易小芳，邢榮春，鄭家芬

微小RNA(microRNA，miRNA)是一類單鏈RNA，屬于非編碼蛋白RNA，廣泛存在于生物界。miRNA-200屬miRNAs中的一種，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)其不僅參與了生命過程中一系列的重要進程，還對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展起重要調控作用。隨著miRNA與腫瘤之間的關系逐漸明朗，有證據(jù)表明，miRNA-200在腫瘤診斷、侵襲性以及腫瘤細胞對抗腫瘤藥物的敏感性方面有重要作用[1]。目前，miRNA-200參與腫瘤發(fā)生的作用靶點和活性機制一直是研究人員關注的焦點，基于此筆者對miRNA-200與腫瘤的關系作一綜述，以期為臨床工作提供借鑒。

1 miRNA-200的生物學特性

miRNA-200是生物進化過程中一種高度保守的、內源性非編碼miRNA。由19～25個核苷酸組成，有研究認為其通過與靶基因mRNA特定位點的不完全配對結合，抑制mRNA的翻譯或誘導mRNA的降解，從而參與基因的表達調控。miRNA-200家族包括miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c、miRNA-429和miRNA-141。其中miRNA-200a、miRNA-200b和miRNA-429位于人體的1號染色體(1p36.33)，miRNA-200c和miRNA-141位于人體的12號染色體上(12p13.31)。而這兩個區(qū)域經(jīng)常出現(xiàn)點突變、染色體缺失或易位，導致腫瘤發(fā)生。根據(jù)種子區(qū)域核苷酸序列的不同將miRNA-200家族分為兩個亞家族，分別為miRNA-141與miRNA-200a；miRNA-141、miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c和miRNA-429[2]。近年來有研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-200的靶基因多數(shù)參與轉錄、信號轉導、腫瘤的發(fā)生，在很多腫瘤的發(fā)生過程中其均存在異常表達。有研究表明miRNA不僅能調節(jié)細胞增殖、腫瘤侵襲和干細胞分化等，而且還是調控腫瘤化療耐藥或敏感的重要作用靶點[3-4]。

2 miRNA-200在腫瘤早期診斷中的作用

不少研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-200在腫瘤細胞和組織中均高表達。張占薪等[5]通過研究36例宮頸癌組織中has-miRNA-200b的表達水平，得出其表達值為(45.71±24.54)，在癌旁正常宮頸組織的表達值為(6.38±7.78)，這充分說明has-miRNA-200b在宮頸癌組織中的表達量顯著高于癌旁正常宮頸組織，平均升高7.16倍(P<0.01)。Mitchell等[6]對25例前列腺癌患者研究，發(fā)現(xiàn)患者血清中miRNA-141均存在高表達，敏感性可以達到60%，特異性100%，并且與前列腺特異性抗原(PSA)的表達水平相關。研究證實血清中miRNA來源于腫瘤，且這些miRNA與細胞碎片無關。而Lodes等[7]利用微陣列技術得到了類似的結論。這些研究結果均提示，血清中miRNA-200家族高表達可作為檢測腫瘤發(fā)生的標志物。

3 miRNA-200在腫瘤侵襲中的作用及調控機制

miRNAs參與了腫瘤發(fā)生侵襲或轉移的重要步驟——間皮細胞——上皮轉化(epithelial mesenchymal transtion，EMT)。EMT是將具有極性的上皮細胞轉換成具有活動能力、能夠在細胞基質中自由移動的細胞的過程，其最主要的特征是細胞黏附分子E-cadherin表達減少、細胞角蛋白細胞骨架轉化為波形蛋白為主的細胞骨架及形態(tài)上具有間充質細胞等[4]。而研究發(fā)現(xiàn)miRNA-200家族是上皮細胞的標記物和EMT的主要調節(jié)者；最近國內外從不同的角度均證明miRNA-200家族作為一種重要的調節(jié)因子，在誘導上皮細胞的分化和EMT中發(fā)揮作用[8]，例如，Park等[9]研究證實卵巢癌細胞中miRNA-200家族可直接作用于E-cadherin的轉錄抑制物ZEB1和ZEB2，從而調節(jié)E-cadherin的表達。

