莫莉曉芳，張群智

（1.大理學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，云南大理671000；2.大理學(xué)院附屬醫(yī)院，云南大理671000）

大理學(xué)院附屬醫(yī)院大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌耐藥性研究

莫莉曉芳1，張群智2*

（1.大理學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，云南大理671000；2.大理學(xué)院附屬醫(yī)院，云南大理671000）

目的：對大理學(xué)院附屬醫(yī)院2011年至2012年臨床分離的大腸埃希菌及肺炎克雷伯桿菌的耐藥性進行分析，指導(dǎo)臨床合理應(yīng)用抗生素。方法：菌株分離及培養(yǎng)按常規(guī)方法進行，細菌鑒定采用VITET-2 Compact 60全自動微生物分析儀，藥敏試驗采用K-B法。結(jié)果：共收集標(biāo)本183株，其中大腸埃希菌146株：口痰92株（63%）、分泌物17株（11.6%）、尿液16株（10.9%），膿液9株（6.1%），其他12株（8.2%）；肺炎克雷伯桿菌37株：口痰27株（73%）、分泌物5株（13.5%）、膿液3株（8%）其他2株（5.4%）。藥敏試驗結(jié)果顯示：大腸埃希菌和肺炎克雷伯桿菌對頭孢哌酮、阿米卡星、亞胺培南等耐藥率較低，分別為10.3%、6.2%、2.7%和10.8% 13.5%、2.7%。結(jié)論：大腸埃希菌及肺炎克雷伯桿菌兩年痰液中檢出率呈上升趨勢，對左氧氟沙星、頭孢唑啉，氨曲南，頭孢他啶等耐藥率超過50%，特別是頭孢他啶的耐藥率相對于2008年顯著升高，而對頭孢哌酮、阿米卡星、亞胺培南等耐藥性較低，臨床應(yīng)根據(jù)藥敏實驗合理選擇抗生素。

大腸埃希菌；肺炎克雷伯桿菌；耐藥性分析

隨著抗生素廣泛使用，目前細菌的耐藥性呈逐年上升的趨勢，這不僅是造成院內(nèi)感染的一個重要因素，也是臨床使用抗生素的難題〔1〕。醫(yī)院感染分離的耐藥性菌株中以革蘭陰性桿菌（G-桿菌）為主，特別是腸桿菌科細菌居多〔1〕。為了解本院細菌的耐藥性現(xiàn)狀，指導(dǎo)臨床合理使用抗生素，我們收集了2011年10月—2012年5月大理學(xué)院附屬醫(yī)院臨床各科感染標(biāo)本菌培養(yǎng)、鑒定和藥敏試驗，現(xiàn)將試驗結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來源標(biāo)本來源于2011年10月—2012年5月大理學(xué)院附屬醫(yī)院臨床各科感染患者，標(biāo)本為口痰、尿液、消化道分泌物、膿液、膽汁等。標(biāo)本的留取和保存按操作規(guī)程要求〔2〕。從中篩選出腸桿菌科大腸埃希菌菌株和肺炎克雷伯桿菌菌株。共篩選標(biāo)本183株，大腸埃希菌為146株，占79.8%，肺炎克雷伯菌37株，占20.2%。

1.2 儀器細菌鑒定采用Vitek-2 compact 60全自動微生物分析儀。

1.3 藥敏紙片藥敏試驗采用K-B法，藥敏紙片購自北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.4 細菌培養(yǎng)、分離鑒定和藥敏試驗按常規(guī)方法進行標(biāo)本培養(yǎng)〔1〕，細菌分離鑒定用全自動微生物分析儀，去除同一病例中來自相同部位的標(biāo)本中所獲取重復(fù)菌株，藥敏試驗統(tǒng)一采用K-B紙片瓊脂擴散法，10種抗生素藥敏結(jié)果判定按美國國家臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會（CLSI）2010年推薦的標(biāo)準(zhǔn)。質(zhì)控菌株采用大腸埃希菌ATCC25922。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS17.0和EXCEL對收集數(shù)據(jù)進行分析。

