趙金娟，管仁偉，戴雪梅，林建強 ，林慧彬

(1.山東中醫(yī)藥大學，山東 濟南250014;2.山東省中醫(yī)藥研究院，山東 濟南250014;3.山東大學 微生物技術國家重點實驗室，山東 濟南250100)

黃芩是我國的傳統(tǒng)常用中藥材，為唇形科多年生草本植物黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi.)的干燥根，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎等功效。黃芩中含有黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素等黃酮化合物以及揮發(fā)油，苯乙醇糖苷類等成分。黃芩質量評價多以黃芩苷等成分含量的高低來判別。但是，由于黃芩成分的復雜性，單一成分很難確切的評價其質量。中藥指紋圖譜技術以其多成分、綜合性的特點，成為評價中藥質量較好的一種方法。它將中藥的色譜圖、光譜圖、波譜圖等轉化為數字化的指紋譜，并由此衍生的一系列參數和特定的計算公式所得到的數據作為判斷依據，用于中藥質量的控制、中藥材品種的鑒定等［1］。藥用黃芩除黃芩外，部分地區(qū)還使用甘肅黃芩(S. rehderiana Diels)、粘毛黃芩(S. viscidula Bge.)等，此外，不同種質的黃芩藥材性狀與成分也有差別。指紋圖譜技術為黃芩的質量控制提供一個較為有效的方法。

1 黃芩的高效液相指紋圖譜

李化等運用了RP - HPLC 建立了黃芩不同生長期的指紋圖譜，發(fā)現黃芩在生長發(fā)育過程中苷類成分含量經歷了升高-降低-再升高-再降低，苷元類成分含量則發(fā)生了降低-升高-再降低-再升高的變化，雖然二者含量的變化趨勢明顯不同，但含量最終均在枯黃期恢復到接近休眠期時的含量水平［2］。在黃芩不同部位的研究中，運用高效液相色譜圖得出，苦芩中黃芩苷的含量比條芩的高，苦芩的根部比苦芩的根莖部膨大部分含量要高;條芩中黃芩苷含量相對較低，其中主根中含量最多，其次是條芩側根、條芩根莖連接處、條芩側根、條芩莖［3］。對于黃芩的采收期，以黃芩苷為指標，建立的陜西省不同采收期黃芩的標準指紋圖譜顯示，秋季采收的黃芩樣品相似度明顯高于春季采收的樣品［4］。在黃芩不同中醫(yī)調劑品中，生品與酒制樣品在不同的酒制過程中有近一半的成分發(fā)生明顯變化，且主要是極性較小成分的變化;酒炒與酒炒炭樣品無明顯區(qū)別［5］。

2 黃芩的毛細管電泳指紋圖譜

毛細管電泳是以毛細管為分離通道，以高壓直流電場為驅動力的新型分離分析技術。與傳統(tǒng)的電泳相比，毛細管電泳以其分離效率高、快速、微量、自動化、易微型化、分離模式多樣化等特點在中藥鑒定研究、中藥有效成分的測定、中成藥研究、中藥指紋圖譜研究、中藥藥理及新藥開發(fā)方面發(fā)揮了重要作用。與高效液相相比，毛細管電泳的毛細管柱具有不容易被污染且污染后容易清洗的特點使其適合分析成分復雜的中藥材及其制劑樣品，因其采用了柱上富集技術，從而具有了和HPLC 相當的靈敏度，另外毛細管電泳還可以與質譜聯用，有效地將CE 高分離效率和MS 的定性優(yōu)勢相結合，可以同時進行中藥材及其復方制劑的指紋圖譜定性和多種成分的多指標定量［6］。

