段曉輝，于艷芳，裴志萍，陳 杰，張艷麗，王延臣

（1.河北工程大學(xué)附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科，河北邯鄲056002；2.河北省邯鄲市第二醫(yī)院普外科，河北邯鄲056002）

·論 著·

30例鼻腔惡性乳頭狀瘤HGF及其受體c-M et的表達(dá)分析

段曉輝1，于艷芳1，裴志萍2，陳 杰1，張艷麗1，王延臣1

（1.河北工程大學(xué)附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科，河北邯鄲056002；2.河北省邯鄲市第二醫(yī)院普外科，河北邯鄲056002）

目的 探討鼻腔惡性腫瘤肝細(xì)胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）及其受體c-Met的表達(dá)陽性率以及二者的表達(dá)分布。方法選擇2005年1月—2010年12月確診為鼻腔惡性乳頭瘤患者30例，以同期確定為鼻息肉28例和慢性肥厚性鼻炎18例為對照組，對手術(shù)切除組織采用免疫組織化學(xué)方法SP法檢測HGF、c-Met的表達(dá)，統(tǒng)計(jì)其染色得分，計(jì)算2組的中位數(shù)并進(jìn)行比較。結(jié)果2組的HGF和c-Met染色得分均為偏態(tài)分布，鼻息肉和慢性肥厚性鼻炎的HGF、c-Met得分都≤240分，鼻腔惡性乳頭瘤二者表達(dá)得分都高于301分，且分布集中程度較良性鼻腔增生組織高。良、惡性組織HGF、c-Met的得分值比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論HGF和c-Met共同高表達(dá)或單獨(dú)的高表達(dá)都與鼻腔惡性乳頭狀瘤的發(fā)生有關(guān)。設(shè)計(jì)針對HGF和c-Met治療措施可能對惡性乳頭狀瘤的治療起到有利作用。

乳頭狀瘤；原癌基因蛋白質(zhì)c-met；基因表達(dá)

鼻腔惡性乳頭瘤是主要發(fā)生在鼻腔鼻竇的一種惡性腫瘤，男性發(fā)病率高于女性，其發(fā)病原因尚未完全明了，但與反復(fù)發(fā)作的良性鼻腔內(nèi)翻性乳頭狀瘤有關(guān)，鼻腔內(nèi)翻性乳頭狀瘤是上皮源性腫瘤，占鼻腔

腫瘤的0.4％～4.7％，反復(fù)發(fā)作和容易惡變是其臨床特征。肝細(xì)胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）及其受體c-Met在眾多腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到重要的作用，且與其預(yù)后密切相關(guān)［1-2］。本文對手術(shù)切除的鼻腔病變組織HGF和c-Met進(jìn)行檢測，分析其表達(dá)量的變化及表達(dá)分布規(guī)律。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇河北工程大學(xué)附屬醫(yī)院2005年1月—2010年12月確診為鼻腔惡性乳頭狀瘤30例，男性22例，女性8例，年齡33～57歲，平均（45±11）歲。選取良性鼻腔組織增生性疾病（鼻息肉與慢性肥厚性鼻炎）46例作為對照組，男性34例，女性12例，年齡27～48歲，平均（36±10）歲。所有對象均通過鼻內(nèi)鏡下手術(shù)切除或鼻側(cè)切開切除病變組織。2組一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 主要儀器及試劑：石蠟切片機(jī)為SYD-S1020，閱片顯微鏡為OLYMPUS光學(xué)顯微鏡，羊抗人HGF多克隆抗體、鼠抗人c-Met多克隆抗體購自北京中山生物技術(shù)有限公司，含兔抗羊二抗、兔抗鼠二抗的SP試劑盒購自福州邁新公司。

1.3 方法：所有入選標(biāo)本均來自手術(shù)切除的病變組織，切除組織經(jīng)福爾馬林固定后采用SP法免疫組織化學(xué)染色，所有標(biāo)本免疫組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)條件一致，用PBS代替一抗做陰性對照，采用已知道的喉癌標(biāo)本作為HGF和c-Met的陽性對照。染色結(jié)果為HGF與c-Met均定位胞漿，顏色及形態(tài)為介于淡黃色至棕褐色顆粒，所有染色后圖片均由固定的二位病理醫(yī)師雙盲法閱片。準(zhǔn)確計(jì)數(shù)不同視野下200個(gè)細(xì)胞，判斷細(xì)胞染色程度并統(tǒng)計(jì)著色細(xì)胞個(gè)數(shù)，計(jì)分規(guī)則為無色0分，淺色1分，深色2分，并計(jì)算每個(gè)樣本總分?jǐn)?shù)=∑（染色得分×細(xì)胞數(shù)）。分值介于0～400。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS 11.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，統(tǒng)計(jì)HGF和c-Met共表達(dá)與單獨(dú)表達(dá)的比例并進(jìn)行比較，采用秩和檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HGF和c-Met表達(dá)分布：2組HGF和c-Met染色得分均為偏態(tài)分布，鼻息肉和慢性肥厚性鼻炎的HGF、c-Met得分都≤240分。其中HGF染色得分80～240分，介于101～120分之間的例數(shù)最多，達(dá)到19例（41.3％）。c-Met染色得分21～180分，其中40～60分之間例數(shù)最多，高達(dá)25例（54.3％）。