2 結(jié)果

2.1 菌株分離率146株大腸埃希菌：口痰92株（63%）、分泌物17株（11.6%）、尿液16株（10.9%）膿液9株（6.1%），其他12株（8.2%）；37株肺炎克雷伯桿菌：口痰27株（73%）、分泌物5株（13.5%）膿液3株（8%）其他2株（5.4%）。與08年菌株分離率對比〔3〕，見表1。

表1 菌株分離率

2.2 細菌科室分布情況見表2。

表22011 年—2012年大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的科室分布情況

2.3 大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌10種抗生素的藥敏試驗結(jié)果見表3。

表3 兩種菌株病原菌耐藥情況

3 討論

細菌耐藥性又稱抗藥性，是指細菌在與抗生素多次接觸后，對抗生素的敏感度下降甚至消失，導(dǎo)致該種抗生素治療效果下降或無效〔4〕?；颊哂捎诩膊?dǎo)致身體虛弱，抵抗力較差，全身各器官各部位均可能發(fā)生感染，如呼吸系統(tǒng)感染、手術(shù)部位感染、泌尿系感染等，感染既可能是患者自身固有致病菌，也可能是外來致病菌發(fā)生交叉感染。由于院內(nèi)細菌均多接觸過各種抗生素，因此患者可能被各種產(chǎn)生耐藥性的細菌感染，這不僅增高患者發(fā)病率和病死率，增加患者的痛苦，而且增大了醫(yī)務(wù)人員的工作量，降低病床周轉(zhuǎn)率，給患者及社會造成重大的經(jīng)濟損失。對于產(chǎn)生耐藥性的細菌，臨床必須合理應(yīng)用抗生素，才能夠達到控制感染的目的。

研究發(fā)現(xiàn)G-桿菌更易出現(xiàn)耐藥性，文獻報道47.98%~79.30%耐藥菌株為G-桿菌，感染性疾病特別是住院患者醫(yī)院感染的主要病原菌是G-桿菌，而大腸埃希菌、肺炎克雷伯桿菌位居前列〔5〕。我們的研究結(jié)果是近兩年菌株分離率，痰液中和其他如胸水、腹水、腦脊液、膽汁等的大腸埃希菌的分離率較2008年高（P<0.01），尿液中的大腸埃希菌有所降低（P<0.01）。部位分泌物中大腸埃希菌和肺炎克雷伯桿菌的分離情況變化不大，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。通過結(jié)合菌株科室分布情況，ICU、呼吸感染內(nèi)科和肝膽胃腸外科耐藥菌株分布居多，可以推斷這兩年ICU、呼吸感染內(nèi)科和肝膽胃腸外科感染患者使用抗生素對抗感染較為頻繁，導(dǎo)致耐藥菌株有所增加。

目前臨床常用的抗生素主要是β-內(nèi)酰胺類抗生素，包括青霉素類抗生素、頭孢菌素、碳青霉烯類抗生素等，其發(fā)揮作用主要依賴β-內(nèi)酰胺抑制細菌細胞壁肽聚糖的形成，影響細菌細胞壁形成從而達到殺菌的目的〔6〕。但是隨著抗生素特別是廣譜類抗生素的普遍應(yīng)用，β-內(nèi)酰胺酶的基因通過長期大量接觸抗生素而表達，從而能夠水解抗生素中的β-內(nèi)酰胺環(huán)，解除β-內(nèi)酰胺對肽聚糖合成的抑制使抗生素失效，產(chǎn)生耐藥性〔7〕。產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶細菌產(chǎn)生的誘因與住院時間、三代頭孢菌素使用、侵入性導(dǎo)管、年齡等因素有關(guān)〔8〕。表2數(shù)據(jù)顯示入住ICU為本院常見危險因素。