應用膠束電動毛細管電泳色譜法對組織培養(yǎng)誘導獲得的12 個黃芩多倍體株系、黃芩不同部位和不同采收期進行的黃芩苷含量測定，發(fā)現絕大部分四倍體株系黃芩苷的含量高于二倍體，且明顯高于商品藥材;黃芩主根、須根中黃芩苷的含量最高，根皮次之，莖葉中含量最低;黃芩種子成熟后期和冬季黃芩苷含量較高，春季發(fā)芽前后黃芩苷的含量就開始下降［7］。以254 nm 作為檢測波長，以50 mmol/L 硼砂(pH7.94)為運行緩沖液，分離電壓20 kV，30 ×103Pa 下壓力進樣10 s 的電泳條件，建立的黃芩毛細管電泳指紋圖譜，對5 個產地的黃芩藥材的指紋圖譜進行的比較，發(fā)現5 個產地黃芩藥材的指紋圖譜的圖貌基本一致，但各共有峰的相對峰面積有所不同，表明黃芩中各成分含量的差異與其生長環(huán)境密切相關，不同產地，峰面積比值有較大差異［8］。

3 黃芩的紅外光譜指紋圖譜

紅外光譜突出的特點是具有高度的特征性，除光學異構體外，每種化合物都有自己的紅外吸收光譜，以其對氣、固、液態(tài)樣品均可進行分析，且分析速度快，樣品用量少，操作簡便的特點，在藥物研究和質量控制等方面起到了重要作用。在紅外光譜中1 250 cm-1～400 cm-1的低頻區(qū)為指紋區(qū)，各個化合物在結構的微小差異在指紋區(qū)都會得到反映。目前紅外光譜在定性分析、純度檢查、定量分析等方面得到了廣泛的應用。

采用紅外光譜、二階導數紅外光譜以及二維相關紅外光譜，對黃芩生品及酒制品進行的三級鑒定分析表明，在紅外光譜中，黃芩生品及酒制品的紅外光譜十分相似，但通過導數光譜分析，發(fā)現在1 741 cm-1、1 411 cm-1處吸收峰在經過炮制之后向高波數位移，1 357 cm-1處吸收峰在經過炮制之后向低波數位移;二維紅外譜圖顯示的藥效組分特征差異明顯，生黃芩在1 300 cm-1～800 cm-1波數范圍內有4 個特征蜂，以1 575 cm-1最強;酒黃芩的自動峰有2 個區(qū)域，且各區(qū)域內自動峰均為正相關［9］。而在黃芩的近紅外漫反射光譜研究中，通過與SIMCA聚類分析技術的聯用可以識別不同產域的黃芩，基本達到了對不同產地的黃芩以及野生與栽培黃芩的快速無損鑒別［10］。

4 黃芩的DNA 指紋圖譜

利用RAPD 和AP -PCR 從不同生物樣品中人工合成DNA 片段，而這種DNA 片段的大小、數目因不同的生物而異，即為“DNA 指紋圖譜技術”。DNA指紋圖譜技術具有操作簡便、靈敏度高的優(yōu)點，鑒別結果不受環(huán)境因素、樣品形態(tài)、和材料來源的影響，因此可為中藥鑒定提供更加準確可靠的手段。目前，DNA 指紋圖譜技術在易淆品種的鑒別、不同產地相同品種的鑒定、藥材道地性鑒定等方面都有了廣泛的應用［11］。

利用RAPD 技術對黃芩種內的種質資源進行的遺傳多樣性分析，發(fā)現不同種源黃芩樣品的主譜帶基本一致，但不同樣品的次譜帶之間存在著不同程度的差異，利用隨機引物對不同物種基因組DNA 進行擴增，其多態(tài)性表現不同，實驗中所選的黃芩材料間的多態(tài)性為80%，其遺傳多樣性較高，表明各種源黃芩間存在著較大的遺傳差異［12］。

