趙嵩月 陳 彤* 趙 洪 張要武 郭 燕

1.昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，云南 昆明 650500;2.云南云科藥業(yè)有限公司，云南 昆明 650033

血塞通注射液是以三七提取物——三七總皂苷為藥效成分的中藥注射液，用于中風(fēng)偏癱、瘀血阻絡(luò)證;動(dòng)脈粥狀硬化性腦梗塞、腦栓塞、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞屬瘀血阻絡(luò)證者，療效顯著，廣泛用于心腦血管疾病的治療，但臨床不良反應(yīng)時(shí)有報(bào)道［1－5］。三七總皂苷在酸性和強(qiáng)堿性條件下，易發(fā)生水解脫糖基，生成極性小的甙元［6］。前期研究發(fā)現(xiàn)血塞通注射液的最適宜pH為6－8［7］，加入磷酸鹽緩沖液 (pH7.4)能提高血塞通注射液的穩(wěn)定性，本實(shí)驗(yàn)將進(jìn)一步考察磷酸鹽緩沖液 (pH7.4)的濃度對(duì)血塞通注射液穩(wěn)定性的影響。

1 材料

1.1 儀器 2010AHT高效液相色譜儀 (日本島津);天精STY－1滲透壓測(cè)定儀 (天津天大天發(fā)科技有限公司); CP225D電子天平 (北京塞多利斯儀器有限公司);101A－2E型電熱鼓風(fēng)干燥箱 (上海實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司); SK3300HP型超聲波清洗儀 (上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司);PHS－25型PH計(jì)(上海雷磁儀器廠);0.22μm針前濾器(天津津騰公司)。

1.2 試藥 色譜純甲醇 (德國(guó)默克公司);色譜純乙腈(德國(guó)默克公司);分析純鹽酸 (重慶川東化工集團(tuán)有限公司化學(xué)試劑廠);分析純氫氧化鈉 (天津市化學(xué)試劑三廠);磷酸二氫鈉(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);三七皂苷R1對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):101021 );人參皂苷Rg1對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):101021);人參皂苷Rb1.對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):101021);三七總皂苷 (云南云科藥業(yè)有限公司提供，批號(hào):101003)。

2 方法

2.1 血塞通注射液中三個(gè)有效成分的含量測(cè)定方法 按照血塞通注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中［8］含量測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定注射液中R1、Rg1以及Rb1的含量。

2.1.1 色譜條件 色譜柱:日本島津 VP－ODS C18柱(150mm×4.6mm);流動(dòng)相:A:乙腈，B:水 (0－20min A;20，B:80;21－26min A:40，B:60;26－30min A:20，B:80);流速:1.0ml·min－1;檢測(cè)波長(zhǎng): 203nm;進(jìn)樣量:10μl。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 分別取在60℃減壓干燥2小時(shí)的R1對(duì)照品、Rg1對(duì)照品和Rb1對(duì)照品適量，分別精密稱(chēng)定，置10ml量瓶中，加90%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得 (制成每 1ml約含 R1 0.4mg、Rg1 1.5 mg、Rb1 1.5 mg)。于HPLC儀上，進(jìn)樣10μl。

2.2 磷酸鹽緩沖液的配制 (pH7.4) 精密稱(chēng)取磷酸二氫鈉1.36 g，加入0.1 mol/L的氫氧化鈉溶液79ml溶解后加新沸過(guò)的冷水定容至200ml即得。

2.3 不同濃度磷酸鹽緩沖液 (pH7.4)的配制 分別精密吸取2.2項(xiàng)下的磷酸鹽緩沖液2ml、4ml、6ml、8ml、10ml、20ml、30ml、40ml、50ml，置200ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，得到濃度為 1%、2%、3%、4%、5%、10%、15%、20%、25%的磷酸鹽緩沖液，分別用0.1mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值為7.4。

2.4 含不同濃度磷酸鹽緩沖液 (pH7.4)的血塞通注射液配制 分別稱(chēng)取三七總皂苷約7.5g，共9份，精密稱(chēng)定，稱(chēng)取氯化鈉1.2g置燒杯中，分別精密量取上述不同濃度的磷酸鹽緩沖液150ml，加熱溶解，放冷至室溫，調(diào)節(jié)pH至7.4，分別用0.22μm的針前濾器過(guò)濾后注入10ml安瓿中，將安瓿熔封。

2.5 高溫試驗(yàn) 取上述2.4項(xiàng)下的血塞通注射液，置于溫度為80℃ 的干燥箱中，于第0天、第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天、第8天、第9天、第10天、第11天、第12天取樣，放置至室溫，搖勻，精密吸取1ml溶液至10ml的量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，于HPLC儀上，進(jìn)樣10μl。測(cè)定R1、Rg 1和Rb1的含量。

3 結(jié)果

80℃高溫條件，加熱不同時(shí)間，含不同濃度磷酸鹽緩沖液(pH7.4)的血塞通注射液R1(表1)、Rg1(表2)和Rb1(表3)的含量(%)。

表1 含不同濃度磷酸鹽緩沖液 (pH7.4)的血塞通注射液R1的含量 (%)

表2 含不同濃度磷酸鹽緩沖液 (pH7.4)的血塞通注射液Rg1的含量(%)

表3 含不同濃度磷酸鹽緩沖液 (pH7.4)的血塞通注射液Rb1的含量 (%)

4 討論

結(jié)果顯示:在80℃條件下，血塞通注射液的三種成分R1、Rg1和Rb1的含量的降低與加入磷酸鹽緩沖液 (pH7.4)的濃度有關(guān)。隨著磷酸鹽緩沖液 (pH7.4)濃度的提高，血塞通注射液三種成分含量穩(wěn)定，加入濃度大于5%的磷酸鹽緩沖液(pH7.4)能有效提高血塞通注射液的穩(wěn)定性。

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