劉文輝，高占玲，李忠強(qiáng)

1.山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，山東煙臺(tái)264199;2.山東中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院

1 NK T細(xì)胞

1.1 NK T細(xì)胞的定義、來(lái)源和分布 自然殺傷T細(xì)胞(NK T細(xì)胞)是指能同時(shí)組成表達(dá)CD56(小鼠1.1)和TCR-CD3復(fù)合受體的T細(xì)胞。此類細(xì)胞既表達(dá)αβ T細(xì)胞受體，又?jǐn)y帶NK細(xì)胞的表面標(biāo)記，可在胸腺內(nèi)或胸腺外(胚肝)分化發(fā)育，在傳統(tǒng)T細(xì)胞分布的地方均有NK T細(xì)胞的分布，但以胸腺、肝為主;脾、骨髓次之;淋巴結(jié)、皮膚黏膜和外周血最少見［1］。NK T細(xì)胞占肝臟固有淋巴細(xì)胞的30% ～50%、骨髓總T細(xì)胞的20% ～30%、胸腺T細(xì)胞的0.3% ～0.5%、脾臟淋巴細(xì)胞的0.5% ～1%、外周淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞的0.1%［2］。人NK T細(xì)胞約占外周血T淋巴細(xì)胞的0.09%［3］，小鼠NK T細(xì)胞占外周血T細(xì)胞的1% ～2%、骨髓T細(xì)胞的 30%［4］。

1.2 NK T細(xì)胞亞型及其表面受體 NK T細(xì)胞的TCR先于NKR表達(dá)，CD1d與未成熟NK T細(xì)胞的TCR相互作用在共刺激分子CD80/CD86和/或B7的輔助下上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA-3的表達(dá)，使NK T細(xì)胞活化并增殖［5-6］。隨后表達(dá)的NKR削弱這種增殖反應(yīng)以避免成熟NK T細(xì)胞潛在的自身反應(yīng)性，這與細(xì)胞在胸腺中停止分化或長(zhǎng)期定居于外周有關(guān)［7］。

NK T細(xì)胞絕大多數(shù)為CD4-CD8-雙陰性，少數(shù)為CD4+單陽(yáng)性。其表面的TCR表達(dá)密度較低，缺乏多樣性，抗原識(shí)別譜窄，可識(shí)別CD1分子所提呈的磷脂和糖脂類抗原。其主要特征為T細(xì)胞抗原受體(TCR)基因表達(dá)的恒定性、CD1d的限制性以及細(xì)胞因子產(chǎn)生的迅速、高水平性。

在不同的免疫應(yīng)答過(guò)程中，NK T細(xì)胞參與的反應(yīng)有所差異。最新研究發(fā)現(xiàn)，CD4+NK T細(xì)胞和CD4-CD8-NK T細(xì)胞代表兩個(gè)功能不同的細(xì)胞亞群。因?yàn)樗鼈冊(cè)诩?xì)胞因子的分泌譜和趨化因子受體、整合素及NK細(xì)胞受體的表達(dá)方面均存在很大的差異。CD4+NK T細(xì)胞是IL-4和IL-13唯一的生產(chǎn)者，而CD4-CD8-NK T細(xì)胞則主要產(chǎn)生Th1型細(xì)胞因子，并表達(dá)多種NK細(xì)胞受體。這種發(fā)現(xiàn)也許可以解釋為什么在有些情況下NK T細(xì)胞能促進(jìn)Th2型應(yīng)答，而在另外的情況下卻引起Th1型應(yīng)答［8］。