段蓮華通過對黃芩的DNA 指紋分析發(fā)現，高、中、低緯度的黃芩內部用同一引物擴增出的條帶基本相同;在高、中、低緯度的黃芩之間，僅有少數引物得到可以明確區(qū)分3 者的不同條帶，即不同緯度黃芩間的遺傳有一定的變異，而居群內部的變異很小;而DNA 指紋圖譜與質量相關性研究結果表明，雖然不同品種的同一引物擴增出的條帶基本相同，但有少數引物擴增出的條帶在黃芩苷含量高低品種間有明顯區(qū)別;質量好、含量高的DNA 指紋圖譜具有一條特異帶，而其他的黃芩無此帶［13］。

在對黃芩種子的研究中，蛋白質電泳發(fā)現黃芩種子圖譜中一級帶6 條，二級帶1 條，黃芩種子的RAPD 擴增，S4 為引物，黃芩種子有3 個條帶，以S11 為引物，黃芩種子有3 個條帶，2 個亮帶［14］。

5 黃芩的X 射線衍射指紋圖譜

粉末X 射線衍射Fourier 指紋圖譜分析方法是利用中藥材中的成分對X 射線的衍射效應而進行的鑒定分析。龔寧波等采用該方法對黃芩藥材進行了鑒定分析并對黃芩苷成分進行了研究，獲得其特征性衍射數據，利用粉末X 射線衍射Fourier 圖譜分析方法實現了對黃芩藥材中黃芩苷的定量分析［15］。

6 結 語

6.1 中藥指紋圖譜的建立，是對中藥質量控制的補充和提高。目前施行的質量標準在一定程度上反映了原藥材、中間體及生成品的質量，但由于中藥自身所含成分的復雜性，任何單一的活性成分或指標成分都難以準確、全面地評價中藥質量，不僅不能進行真?zhèn)舞b別和優(yōu)劣判別;有很多情況所檢測的指標成分還不具有“唯一性”，如熊果酸、齊墩果酸等同屬其他植物也均含有該成分。中藥指紋圖譜的建立可以全面反映中藥所含內在化學成分的種類和數量，進而反映中藥的質量，尤其是在現階段中藥的有效成分絕大多數沒有明確，采用中藥指紋圖譜的方式，將有效地表征中藥質量，同時指紋圖譜也為國際社會所認可，有利于中藥及其產品進入國際市場［16］。

6.2 植物藥與動物藥均屬生物類物質，除有門、綱、目、科、屬、種等系統(tǒng)分類的不同外，還受到諸多因素如光照、溫度、濕度、地理條件、病蟲害、人為因素等對其生長培育的影響，因此生物樣品即使是同一品種也還存在個體差異和可變性，造成品質上的顯著不同或較大的波動，不可能像化學合成藥品那樣具有一個特定不變的質量標準［1］。此外，中藥混淆品種，偽劣藥材以及人為摻雜時有出現，如何區(qū)分真?zhèn)蝺?yōu)劣，保證藥品質量已成為燃眉之急。鑒于此，進行中藥材指紋圖譜的深入研究對于建立更加完善有效的藥材質量評價與鑒別方法十分必要。

6.3 在黃芩的生產、采收、產地加工、貯存、炮制、調劑、制劑等過程中，質量是一個動態(tài)變化的過程。用指紋圖譜技術考查這個動態(tài)變化過程的研究還較少，部分研究多集中在HPLC 指紋圖譜，而在光譜指紋圖譜、DNA 指紋圖譜的研究較少，開展這方面的研究對于全面提高黃芩的質量控制水平意義重大。

6.4 研究中藥質量的影響因素，探討中藥質量的變化規(guī)律，進而對其質量進行全程動態(tài)監(jiān)測與調控，是確保中藥質量穩(wěn)定、均一和可控的關鍵，中藥指紋圖譜技術是質量控制的可行手段。以系統(tǒng)的化學成分研究和藥理學研究為依托，采用中藥指紋圖譜技術對黃芩質量進行控制，對建立全面的系統(tǒng)的黃芩質量控制體系有重要作用，有利于黃芩現代化研究，為黃芩走向國際化市場提供了有利條件。

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