■萬順康 張翠香 林春榕 左紹遠(yuǎn) 錢金栿

（1.大理學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，云南大理 671000；2.大理學(xué)院藥學(xué)院，云南大理 671000）

隨著人們對(duì)畜禽產(chǎn)品質(zhì)量要求的不斷提高，對(duì)現(xiàn)代畜禽飼養(yǎng)業(yè)而言，不僅要提高畜禽的生產(chǎn)性能和肉質(zhì)，更要注重生產(chǎn)安全的產(chǎn)品。因此，積極尋找、研制開發(fā)純天然、無毒副作用、安全、無殘留、功效顯著的飼料添加劑成為目前畜禽飼料研究的重要課題。多糖是一類結(jié)構(gòu)復(fù)雜的生物大分子物質(zhì)，具有多種復(fù)雜而廣泛的生物學(xué)活性。研究表明，不同來源的多糖具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗病毒、抗菌、抑菌、調(diào)節(jié)血脂及抗腫瘤、抗氧化等多種活性[1-2]。蜂花粉（bee pollen）為蜜蜂采集的植物雄蕊花藥的粉狀物質(zhì)，含有豐富的營養(yǎng)成分及多種生物活性物質(zhì)。多糖是蜂花粉的主要活性成分之一，越來越受到人們的重視，但主要集中在提取工藝研究及對(duì)于人類疾病治療與預(yù)防方面的研究，對(duì)作為畜禽類飼料添加劑的研究較少[3-4]。而目前蕎麥蜂花粉多糖作為禽類飼料添加劑的研究尚未見報(bào)道[5-6]。為使蕎麥蜂花粉多糖應(yīng)用于畜禽生產(chǎn)提供依據(jù)，本試驗(yàn)以肉仔雞為試驗(yàn)對(duì)象，觀察了蕎麥蜂花粉多糖（polysaccharide of buckwheat bee pollen）對(duì)肉仔雞生長性能、免疫功能、血脂及抗氧化能力的影響。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

HH-W420/600恒溫水浴箱（金壇市瑞華儀器有限公司）,AG 135電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)，RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞東生化儀器廠），F(xiàn)D-1型冷凍干燥機(jī)（北京博醫(yī)康技術(shù)有限公司），UV2550型紫外可見分光光度計(jì)（日本島津蘇州儀器有限公司），TL5000bR低速大容量冷凍離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠），SHZ-3循環(huán)水多用真空泵（上海青浦滬西儀器廠），AU2700全自動(dòng)生化分析儀（日本奧林巴斯公司產(chǎn)品）。

1.2 主要試劑

甘油三酯(TG)、總膽固醇(T-CHO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒，南京建成生物工程研究所產(chǎn)品，IgA、IgM、IgG 測(cè)定試劑盒（免疫比濁法），上?？迫A生物工程股份有限公司產(chǎn)品。其余試劑均為國產(chǎn)分析純。蕎麥蜂花粉，購自云南滇峰蜂業(yè)有限責(zé)任公司（批號(hào)：20110512）。

1.3 蕎麥蜂花粉多糖

由本實(shí)驗(yàn)室制備。蕎麥蜂花粉-60℃冰凍48 h，粉碎，過60目篩后，分別用石油醚、95%乙醇回流脫脂、脫色，過濾，濾渣用10倍原料體積（m/v）的蒸餾水75℃水浴抽提2次，每次6 h。合并濾液，減壓濃縮至適當(dāng)體積，加無水乙醇至醇體積分?jǐn)?shù)為80%，4℃靜置過夜，離心收集沉淀。用Seaveg法脫蛋白（三氯甲烷∶正丁醇=4∶1）至280 nm無明顯紫外吸收峰，加無水乙醇至醇體積分?jǐn)?shù)為80%醇沉，離心收集沉淀，依次用無水乙醇、乙醚、丙酮洗滌3次，冷凍干燥，得灰白色蕎麥蜂花粉粗多糖。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

選擇體重相近、健康的200羽 1日齡AA肉仔雞，試驗(yàn)采用單因子設(shè)計(jì)，隨機(jī)分成4組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10羽。其中對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)1、2、3組分別在基礎(chǔ)日糧中添加500.0、1 000.0、1 500.0 mg/kg的蕎麥蜂花粉多糖。飼養(yǎng)試驗(yàn)期為42 d。試驗(yàn)前雞舍嚴(yán)格消毒，試驗(yàn)組和對(duì)照組均采用雙層籠養(yǎng)，自由采食，自由飲水，舍內(nèi)溫度、濕度、光照等遵循飼養(yǎng)管理規(guī)范，防疫按常規(guī)程序進(jìn)行。

1.5 基礎(chǔ)日糧

基礎(chǔ)日糧是按NRC(1994)推薦的肉仔雞營養(yǎng)需要配制的玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

2 測(cè)定指標(biāo)和方法

2.1 生長性能

試驗(yàn)期間每天記錄上料量和剩料量，分別在每周末的早上08：00空腹稱肉仔雞的體質(zhì)量，計(jì)算平均日增重、平均日采食量和料重比。

2.2 免疫器官指數(shù)

