崔桂萍，劉 萍

(天津市環(huán)湖醫(yī)院，天津300060)

目前，腦卒中的診斷多依賴于影像學(xué)檢查(如CT、MRI等)，存在一定的時(shí)間局限性。隨著腦卒中生物標(biāo)志物研究的不斷深入，有研究者發(fā)現(xiàn)人帕金森病蛋白7(PARK7)與腦卒中密切相關(guān)，但國(guó)內(nèi)尚少有相關(guān)報(bào)道。2008年12月～2009年11月，我們觀察了腦卒中患者血清PARK7水平的動(dòng)態(tài)變化，初步評(píng)價(jià)該指標(biāo)在腦卒中患者早期診斷中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 入選條件:①初次發(fā)病的缺血性腦卒中(IS)和出血性腦卒中(ICH)患者;②發(fā)病12 h內(nèi)及時(shí)入院;③符合1995年全國(guó)第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議制定的診斷標(biāo)準(zhǔn);④均經(jīng)CT和(或)MRI證實(shí)。排除繼發(fā)的IS(包括陳舊性腦梗死)、ICH，以及嚴(yán)重的心、肝、腎功能不全者。符合條件的腦卒中患者65例，男40例、女 25例，年齡(60.14±13.02)歲;其中IS37例(IS組)，ICH 28例(ICH組)。ICH組出血量0～20 mL 11例，21～40 mL 8例，41～60 mL 6例，＞60 mL 3例。采用改良愛(ài)丁堡—斯堪的納維亞卒中評(píng)定量表(MESSS)進(jìn)行患者神經(jīng)功能缺損評(píng)估，輕度缺損(0～15分)26例，中度缺損(16～30分)19例，重度缺損(30～45分)20例。發(fā)病第14天患者病情穩(wěn)定或出院時(shí)，Barthel指數(shù)(BI)評(píng)定日常生活活動(dòng)能力，作為預(yù)后評(píng)估。完全殘疾、生活完全依賴(10～20分)16例，重度功能障礙、生活依賴明顯(20～40分)17例，中度功能障礙、生活需要幫助(40～60分)9例，生活基本自理(60分以上)23例。選擇同期門(mén)診體檢健康者30例作為對(duì)照組，男18 例、女12 例，年齡(58.24 ±12.09)歲，無(wú)心腦血管、出血性疾病及血液系統(tǒng)疾病，未服用任何抗凝藥物。三組年齡、性別比較，P均＞0.05。

1.2 方法

1.2.1 血清PARK7檢測(cè)方法 分別于患者入院時(shí)(發(fā)病12 h內(nèi))及發(fā)病第3、14天取靜脈4 mL，對(duì)照組采集靜脈血1次。待血液凝固后，1 000 r/min離心20 min，提取血清－80℃冰箱保存，檢測(cè)前室溫預(yù)置30 min復(fù)溶。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清PARK7，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)操作。

1.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件。符合正態(tài)分布數(shù)據(jù)用ˉx±s表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組之間比較采用方差分析;診斷試驗(yàn)采用受試者工作特征曲線(ROC)，評(píng)價(jià)檢測(cè)指標(biāo)的敏感度和特異度。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清PARK7水平比較 IS組發(fā)病12 h內(nèi)及第3、14 天血清 PARK7 分別為(32.79 ±6.94)、(31.23 ±6.04)、(32.71 ±6.34)μg/L，ICH 組分別為(31.61 ±5.06)、(32.05 ±4.29)、(31.48 ±5.94)μg/L，對(duì)照組為(14.25 ±2.65)μg/L。IS、ICH 組各時(shí)點(diǎn)均高于對(duì)照組，P均＜0.01;IS、ICH組同組不同時(shí)點(diǎn)間及兩組同時(shí)點(diǎn)間比較，P均＞0.05。

2.2 血清PARK7水平對(duì)IS、ICH的診斷價(jià)值 采用ROC曲線，以20.256μg/L為界值，PARK7診斷IS的靈敏度為97.3%，特異度為96.7%，陽(yáng)性似然比29.19，陰性似然比0.028，ROC 曲線下面積0.995(P=0.000);診斷ICH的靈敏度為96.4%，特異度為96.7%，陽(yáng)性似然比 29.21，陰性似然比 0.037，ROC 曲線下面積 =0.965(P=0.000)。

2.3 血清 PARK7水平與MESSS、BI的關(guān)系 IS組在12 h內(nèi)血清PARK7水平與MESSS評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.357，P ＜0.05)，ICH 組在發(fā)病第 14 天血清PARK7 與 BI呈負(fù)相關(guān)(r= －0.478，P ＜0.05)。

2.4 血清PARK7水平與ICH發(fā)病初期出血量的關(guān)系 ICH發(fā)病初期出血量與血清PARK7水平呈正相關(guān)(r=0.486，P=0.012)。