同樣，Gregory等[10]研究發(fā)現(xiàn)腎癌MDCK(Madin Daarby canine kidney，MDCK)細胞在TGF-β誘導的EMT改變時，miRNA-200家族的5個成員以及miRNA-205明顯下調。而miRNA-200家族的單獨被動表達可以阻止EMT的改變，共同作用則可以調節(jié)蛋白鋅指E盒結合同源盒蛋白(ZEB)1和運動神經(jīng)元存活蛋白結合蛋白(SIP)1(ZEB2)的表達?？傊梢酝ㄟ^上調ZEB1(SIP2)和SIP1的表達，促進EMT改變，進而抑制miRNA的表達。然而，在間充質細胞中這些miRNA的異常表達促使了EMT的過程[3]。

李林霞等[11]研究發(fā)現(xiàn)與正常卵巢和交界性卵巢腫瘤相比，卵巢癌中miRNA-200c和miRNA-141表達均明顯升高。但隨著腫瘤的發(fā)展，miRNA-200c的表達水平隨疾病分期升高而下降，并且在發(fā)生轉移的卵巢癌中表達水平低于未發(fā)生轉移者。研究結果表明：在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中，miRNA-200c表達呈動態(tài)變化。未發(fā)生惡性轉化的卵巢上皮細胞為間皮細胞表型，此時miRNA-200c和E-cadherin呈現(xiàn)低表達狀態(tài)；而在腫瘤發(fā)生早期，卵巢上皮細胞發(fā)生MET，miRNA-200c和E-cadherin均表現(xiàn)為高表達；隨著腫瘤進展，腫瘤細胞發(fā)生EMT并出現(xiàn)轉移，此時miRNA-200c和E-cadherin再度呈低表達狀態(tài)；最終在轉移部位，轉移灶腫瘤細胞可能再次發(fā)生間充質-上皮轉化，此時miRNA-200c表達再次升高[12]。因此，推測其調控機制可能為：(1)miRNA-200調控EMT的發(fā)生過程[13]；(2)臨床病理研究表明miRNA-200c表達呈動態(tài)變化[11]，僅在腫瘤獲得侵襲和轉移能力時發(fā)生下調，具有“期別特異性下調”現(xiàn)象[14]；(3)三維立體培養(yǎng)提示具有轉移能力的腫瘤細胞可以形成高度極化的細胞團簇，而miRNA-200c過表達可以抑制細胞團簇的形成和轉移[15]。

4 miRNA-200在腫瘤治療耐藥形成中的作用及調控機制

miRNA-200c能夠調控細胞的EMT，通過直接抑制ZEB1功能或表達，并間接上調E-cadherin表達而抑制腫瘤侵襲轉移。隨著研究的深入，學者發(fā)現(xiàn)miRNA-200c還可以通過調控不同的靶點增加細胞對紫杉醇和表皮生長因子抑制劑的敏感性[16-17]，反轉腫瘤細胞對多柔比星的耐藥[18]。在對腫瘤細胞miRNA表達譜分析后，發(fā)現(xiàn)在耐藥細胞中存在miRNA-200c表達水平下調[19-20]，對順鉑(cisplatin，DDP)耐藥的SGC7901/DDP細胞株中miRNA-200c的表達顯著低于對DDP敏感的SGC7901細胞株。將miRNA-200c前體片段轉染SGC7901/DDP細胞，其對DDP的藥物敏感性也出現(xiàn)了顯著改變，DDP對轉染miRNA-200c前體片段后SGC7901/DDP細胞的IC50值較轉染陰性對照片段的細胞顯著降低，提示miRNA-200c能夠增加SGC7901/DDP細胞對DDP的敏感性。陳勇等[1]研究還發(fā)現(xiàn)，miRNA-200c前體片段轉染SGC7901/DDP細胞后，細胞E-cadherin蛋白、PTEN和促凋亡蛋白bax的表達顯著增加，這些與腫瘤耐藥相關的蛋白表達的改變可能是miRNA-200c介導胃癌細胞對DDP耐藥發(fā)生逆轉的機制之一。故推測miRNA-200c下游可能存在參與SGC7901/DDP細胞耐藥的E-cadherin-PTEN-bax這一調控通路。