1.3 NK T細(xì)胞的配體 NK T細(xì)胞識(shí)別CD1分子所提呈的磷脂和糖脂類抗原，且不受MHC限制。被上述抗原激活后迅速產(chǎn)生 IL-4、IFN-γ、IL-10、IL-13等細(xì)胞因子，進(jìn)而介導(dǎo)全身的抗感染、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等。第1個(gè)被鑒定的此類多肽是一種從植物中提取的半乳糖神經(jīng)酰胺(alpha-galactosylceramide，α-Galcer)。由于相對(duì)分子質(zhì)量?jī)H在800 000左右，極微量的α-Galcer即能介導(dǎo)NK T細(xì)胞與CD1d分子間的結(jié)合和刺激作用。但目前的實(shí)驗(yàn)資料尚未證實(shí)α-Galcer在體內(nèi)的具體效應(yīng)途徑。很難判斷α-Galcer是通過(guò)大量產(chǎn)生細(xì)胞因子，還是早期使NK T細(xì)胞短期下降，或者是投藥24～48 h后NK T細(xì)胞數(shù)大量增加，對(duì)免疫調(diào)節(jié)發(fā)揮主要作用。亦無(wú)法證實(shí)不同的脂類或糖脂類是否刺激不同的NK T細(xì)胞亞群。尤其是無(wú)法證實(shí)經(jīng)α-Galcer激活的NK T細(xì)胞同體內(nèi)生理性脂類或糖脂類所能激活的NK T細(xì)胞是否為同一個(gè)群體，或有類似的免疫調(diào)節(jié)功能。故對(duì)NK T細(xì)胞配體及其各自的效應(yīng)途徑的研究有待進(jìn)一步深入。

1.4 NK T細(xì)胞的主要效應(yīng)機(jī)制 NK T細(xì)胞被激活后，通過(guò)自身受體/配體及分泌大量的細(xì)胞因子(IL-4、IL-5、IFN-γ、TNF-α、IL-10 和 IL-13 等)，參與機(jī)體抗感染、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等。效應(yīng)途徑:①分泌穿孔素或通過(guò) Fas/FasL途徑殺傷靶細(xì)胞;② 分泌IL-4誘導(dǎo)CD4+Th0細(xì)胞向CD4+Th2細(xì)胞分化，參與體液免疫應(yīng)答，誘導(dǎo)B細(xì)胞發(fā)生IgE類別轉(zhuǎn)換;③ 分泌INF-γ和IL-12誘導(dǎo)CD4+Th0細(xì)胞向CD4+Th1細(xì)胞分化，增強(qiáng)細(xì)胞免疫應(yīng)答，并可激活巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞，增強(qiáng)機(jī)體抗感染、抗腫瘤作用;④ 分泌MCP-1α、MIP-1β等多種趨化因子參與炎癥反應(yīng)。

1.5 NK T細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能 被活化的NK T細(xì)胞能夠分泌Th1/Th2兩類細(xì)胞因子，譬如IFN-γ能夠促使Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答，并可激活巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞，增強(qiáng)機(jī)體抗感染和抗腫瘤免疫;IL-4能促使Th0細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化，進(jìn)而誘導(dǎo)和促進(jìn)B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答。NK T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子還能作用于自身，表現(xiàn)出類似NK細(xì)胞的效應(yīng)，介導(dǎo)機(jī)體的固有免疫應(yīng)答。研究表明，肝臟中的枯否氏細(xì)胞可以產(chǎn)生IL-12和IL-18［9］，這些細(xì)胞因子可以增加NK T細(xì)胞的腫瘤殺傷作用和降低自身免疫應(yīng)答反應(yīng)。因此，NK T細(xì)胞在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著不容忽視的免疫學(xué)效應(yīng)。

2 自身免疫性肝病炎

2.1 發(fā)現(xiàn)、定義及特點(diǎn) Waldenstrom于1950年首先發(fā)現(xiàn)一種特殊類型的慢性肝炎，主要多發(fā)于女性，伴有黃疸，丙種球蛋白明顯升高及閉經(jīng)，后期常發(fā)展成肝硬化。此發(fā)現(xiàn)得到Krunkel和Berm等的證實(shí)。先后經(jīng)各國(guó)專家定名為自身免疫性肝炎(AIH)。自身免疫性肝炎病因不明，以血清中出現(xiàn)非器官和肝特異的自身抗體、血清轉(zhuǎn)氨酶和IgG增高、組織學(xué)上門脈大量漿細(xì)胞浸潤(rùn)為特點(diǎn)，在治療上常常對(duì)激素等免疫抑制劑有反應(yīng)。AIH與其他自身免疫性疾病相似，多發(fā)于女性，高球蛋白血癥伴有特異性器官損傷。故推測(cè)，AIH是在機(jī)體免疫功能異常的基礎(chǔ)上發(fā)生的。