3 討論

目前研究表明，動(dòng)脈粥樣硬化是腦血管疾病的主要病因，氧化應(yīng)激和炎性反應(yīng)的作用貫穿了動(dòng)脈粥樣硬化的始終［1，2］。

PARK7是帕金森病早期發(fā)作的常染色體隱性遺傳相關(guān)基因，也稱DJ-1，最初是作為癌蛋白被發(fā)現(xiàn)的。研究表明［3］，PARK7具有分子伴侶或蛋白水解酶以及抗氧化應(yīng)激功能，與帕金森病密切相關(guān)的是它的抗氧化應(yīng)激功能。有研究發(fā)現(xiàn)，PARK7與腦卒中密切相關(guān)，病理機(jī)制尚未明確。Yanaqisawa等［4］研究發(fā)現(xiàn)，PARK7對(duì)缺血再灌注損傷所致的神經(jīng)元退行性變具有保護(hù)作用。他們制作大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞的腦缺血模型，大腦中動(dòng)脈閉塞后3 d，紋狀體內(nèi)所注射的谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記的PARK7顯著降低梗死面積，并被MRI證實(shí)。Mullett等［5］研究發(fā)現(xiàn)，PARK7在人腦梗死區(qū)域有豐富表達(dá)，產(chǎn)生免疫反應(yīng)的PARK7存在于星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi);在腦缺血或再灌注誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激條件下，PARK7在相關(guān)梗死區(qū)域白質(zhì)和灰質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞中大量表達(dá)，星形膠質(zhì)細(xì)胞PARK7的表達(dá)與腦梗死進(jìn)展時(shí)程有關(guān);與急性腦梗死相比較，亞急性和慢性腦梗死時(shí)PARK7表達(dá)更豐富。Yanagida等［6］的研究也得出了同樣結(jié)論，發(fā)現(xiàn)在缺血半暗帶星形膠質(zhì)細(xì)胞PARK7表達(dá)增強(qiáng)。這表明氧化應(yīng)激誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞PARK7蛋白釋放，并通過(guò)減少活性氧介導(dǎo)的神經(jīng)元損傷而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。由此可見(jiàn)，與腦梗死密切相關(guān)的應(yīng)該是PARK7的抗氧化應(yīng)激功能。

過(guò)往研究從細(xì)胞學(xué)及分子生物學(xué)分析了PARK7與腦卒中的關(guān)系，本研究從血清學(xué)進(jìn)行探討。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩組血清PARK7均高于對(duì)照組，表明無(wú)論IS還是ICH，PARK7均可作為腦卒中急性期的標(biāo)志物。研究還發(fā)現(xiàn)，IS組從發(fā)病到第3天，PARK7血清水平下降，第14天時(shí)逐漸升高;而ICH組發(fā)病到第3天持續(xù)升高，第14天時(shí)逐漸下降。這兩種不同的變化趨勢(shì)表明，PARK7在腦梗死和腦出血中的作用機(jī)制很可能不盡相同。進(jìn)一步比較兩組各時(shí)點(diǎn)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明 PARK7在腦梗死和腦出血中可能存在共同的作用機(jī)制，其機(jī)制有待進(jìn)一步考證。

Allard等［7］研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)病3 h內(nèi)腦卒中患者血漿PARK7水平顯著升高，其對(duì)IS的診斷敏感度和特異度分別為 53.7%、90.0%，對(duì) ICH分別為43.4%、90.0%，可作為腦卒中早期診斷指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，PARK7對(duì) IS敏感度為97.3%、特異度為96.7%，對(duì) ICH 分別為 96.4%、96.7%，與 Allard 等研究結(jié)果相近。

本研究采用MESSS評(píng)分評(píng)估患者神經(jīng)功能缺損程度，患者病情穩(wěn)定或出院時(shí)用BI評(píng)估預(yù)后。結(jié)果顯示，IS組血清PARK7水平與MESSS評(píng)分在12 h內(nèi)相關(guān)，ICH組在14天出院時(shí)PARK7與 BI呈負(fù)相關(guān);另外，IS組中10例臨床有神經(jīng)科癥狀及體征，但發(fā)病12 h內(nèi)未見(jiàn)影像學(xué)變化，驗(yàn)證了PARK7在腦梗死的診斷上更具敏感性;28例ICH患者中，其出血量與血清PARK7水平呈正相關(guān)。上述結(jié)果為國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究的首次報(bào)道，病理機(jī)制尚不明確，有待于進(jìn)一步研究探討。

抗氧化是動(dòng)脈粥樣硬化治療的重要措施之一。Kitamura等［8］建立大鼠的虛擬模型，將PARK7綁定于一種復(fù)合制劑成為Compound-23(Comp-23)，作為治療帕金森病和腦梗死的抗氧化劑。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Comp-23可防止氧化應(yīng)激而誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞和中腦腹側(cè)主要神經(jīng)細(xì)胞的死亡，起主導(dǎo)作用的是PARK7，且Comp-23還可減小腦梗死面積;由此建議，Comp-23可作為治療帕金森和缺血性神經(jīng)退行性變疾病治療的主導(dǎo)藥物。還有研究表明［9，10］，腦卒中時(shí)星形細(xì)胞性PARK7過(guò)表達(dá)是為了保護(hù)星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元，對(duì)抗梗死相關(guān)的繼發(fā)性損傷機(jī)制如氧化應(yīng)激、興奮毒性、細(xì)胞凋亡，且上述機(jī)制在體外實(shí)驗(yàn)中得到證實(shí)。

PARK7作為帕金森病的相關(guān)基因已得到充分證實(shí)，上述研究表明其與腦卒中密切相關(guān)，說(shuō)明多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病可能具有共同的病理機(jī)制;PARK7血清水平在腦卒中早期顯著升高，表明其具有一定的診斷作用，尤其對(duì)IS的超早期診斷，可能比影像學(xué)檢查更敏感，可為患者提供一個(gè)更好的治療方案，同時(shí)可能會(huì)成為神經(jīng)保護(hù)治療的目標(biāo)。但本研究樣本量小，尚需臨床大樣本和基礎(chǔ)研究來(lái)支持和驗(yàn)證PARK7的作用。

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