表1 日糧組成及營養(yǎng)水平

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每組隨機(jī)抽取4只雞稱空腹體重，頸部放血后屠宰，摘取脾臟、胸腺、法氏囊，剔除附著組織,用吸水紙拭去表面液體,準(zhǔn)確稱重，計(jì)算胸腺、脾臟和法氏囊指數(shù)。

免疫器官指數(shù)（g/kg）=器官重/活體重。

2.3 血清免疫球蛋白、血脂與抗氧化指標(biāo)

試驗(yàn)至42日齡分別從每重復(fù)隨機(jī)選取3只試驗(yàn)雞,頸靜脈采血,分離血清，于-80℃冰箱中保存，分別測(cè)定血清IgG、IgA、IgM、甘油三酯、總膽固醇及SOD、GSH-Px酶活性與MDA含量。

2.4 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel軟件整理，SPSS 13.0軟件One-way ANOVA進(jìn)行方差分析，用Duncan's法進(jìn)行多重比較，試驗(yàn)數(shù)據(jù)用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

3 結(jié)果與分析

3.1 蕎麥蜂花粉多糖對(duì)肉仔雞生長性能的影響（見表2）

表2 蕎麥蜂花粉多糖對(duì)肉仔雞生長性能的影響

由表2可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)1、2、3組日均采食量、平均日增重分別提高了1.45%、1.89%、2.31%與2.29%、4.64%、5.43%，差異不顯著（P＞0.05）。同時(shí)，料重比隨蕎麥蜂花粉多糖添加量的增加逐漸降低，但與對(duì)照組相比無明顯差異（P＞0.05）。表明肉仔雞飼料里添加蕎麥蜂花粉多糖可提高日均采食量和平均日增重，降低料重比，但無顯著影響。

3.2 蕎麥蜂花粉多糖對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響（見表3）

表3 蕎麥蜂花粉多糖對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響（g/kg）

由表3可知,與對(duì)照組相比，試驗(yàn)1、2和3組脾臟指數(shù)分別提高21.34%、31.18%、32.37%(P＜0.05)；胸腺指數(shù)分別提高17.63%、29.22%和30.48%(P＜0.05)；法氏囊指數(shù)分別提高6.90%、25.29%和28.74%，其中試驗(yàn)2、3組的法氏囊指數(shù)與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05），但試驗(yàn)1組與對(duì)照組相比則無明顯差異（P＞0.05）。另外，試驗(yàn)2、3組之間在脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)上無顯著差異(P＞0.05)。試驗(yàn)結(jié)果表明，基礎(chǔ)日糧中添加蕎麥蜂花粉多糖能顯著提高肉雞的免疫器官指數(shù)，從而提高肉雞的免疫機(jī)能。

3.3 蕎麥蜂花粉多糖對(duì)肉仔雞血清免疫球蛋白和血脂的影響（見表4）

表4 蕎麥蜂花粉多糖對(duì)肉仔雞血清免疫球蛋白和血脂的影響

從表4可見，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組均可促進(jìn)肉仔雞免疫球蛋白的增加。其中試驗(yàn)1、2、3組使IgG含量分別增加了13.59%、22.28%、34.42%，差異顯著（P＜0.05）；試驗(yàn)2、3組使IgA、IgM 含量分別增加了34.15%、39.84%與16.10%、20.34%，差異顯著（P＜0.05）；試驗(yàn)1組使IgA、IgM含量分別增加了8.94%、6.78%，差異不顯著（P＞0.05）。同時(shí)，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)2、3組使血清總膽固醇含量分別下降了14.54%、17.73%，差異顯著（P＜0.05），而試驗(yàn)1組使血清總膽固醇含量降低了5.67%，與對(duì)照組相比則無明顯差異（P＞0.05）。另外，試驗(yàn)1組甘油三酯比對(duì)照組提高2.90%，而試驗(yàn)2、3組能使甘油三酯含量分別下降0.72%、2.17%，但與對(duì)照組相比均無明顯差異（P＞0.05）。

3.4 蕎麥蜂花粉多糖對(duì)肉仔雞血清抗氧化指標(biāo)的影響(見表5)

表5 蕎麥蜂花粉多糖對(duì)肉仔雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表5可知，添加蕎麥蜂花粉多糖后，血清SOD、GSH-Px活性明顯升高。與對(duì)照組相比，差異顯著(P＜0.05)。試驗(yàn)1、2、3組SOD和GSH-Px活性比對(duì)照組分別提高了26.49%、34.29%、37.49%與15.62%、24.94%、34.54%。另外，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)1、2、3組還使血清MDA含量分別降低了12.48%、14.93%與16.82%，差異均顯著（P＜0.05）。表明蕎麥蜂花粉多糖具有提高肉仔雞抗氧化能力的作用。

4 討論

4.1 蕎麥蜂花粉多糖對(duì)肉仔雞生長性能的影響

在基礎(chǔ)日糧中添加不同水平蕎麥蜂花粉多糖后，試驗(yàn)1、2、3組日均采食量、平均日增重分別比對(duì)照組提高了1.45%、1.89%、2.31%與2.29%、4.64%、5.43%，但差異不顯著（P＞0.05）。同時(shí)，料重比隨蕎麥蜂花粉多糖添加量的增加逐漸降低，但與對(duì)照組相比無明顯差異（P＞0.05）。結(jié)果與相關(guān)報(bào)道類似[7-8]。

