated downregulation of cFLIP ［J］． Oncogene．2012;31:4677-4688．

23 Cudrici C，Niculescu F，Jensen T et al．C5b-9 terminal complex protectsoligodendrocytes from apoptotic cell death by inhibiting caspase-8 processing and up-regulating FLIP ［J］．J Immunol，2006;176:3173-3180．

24 Salon C，Eymin B，Micheau O etal．E2F1 induces apoptosis and sensitizes human lung adenocarcinoma cells to death-receptor-mediated apoptosis through specific downregulation of c-FLIP(short)［J］．Cell Death Differ，2006;13:260-272．

25 Gao S，Lee P，Wang H etal．The androgen receptor directly targets the cellular Fas/FasL-associated death domain protein-like inhibitory protein gene to promote theandrogen-independentgrowth ofprostate cancer cells［J］．Mol Endocrinol，2005;19:1792-1802．

26 Panner A，Parsa A T，Pieper RO．Translational regulation of TRAIL sensitivity［J］．Cell Cycle，2006;5(2):147-150．

27 Fulda S，Meyer E，Debatin K M．Metabolic inhibitors sensitize for CD95(APO-1/Fas)-induced apoptosis by down-regulating Fasassociated death domain-like interleukin 1-converting enzyme inhibitory protein expression［J］．Cancer Res，2000;60:3947-3956．

28 Poukkula M，Kaunisto A，Hietakangas V et al．Rapid turnover of c-FLIPshort is determined by itsunique C-terminal tail［J］．JBiol Chem，2005;280:27345-27355．

29 Wang L，Azad N，Kongkaneramit L etal．The Fas death signaling pathway connecting reactive oxygen species generation and FLICE inhibitory protein down-regulation［J］．J Immunol，2008;180:3072-3080．

30 Sánchez-Pérez T，Ortiz-Ferrón G，López-Rivas A．Mitotic arrest and JNK-induced proteasomal degradation of FLIP and Mcl-1 are key events in the sensitization of breast tumor cells to TRAIL by antimicrotubule agents［J］．Cell Death Differ，2010;17:883-894．

31 Kaunisto A，Kochin V，Asaoka T et al．PKC-mediated phosphorylation regulates c-FLIP ubiquitylation and stability ［J］．Cell Death Differ，2009;16:1215-1226．

32 Shi B，Tran T，Sobkoviak R et al．Activation-induced degradation of FLIP(L)ismediated via the phosphatidylinositol3-kinase/Akt signaling pathway inmacrophages［J］．JBiol Chem，2009;284:14513-14523．

33 Panner A，Crane C A，Weng C et al．A novel PTEN-dependent link to ubiquitination controls FLIPSstability and TRAIL sensitivity in glioblastomamultiforme［J］．Cancer Res，2009;69:7911-7916．

34 Kundu M，Pathak SK，Kumawat K etal．A TNF-and c-Cbl-dependent FLIP(S)-degradation pathway and its function in Mycobacterium tuberculosis-induced macrophage apoptosis［J］．Nat Immunol，2009;10:918-926．

35 Perez L E，Parquet N，Shain K et al．Bonemarrow stroma confers resistance to Apo2 ligand/TRAIL inmultiplemyeloma in partby regulating c-FLIP ［J］．J Immunol，2008;180:1545-1555．

36 Mawji IA，Simpson C D，Gronda M etal．A chemical screen identifies anisomycin as an anoikis sensitizer that functions by decreasing FLIP protein synthesis［J］．Cancer Res，2007;67:8307-8315．

37 Galligan L，Longley D B，McEwan M et al．Chemotherapy and TRAIL-mediated colon cancer cell death:the roles of p53，TRAIL receptors，and c-FLIP ［J］． Mol Cancer Ther， 2005;4:2026-2036．

38 Zhao X，Qiu W，Kung J etal．Bortezomib induces caspase-dependent apoptosis in Hodgkin lymphoma cell lines and is associated with reduced c-FLIP expression:a gene expression profiling study with implications for potential combination therapies ［J］．Leuk Res，2008;32:275-285．

39 Koschny R，Holland H，Sykora J et al．Bortezomib sensitizes primary human astrocytoma cells of WHO grades I to IV for tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand-induced apoptosis［J］．Clin Cancer Res，2007;13:3403-3412．

40 Koschny R，Holland H，Sykora J et al．Bortezomib sensitizes primary human esthesioneuroblastoma cells to TRAIL-induced apoptosis［J］．JNeurooncol，2010;97:171-185．

41 Riccioni R，Senese M，Diverio D et al．M4 and M5 acutemyeloid leukaemias display a high sensitivity to Bortezomib-mediated apoptosis［J］．Br JHaematol，2007;139:194-205．

42 Perez L E，Parquet N，Meads M et al．Bortezomib restores stromamediated APO2L/TRAIL apoptosis resistance in multiple myeloma［J］．Eur JHaematol，2010;84:212-222．

43 Balsas P，López-Royuela N，Galán-Malo P et al．Cooperation between Apo2L/TRAIL and bortezomib in multiplemyeloma apoptosis［J］．Biochem Pharmacol，2009;77:804-812．

44 Liu X，Yue P，Chen S et al．The proteasome inhibitor PS-341(bortezomib)up-regulates DR5 expression leading to induction of apoptosis and enhancement of TRAIL-induced apoptosis despite upregulation of c-FLIP and survivin expression in human NSCLC cells［J］．Cancer Res，2007;67:4981-4988．

45 Abedini M R，Muller E J，Brun J et al．Cisplatin induces p53-dependent FLICE-like inhibitory protein ubiquitination in ovarian cancer cells［J］．Cancer Res，2008;68:4511-4517．

46 Song JH，Song D K，Herlyn M et al．Cisplatin down-regulation of cellular Fas-associated death domain-like interleukin-1betaconverting enzyme-like inhibitory proteins to restore tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand-induced apoptosis in human melanoma cells［J］．Clin Cancer Res，2003;9:4255-4266．

47 Yang B F，Xiao C，RoaW H etal．Calcium/calmodulin-dependent protein kinase II regulation of c-FLIP expression and phosphorylation in modulation of Fas-mediated signaling in malignant glioma cells［J］．JBiol Chem，2003;278:7043-7050．

48 Park S J，Kim M J，Kim H B etal．Trichostatin A sensitizes human ovarian cancer cells to TRAIL-induced apoptosis by down-regulation of c-FLIPL via inhibition of EGFR pathway［J］．Biochem Pharmacol，2009;77:1328-1336．

49 Pathil A，Armeanu S，Venturelli S et al．HDAC inhibitor treatment of hepatoma cells induces both TRAIL-independent apoptosis and restoration of sensitivity to TRAIL ［J］．Hepatology，2006;43:425-434．

50 Longley D B，Wilson TR，McEwan M et al．c-FLIP inhibits chemotherapy-induced colorectal cancer cell death ［J］．Oncogene，2006;25:838-848．