miRNA-200c能夠影響眾多抗腫瘤藥物的敏感性，也有文獻報道其調控通路中的多個因子(如：E-cadherin和ZEB1等)也與腫瘤耐藥有關，這為揭示miRNA-200c能逆轉耐藥的機制提供了理論基礎。在miRNA-200c的調控通路中，抑制ZEB1不僅能夠上調E-cadherin的表達，還能增加細胞對DDP、吉西他濱和氟尿嘧啶的敏感性[21]。近年來研究顯示，E-cadherin不僅是一個轉移調節(jié)因子，其在腫瘤耐藥中也發(fā)揮一定的作用。多項研究表明，E-cadherin可增加腫瘤細胞對細胞毒藥物(甲氨蝶呤、依托泊苷和DDP等)及表皮生長因子受體抑制劑的敏感性[22-25]。并有研究發(fā)現(xiàn)E-cadherin不僅能夠負向調節(jié)bcl-2的表達，逆轉腫瘤對化療藥物的耐藥[23]，而且能上調其下游調控通路中抑癌基因PTEN的表達[26]。PTEN在多種腫瘤細胞中異常表達，主要通過磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)/Akt/mTOR等多種信號轉導通路參與細胞的增殖、凋亡及化療耐藥。Lee等[27]研究發(fā)現(xiàn)，轉染PTEN siRNA后DDP誘導的細胞凋亡率下降。另有研究表明，將野生型PTEN導入DDP耐藥的卵巢癌CI3K細胞中，細胞對DDP的敏感性增加[28]，PTEN可通過抑制PI3K /Akt通路調節(jié)凋亡相關基因(如bax和bcl-2等)表達[29-30]，并能夠增強機體對抗腫瘤藥物(DDP、多柔比星及西妥昔單抗)的敏感性，從而發(fā)揮抗腫瘤及逆轉耐藥的作用[1，27-29，31-33]。

5 miRNA-200在腫瘤預后預測中的作用

miRNA-200c可通過調節(jié)EMT來抑制腫瘤細胞的侵襲、轉移。miRNA-200c的表達水平與腫瘤進展和預后關系密切。Yu等[34]在對99例胰腺癌術后切除標本的檢測中發(fā)現(xiàn)miRNA-200c和E-cadherin的miRNA表達水平呈正相關，且高表達miRNA-200c的患者生存率較高。此外，對14種胰腺癌細胞系研究后發(fā)現(xiàn)，上調miRNA-200c后，胰腺癌細胞的增殖能力增強，而侵襲力下降。Hurteau等[35]通過上調非小細胞肺癌細胞系A549中miRNA-200c的表達水平后，發(fā)現(xiàn)帶鋅指結構的轉錄因子8(TCF8，ZEB1)的作用缺失，進而抑制了E-cadherin的表達，導致細胞形態(tài)改變，黏附力下降。而通過沉默miRNA-200a的表達，可以促進肝癌的發(fā)生。在肝癌中肝細胞miRNA-200a表達下調，有研究證實miRNA-200a與調節(jié)β連接素和腫瘤生長因子β的作用相關[36]。miRNA還可以通過細胞周期調控腫瘤的形成。在乳腺癌中miRNA-200a/141群的表達通過增加p27/Kip1和減少CDK6的表達導致G1期細胞停滯。而miRNA-200bc/429群的表達G1期細胞減少，G2/M期細胞增加[37]。 Hu等[38]在對55例進展期卵巢癌的研究中發(fā)現(xiàn)miRNA-200基因組，包括miRNA-200a、miRNA-200b和miRNA-429與卵巢癌的復發(fā)及生存率均有關。其表達的增加可以抑制卵巢癌的轉移，且miRNA-200的低表達與卵巢癌患者低生存率均相關。因此，miRNA-200在腫瘤的進展中發(fā)揮重要作用，其表達水平可以預測腫瘤的嚴重程度及預后。

6 結語與展望

miRNA-200家族在眾多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和侵襲轉移過程中扮演著重要的角色，其在腫瘤發(fā)展的不同階段的不同表達水平可作為生物學特性、腫瘤病因學、組織學分型和臨床分級分期的生物學標志。雖然miRNA-200在基因水平上已經(jīng)取得了可喜的成就，但miRNA-200作為腫瘤標志物和特異的治療靶點仍有待大樣本進一步研究，故詳盡闡明miRNA-200生物學特性和分子機制，將為腫瘤早期診斷、有效治療及預后評估提供重要線索。

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