鼻腔惡性乳頭瘤二者表達(dá)得分都高于301分，且集中程度較良性鼻腔增生組織高，分值分布主要集中在321～380分。

2.2 HGF、c-Met表達(dá)中位數(shù)比較：良、惡性組織HGF、c-Met中位數(shù)分別為126.5、71.5、356.5、328.5，惡性組織HGF、c-Met中位數(shù)值明顯高于良性組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

3 討 論

HGF是一種具有很強(qiáng)刺激作用的絲裂原，最初是作為一種肝細(xì)胞絲裂原從部分肝切除小鼠的血清中得以分離，之后從多種來源的標(biāo)本中得到。HGF大部分由間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，以旁分泌形式作用于上皮細(xì)胞，構(gòu)成間質(zhì)細(xì)胞-上皮細(xì)胞相互影響關(guān)系，主要刺激上皮細(xì)胞增殖、運(yùn)動(dòng)，還能促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。c-Met是HGF特異性的受體，定位于細(xì)胞膜，其本身是一種原癌基因，具有酪氨酸蛋白激酶活性，其與HGF結(jié)合后信號主要介導(dǎo)細(xì)胞的增殖、運(yùn)動(dòng)，能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性表現(xiàn)，且具有促進(jìn)腫瘤血管生成，增加腫瘤生長的營養(yǎng)、氧供，對腫瘤生長具有促進(jìn)作用［3-4］。

人們早就注意到了HGF、c-Met對腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用，張敏等［5］研究口腔惡性腫瘤的發(fā)展與HGF、c-Met的關(guān)系表明，二者同步陽性表達(dá)在口腔癌癥的發(fā)展中是具有協(xié)同作用，且還說明惡性的口腔癌組織中的HGF、c-Met表達(dá)具有一致性。有研究［6］表明，HGF能夠在成纖維細(xì)胞中被TGF-β、IL-1β所誘導(dǎo)表達(dá)，且HGF的表達(dá)對牙周組織上皮完整性的維持與修復(fù)以及牙周炎中的結(jié)合上皮的根尖遷移有相關(guān)性［7-9］，提示HGF在組織修復(fù)中起到作用。文獻(xiàn)［10］表明血管生成是腫瘤生長與增殖的必要條件，同時(shí)也介導(dǎo)腫瘤的轉(zhuǎn)移，血管生成是影響腫瘤預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。HGF、c-Met信號通路能增強(qiáng)血管生長因子與血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤的生長，且HGF/c-Met系統(tǒng)還能降低腫瘤細(xì)胞間的黏附，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解，增加腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的脫落與轉(zhuǎn)移能力［11］。

本研究結(jié)果顯示，惡性鼻腔病變組織的HGF、c-Met與良性鼻腔病變組織在分布區(qū)間上存在明顯的界限，且惡性組織內(nèi)的HGF、c-Met中位數(shù)值明顯的高于良性組織。表明HGF、c-Met的表達(dá)上調(diào)可能與鼻腔惡性乳頭瘤的發(fā)生發(fā)展存在密切關(guān)系，這一結(jié)果與二者在其他腫瘤組織中的表達(dá)也相符

合［12］。說明HGF、c-Met與不同部位的細(xì)胞惡變和腫瘤的發(fā)展有關(guān)。檢測HGF、c-Met的表達(dá)對判斷惡性腫瘤的預(yù)后具有指導(dǎo)意義。鼻內(nèi)翻性乳頭瘤多惡變?yōu)閻盒员乔荒[瘤［13］，我們猜測HGF、c-Met可能在這種惡變中起到重要的作用。值得注意的是，HGF/c-Met系統(tǒng)表達(dá)上調(diào)在許多惡性組織均被檢測到，檢測HGF、c-Met的表達(dá)量對于判斷其他組織細(xì)胞是否具有惡變傾向尚不清楚，且檢測HGF、c-Met缺乏一定的特異性，作為判斷腫瘤惡性程度的高低和預(yù)后的指標(biāo)還需與其他特異性高的實(shí)驗(yàn)聯(lián)合判斷。

HGF和c-Met不僅與良性細(xì)胞的惡變有關(guān)，并且還能促進(jìn)惡性細(xì)胞的生長和侵襲，檢測具有惡變潛能組織的HGF、c-Met能有效及時(shí)地估計(jì)疾病發(fā)生惡變的可能性，并為研究以HGF、c-Met為靶點(diǎn)的腫瘤治療方案提供新的依據(jù)。

［1］ YAP TA，SANDHU SK，ALAM SM，et al.HGF/c-MET targeted therapeutics：novel strategies for cancermedicine［J］.Curr Drug Targets，2011，12（14）：2045-2058.