2.2 分型 根據(jù)所出現(xiàn)自身抗體的類型，AIH可被分為兩大類型。Ⅰ型患者抗核抗體(ANA)和/或抗平滑肌抗體(SMA)陽(yáng)性，是最為常見的一類。ANA的主要靶抗原為著絲粒、52K SSA/Ro、組蛋白、核糖核蛋白;SMA的主要靶抗原為肌動(dòng)蛋白(F，G)、微管蛋白、中間絲。Ⅱ型患者抗肝/腎微粒體Ⅰ型抗體(Anti-LKM1)和/或肝細(xì)胞胞漿(LC1)陽(yáng)性，主要見于兒童(2～14歲)，成人只占4%，高發(fā)于西歐。LKM1的主要靶抗原為細(xì)胞色素單氧化酶P450ⅡD6;LC1的靶抗原為細(xì)胞胞漿蛋白。此外還存在一類發(fā)病極少的AIH，自身抗體表現(xiàn)為可溶性肝抗原(SLA)和/或肝-胰(LP)陽(yáng)性，SLA的靶抗原為細(xì)胞角蛋白8，18;LP的靶抗原為細(xì)胞胞液非角蛋白。此型的存在尚未獲得共識(shí)，有人將此型肝炎單獨(dú)列為Ⅲ型自身免疫性肝炎或認(rèn)為是Ⅰ型的變異。

2.3 免疫機(jī)制 在環(huán)境和基因易感性等誘發(fā)因素的基礎(chǔ)上，機(jī)體對(duì)自身組織蛋白失去耐受導(dǎo)致自身抗體及(或)自身致敏淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生，攻擊自身靶抗原細(xì)胞和組織，進(jìn)而使之產(chǎn)生病理改變和功能障礙。AIH的主要免疫病理?yè)p傷機(jī)制:① 通過(guò)Fas/FasL系統(tǒng)介導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡。AIH患者肝細(xì)胞上表達(dá)Fas上調(diào)，NK T細(xì)胞通過(guò)Fas/FasL途徑與靶細(xì)胞結(jié)合，介導(dǎo)靶細(xì)胞的損傷。有研究表明，F(xiàn)as表達(dá)水平與自身免疫性肝炎的嚴(yán)重程度密切相關(guān)［10］。② 從體液免疫分析，自身免疫性肝炎患者可能具有抑制性T細(xì)胞功能缺陷，不能正常抑制對(duì)自身抗原有反應(yīng)性的B細(xì)胞，而B細(xì)胞產(chǎn)生針對(duì)自身抗原的自身抗體，進(jìn)一步可通過(guò)ADCC(抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒)作用損傷自身細(xì)胞、組織。③從細(xì)胞免疫角度分析，介導(dǎo)AIH的相關(guān)抗原異常表達(dá)，細(xì)胞因子分泌失衡，打破了T細(xì)胞的免疫耐受，從而結(jié)合自身細(xì)胞，引起損傷。細(xì)胞因子相互調(diào)節(jié)，改變淋巴細(xì)胞周圍的微環(huán)境，進(jìn)而干擾細(xì)胞分化，介導(dǎo)細(xì)胞和體液免疫，引起肝細(xì)胞損傷［11］。

