王連芝

HPLC法測(cè)定麻黃藥材中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量

王連芝

目的建立麻黃藥材中麻黃堿和偽麻黃堿的HPLC含量測(cè)定方法。方法麻黃藥材提取液采用高效液相色譜法分析，色譜柱Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相: 乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液(磷酸調(diào)PH2.7)(2:98)(含0.2%三乙胺)，流速1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm。結(jié)果鹽酸麻黃堿的回歸方程為Y=1.894×105X +8.127×105，r=0.9999，線性范圍為0.240～0.640 μg，平均回收率為99.58%；鹽酸偽麻黃堿的回歸方程為Y=5.368×105X +8.015×105，r=0.9999，線性范圍為0.234～0.624 μg，平均回收率為103.06%。結(jié)論本方法操作簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，是檢測(cè)麻黃藥材中麻黃堿與偽麻黃堿的較理想方法。

麻黃；鹽酸麻黃堿；鹽酸偽麻黃堿；高效液相色譜法

麻黃(Herba Ephedrae)為常用藥材，是麻黃科植物草麻黃Ephedra sinica Stapf、中麻黃E. intermedia Schrenk et C. A. Mey. 或木賊麻黃E. equisetina Bge. 的干燥草質(zhì)莖，具有發(fā)汗散寒，宣肺平喘，利水消腫的功效，用于風(fēng)寒感冒，胸悶喘咳，風(fēng)水浮腫，支氣管哮喘等[1]。麻黃中有效成分為一系列結(jié)構(gòu)相似的生物堿，主要為麻黃堿和偽麻黃堿，它們?yōu)榻Y(jié)構(gòu)相同的手性異構(gòu)體，分離較為困難。關(guān)于HPLC法同時(shí)測(cè)定麻黃中麻黃堿與偽麻黃堿含量的方法[1-3]，但都存在著樣品處理方法復(fù)雜，流動(dòng)相配制繁瑣，需選擇特殊填料的色譜柱等問題。本試驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定了麻黃藥材中的麻黃堿和偽麻黃堿兩種成分的含量。實(shí)驗(yàn)表明，本方法具有操作條件簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好等特點(diǎn)，可用于麻黃藥材中麻黃堿和偽麻黃堿的含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Waters2695-2998型高效液相色譜儀，KQ-300VD型雙頻數(shù)控超聲清洗器，F(xiàn)A1104型電子分析天平。

1.2試藥 鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品購自中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào)分別為171241-201007和171237-200806)，乙腈為色譜純，其余試劑為分析純，麻黃藥材購于北京同仁堂哈爾濱藥店，經(jīng)筆者鑒定為麻黃科植物草麻黃Ephedra sinica Stapf的干燥草質(zhì)莖。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，柱溫為40℃; 流動(dòng)相為乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液(磷酸調(diào)PH2.7)(2 ∶ 98)(含0.2%三乙胺)，流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；進(jìn)樣量為10 μl。

2.2供試品溶液的制備 取本品細(xì)粉0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入1.44%磷酸溶液50 ml，稱定重量，超聲處理(功率600W，頻率50 kHz)20 min，放冷，再稱定重量，用44%磷酸溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，色譜圖見圖1，2，3。

2.3線性關(guān)系考察 取鹽酸麻黃堿對(duì)照品和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1 ml各含40 μg的混合溶液。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液6 μl、8 μl、10 μl、12 μl、14 μl、16 μl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的回歸方程和相關(guān)系數(shù)(n=6)分別為:Y=1.894×105X +8.127×105，r=0.9999；Y=5.368×105X +8.015×105，r=0.9999，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的線性范圍分別為0.240～0.640 μg之間和0.234～0.624 μg之間。

2.4精密度實(shí)驗(yàn) 取鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品混合溶液(濃度分別為40 μg/ml和39 μg/ml)，進(jìn)樣體積10 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定其峰面積積分值，計(jì)算其RSD分別為1.99%和0.89%，表明儀器的精密度良好。

2.5重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱取麻黃藥材粉末6份，依2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并測(cè)定鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量，RSD分別為0.32%和0.69%，表明該實(shí)驗(yàn)方法重現(xiàn)性良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取麻黃藥材細(xì)粉0.5 g，依2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每隔2小時(shí)進(jìn)樣1次，共進(jìn)樣5次，測(cè)定，RSD分別為0.95%和1.72%，表明該樣品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取麻黃藥材細(xì)粉6份，每份0.2 g，分別精密加入鹽酸麻黃堿對(duì)照品4 mg和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品2 mg，按2.2項(xiàng)下方法進(jìn)行樣品處理，計(jì)算回收率，鹽酸麻黃堿的平均回收率為99.58%，RSD為2.21%，鹽酸偽麻黃堿的平均回收率為103.06%，RSD為1.29%，表明該實(shí)驗(yàn)方法的回收率較高。

2.8樣品測(cè)定 精密稱取麻黃藥材細(xì)粉0.5 g，按2.2項(xiàng)下方法處理，進(jìn)行高效液相分析，計(jì)算樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量分別為15 mg/g和7.2 mg/g。

3 討論

麻黃堿與偽麻黃堿互為手性異構(gòu)體，分離較為困難，《2010年版藥典》麻黃含量測(cè)定項(xiàng)下選擇極性乙醚連接苯基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱。本實(shí)驗(yàn)在參考文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上選擇以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，并對(duì)流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行考察，分別比較了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸水、乙腈-磷酸水、磷酸二氫鉀水、乙腈-磷酸二氫鉀水系統(tǒng)，加入三乙胺作改性劑，最終確定流動(dòng)相為乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液(磷酸調(diào)PH2.7)(2:98)(含0.2%三乙胺)。在此流動(dòng)相條件下，麻黃堿和偽麻黃堿能夠達(dá)到很好的分離，保留時(shí)間合適，操作簡(jiǎn)便易行。

[1] 中國(guó)藥典. 一部,2010:3000.

[2] 董自波，李超. HPLC法測(cè)定三拗片中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量.西北藥學(xué)雜志，2011，26(5)：329-330.

[3] 葛斌，羅燕梅，許愛霞，等. HPLC測(cè)定麻黃藥材中麻黃堿與偽麻黃堿的含量.中國(guó)藥學(xué)雜志，2008，43(3):173-175.

150040 哈爾濱,黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院