［2］ VARKARIS A，CORN PG，GAUR S，et al.The role of HGF/c-Met signaling in prostate cancer progression and c-Met inhibitors in clinical trials［J］.Expert Opin Investig Drugs，2011，20（12）：1677-1684.

［3］ YAP TA，SANDHU SK，ALAM SM，et al.HGF/c-MET targeted therapeutics：novel strategies for cancermedicine［J］.Curr Drug Targets，2011，12（14）：2045-2058.

［4］ GRZELAKOWSKA-SZTABERTB，DUDKOWSKAM.Paradoxicalaction of growth factors：antiproliferative and proapoptotic signaling by HGF/c-MET［J］.Growth Factors，2011，29（4）：105-118.

［5］ 張敏，雷志敏，閆國勝，等.HGF/c-Met、VEGF和uPA在口腔鱗癌組織中的表達(dá)及意義［J］.臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志，2010，26（1）：8-10.

［6］ 武孕霞，段燕.HGF在人牙周膜成纖維細(xì)胞中的表達(dá)［J］.臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志，2011，27（10）：584-586.

［7］ 劉麗英，趙滿琳，崔占琴，等.齦溝液中HGF及IL-2β含量與牙周炎關(guān)系的研究［J］.河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，27（3）：185-187.

［8］ SONNENBERG E，MEYER D，WEIDNER M，et al.Scatter factor/hepatocyte growth factor and its receptor，the c-met tyrosine kinase，can mediate a signal exchange between mesenchyme and epithelia duringmouse development［J］.JCell Biol，1993，123（1）：223-235.

［9］ DRUGAN CS，STONE A，GAME SM，et al.The mitogenic effect of KGF and the expression of its cell surface receptor on cultured normal andmalignanthuman oral keratinocytesand on contiguous fibroblasts［J］.JOral Path Med，1997，26（7）：327-333.

［10］ STROHNEYER D，STRAUSSF，ROSSINGC，etal.Expression of bFGF，VEGF and c-Met and their correlation with microvessel density and progression in prostate carcinoma［J］.Anticancer Res，2004，24（3a）：1797-1804.

［11］ 陳志，顏雨春.肝細(xì)胞生長因子-C-Met系統(tǒng)與口腔鱗癌相關(guān)性研究的進(jìn)展［J］.安徽醫(yī)藥，2009，13（1）：8-10.

［12］ 王玉萍，郝志偉，楚天驕，等.乳癌組織中肝細(xì)胞生長因子及其受體C-Met的表達(dá)［J］.鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，40（6）：1133-1134.

［13］ 李樹玲.頭頸部腫瘤診斷、治療及預(yù)后［M］.天津：天津科學(xué)技術(shù)出版社，1983：151-152.

（本文編輯：劉斯靜）

HGF/c-M et EXPRESSION ANALYSISOF 30 CASESOF NASAL MALIGNANT TUMOR

DUAN Xiaohui1，YU Yanfang1，PEIZhiping2，CHEN Jie1，ZHANG Yanli1，WANG Yanchen1
（1.Department of Otorhinolaryngology，the Affilated Hospital of Hebei University of Engineering，Hebei Province，
Handan 056002，China；2.Department of General Surgery，the Second People's Hospital of Handan，Hebei Province，Handan 056002，China）

ObjectiveTo investigate the HGF/c-Met expression distribution and their positive rate in malignant tumor of nasal cavity.MethodsThirty cases of defined nasal malignant papillomas between Jan 2005 to Dec 2010 were chosen as experimental group.Twenty-eight cases of nasal polyps and 18 cases of chronic hypertrophicrhinitiswere set as controls.All the patients received surgeryal to remove the pathological tissue，immunohistochemical SP was used to detect the expression of HGF and c-Met. Staining scoreswere calculated.The HGF/c-Met expression positivemap was depicted.The scoremedian of the two groups was compared.ResultsHGF/c-Met staining score of two groups were skewed distribution.The scoreswere below 240 points in nasal polyps and chronic hypertrophic rhinitis butwere higher than 301 points in nasalmalignant papillomas，the distribution concentration degree ofmalignant tissueswas higher than those of benign tissues.And themedian score of HGF and c-Met from malignant tissues were significantly higher than those of benign tissues（P＜0.01）.ConclusionThe high coexpression or single expression of HGF/c-Met share some relationship with the development ofmalignant papillomas.Therapy method against HGF/c-Met may play a beneficial role in control of malignant papilloma.

papilloma；proto-oncogene proteins c-met；gene expression

R730.261.6

A

1007-3205（2013）07-0780-03

2012-10-16；

2012-12-02

段曉輝（1977-），男，河北邯鄲人，河北工程大學(xué)附屬醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事鼻內(nèi)鏡外科及頭頸部腫瘤診治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.07.013