3 NK T細(xì)胞與自身免疫性肝炎的相關(guān)性

NK T細(xì)胞是一種同時(shí)具有NK細(xì)胞和T細(xì)胞部分表型及功能的細(xì)胞亞群。它能將先天性免疫應(yīng)答和獲得性免疫應(yīng)答連接起來(lái)，限制性識(shí)別CD1d-糖脂抗原、活化后迅速分泌大量細(xì)胞因子從而調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫應(yīng)答，肝臟中NK T細(xì)胞占總T細(xì)胞的30% ～50%，表型復(fù)雜并且活化后的NK T細(xì)胞能夠快速產(chǎn)生大量的Th1/Th2類細(xì)胞因子(如IFN-γ和IL-4)，進(jìn)而參與調(diào)節(jié)Th1/Th2免疫反應(yīng)的平衡。亦分泌某些效應(yīng)分子，如TNF-α、FasL等，因此，NK T細(xì)胞可直接或間接介導(dǎo)諸多肝臟疾病，尤其與自身免疫性肝病的發(fā)生密切相關(guān)。

NK T細(xì)胞自身可分泌穿孔素或通過(guò)Fas/FasL途徑介導(dǎo)肝細(xì)胞的損傷。其分泌的IL-4發(fā)揮抗炎和免疫抑制功能，并對(duì)Treg細(xì)胞的增殖和分化起調(diào)控作用。當(dāng)切除新生小鼠胸腺造成NK T細(xì)胞缺失時(shí)，小鼠易發(fā)生自身免疫疾病。有研究表明，與正常人相比，AIH患者體內(nèi)NK T細(xì)胞數(shù)量減少、活性下降，產(chǎn)生IL-4水平降低，導(dǎo)致其功能受抑制，這可能是AIH的發(fā)病機(jī)制之一。NK T細(xì)胞分泌的IL-4促進(jìn)外周血B細(xì)胞增殖，并能干擾CD4+T細(xì)胞的細(xì)胞因子的分泌。IL-4能夠誘導(dǎo)CD4+Th0細(xì)胞向CD4+Th2細(xì)胞分化，調(diào)控體液免疫反應(yīng)，介導(dǎo)自身抗原-抗體復(fù)合物的形成，NK T細(xì)胞通過(guò)Fc受體識(shí)別這種復(fù)合物，殺傷肝臟細(xì)胞。NK T細(xì)胞還可以與調(diào)節(jié)性細(xì)胞(Treg cells)直接接觸，促進(jìn)后者的增殖［12］，進(jìn)而調(diào)控自身免疫平衡。NK T細(xì)胞分泌IFN-γ能夠影響Th1細(xì)胞因子的分泌，通過(guò)調(diào)控巨噬細(xì)胞、補(bǔ)體系統(tǒng)而介導(dǎo)自身免疫性肝炎。綜上，NK T細(xì)胞及其分泌細(xì)胞因子的紊亂，可使自身免疫失衡，介導(dǎo)自身免疫性肝炎的發(fā)生。

4 展望

NK T能夠分泌IL-4、IFN-γ，二者分別促進(jìn)體液免疫和細(xì)胞免疫，同時(shí)二者又相互抑制，對(duì)維持細(xì)胞免疫、體液免疫的平衡意義重大。一種細(xì)胞既有免疫調(diào)節(jié)性，又具有類似細(xì)胞毒性，在機(jī)體的各類免疫應(yīng)答中均有調(diào)節(jié)、介導(dǎo)作用，被認(rèn)為是自身免疫性疾病中最主要的干預(yù)靶點(diǎn)之一。但其與自身免疫性肝炎的相關(guān)性有待進(jìn)一步闡明，如自身免疫性肝炎患者不同時(shí)期體內(nèi)NK T細(xì)胞數(shù)量的變化規(guī)律、細(xì)胞因子的分泌類型、具體的信號(hào)傳導(dǎo)途徑等。因此，我們需要對(duì)與自身免疫性肝炎相關(guān)的NK T細(xì)胞作更為深入研究探討，這將為自身免疫性肝炎以NK T細(xì)胞為干預(yù)靶點(diǎn)，提供新的理論依據(jù)和治療思路。

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