4.2 蕎麥蜂花粉多糖對(duì)肉仔雞免疫功能的影響

脾臟、胸腺和法氏囊是禽類的重要免疫器官，禽類的許多傳染病往往會(huì)侵害這3個(gè)免疫器官，使其腫大或萎縮。免疫器官指數(shù)是免疫器官重與活體重的比值，它是衡量動(dòng)物機(jī)體免疫水平的重要指標(biāo)。脾臟是機(jī)體最大的外周免疫器官，是機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫的中心，是產(chǎn)生致敏淋巴細(xì)胞和抗體的重要場所。胸腺參與機(jī)體的非特異性免疫功能，對(duì)細(xì)胞免疫以及體液免疫都有重要的調(diào)節(jié)作用。法氏囊是禽類特有的中樞免疫器官，是B細(xì)胞分化成熟的場所。另外，血清IgG、IgA、IgM 3種免疫球蛋白是參與體液免疫的主要抗體，三者在血清中的含量是判斷動(dòng)物體液免疫功能的重要指標(biāo)之一[9-10]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在飼料中添加500.0、1 000.0、1 500.0 mg/kg的蕎麥蜂花粉多糖，可顯著提高肉仔雞脾臟指數(shù)與胸腺指數(shù)(P＜0.05)，1 000.0、1 500.0 mg/kg的添加水平還使法氏囊指數(shù)明顯升高(P＜0.05)。試驗(yàn)同時(shí)觀察到，飼料中添加蕎麥蜂花粉多糖，可使血清IgG的含量顯著升高(P＜0.05)，1 000.0、1 500.0 mg/kg的添加水平使IgA、IgM含量明顯升高（P＜0.05）。上述結(jié)果表明，飼料中添加蕎麥蜂花粉多糖能顯著增強(qiáng)肉仔雞的免疫功能，從而增強(qiáng)肉仔雞抵抗疾病的能力。

4.3 蕎麥蜂花粉多糖對(duì)肉仔雞血脂與抗氧化能力的影響

膽固醇與甘油三酯是血脂的主要成分。尤其是膽固醇，是動(dòng)脈粥樣硬化形成的主要原因,血液中長期過高的膽固醇及血管壁上過多的脂類容易被自由基氧化,形成脂質(zhì)過氧化物質(zhì),在血管壁上沉積,從而導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化。動(dòng)脈粥樣硬化可導(dǎo)致動(dòng)物心、腦、血管疾病。本試驗(yàn)結(jié)果表明，蕎麥蜂花粉多糖對(duì)肉仔雞血清甘油三酯含量無明顯影響（P＞0.05），但1 000.0與1 500.0 mg/kg的蕎麥蜂花粉多糖添加水平可明顯降低肉仔雞血清總膽固醇含量（P＜0.05），提示蕎麥蜂花粉多糖可能具有預(yù)防肉仔雞動(dòng)脈粥樣硬化的作用。

自由基是機(jī)體正?；虍惓Ｉ磻?yīng)的產(chǎn)物,它的生成會(huì)對(duì)包括免疫細(xì)胞在內(nèi)的所有細(xì)胞造成嚴(yán)重毒害,不僅損害細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu),而且影響蛋白質(zhì)功能、DNA結(jié)構(gòu)和細(xì)胞內(nèi)能量代謝。而超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）是體內(nèi)最重要的抗氧化酶類，在機(jī)體抗氧化、抗自由基損傷中起著重要作用，能有效地清除體內(nèi)產(chǎn)生的自由基，從而維持體內(nèi)自由基產(chǎn)生和清除的動(dòng)態(tài)平衡，減少對(duì)實(shí)質(zhì)器官的病理損害，提高機(jī)體的抗病力，對(duì)機(jī)體具有較好的保護(hù)作用。MDA是體內(nèi)自由基反應(yīng)的終末產(chǎn)物，其含量可間接反映體內(nèi)自由基的多少及反應(yīng)的強(qiáng)度，也可以間接反映組織損傷程度。本試驗(yàn)表明，在飼料中添加500.0、1 000.0、1 500.0 mg/kg的蕎麥蜂花粉多糖，可使血清SOD與GSH-Px活性顯著提高，MDA含量明顯降低，且與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05）。表明蕎麥蜂花粉多糖具有較好的清除自由基能力，保護(hù)機(jī)體免受過氧化損傷的作用。

5 小結(jié)

日糧中添加500.0、1 000.0、1 500.0 mg/kg的蕎麥蜂花粉多糖能提高肉仔雞免疫器官指數(shù)和血清免疫球蛋白含量，促進(jìn)肉仔雞免疫功能，可降低血清膽固醇含量，并提高肉仔雞的抗氧化能力。提示蕎麥蜂花粉多糖可能是一種較好的肉仔雞免疫增強(qiáng)劑與抗氧化劑。