本次研究結(jié)果顯示，腸桿菌科對碳青霉烯類抗生素亞安培南的耐藥率很低，大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌分別低于2.7%和3.1%，與尹辛大等報道結(jié)果相似〔9〕，而對其他抗生素的耐藥率與2008年相比大都逐年上升。表3顯示氨曲南、頭孢他啶、左氧氟沙星和哌拉西林的耐藥率分別為54.1%、52.7% 73.3%和88.4%，與2008年四種抗生素耐藥率31.0%、17.3%、54.7%和65.5%比較，有較為大幅的提高，提示本院兩年內(nèi)抗生素使用率呈上升趨勢特別是2008年治療效果相對較好的頭孢他啶近兩年使用相對偏多，導(dǎo)致大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌對頭孢他啶耐藥性顯著上升（P<0.05）。數(shù)據(jù)顯示目前兩種細菌對頭孢哌酮耐藥性保持在較低水平，臨床更應(yīng)在藥敏試驗的指導(dǎo)下盡量減少使用三代頭孢菌素，合理使用抗生素，以減少產(chǎn)耐藥細菌的出現(xiàn)〔10〕。碳青霉烯類抗生素具有抗菌譜廣、抗菌作用強和對多數(shù)細菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶高度穩(wěn)定等優(yōu)點，臨床用藥時應(yīng)防止交叉感染和嚴(yán)格限制第三代頭孢菌素的使用，不應(yīng)濫用亞胺培南等碳青霉烯類抗生素，因為非發(fā)酵菌如嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌等對其耐藥性極高，濫用碳青霉烯類抗生素可能導(dǎo)致嚴(yán)重的強耐藥性非發(fā)酵菌感染〔11〕。而本院2010年非發(fā)酵細菌的檢出率也在較高水平〔12〕。

綜上所述，本院近2年來臨床分離的大腸埃希菌和肺炎克雷伯桿菌中耐藥菌株較多，且耐藥率也呈上升趨勢，藥敏結(jié)果顯示頭孢哌酮、阿米卡星、亞胺培南等耐藥性較低，臨床應(yīng)根據(jù)藥敏實驗結(jié)果合理選擇敏感抗生素。

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（責(zé)任編輯 董杰）

Analysis of Resistance of Escherichia Coli and Klebsiella Pneumoniae in Affiliated Hospital of Dali University

MO Lixiaofang1，ZHANG Qunzhi2*
（1.Pre-clinical College，Dali University，Dali，Yunnan 671000，China; 2.Affiliated Hospital of Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To instruct the clinical medicine in Affiliated Hospital of Dali University by analyzing the resistance of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae from 2011 to 2012.Methods:Isolate and culture strains by using conventional methods,and identify the bacteria with VITET-2 Compact 60 automatic microbial analyzer and test the susceptibility through K-B.Results:In total 183 specimens, 146 of them were Escherichia coli:koutan 92（63%）,secretions 17（11.6%）,urine 16（10.9%）,pus 9（6.1%2）,other 12（8.2%）;37 of them were Klebsiella pneumoniae:koutan 27（73%）,secretions five（13.5%）,pus 3（8%）,other susceptibility test results:the resistance rates of Cefoperazone,Amikacin,Imipenem were lower,at 10.3%,6.2%,2.7%and 10.8%,13.5%,2.7%,respectively.Conclusion:The detection rate of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae in sputum is rising in these two years,and the resistance rates have been exceeded more than 50%of levofloxacin,cefazolin,aztreonam,ceftazidime,especially ceftazidimewas resistance rates is significantly elevated.However,resistance rates of cefoperazone,amikacin,imipenem are lower,so doctors should choose antibiotics based on susceptibility experiments.

Escherichia coli;Klebsiella pneumoniae;resistance analysis

R378

A

1672-2345（2013）03-0059-04

云南省科技廳基金資助項目（2010ZC146）

2013-01-03

莫莉曉芳，碩士研究生，主要從事微生物與感染性疾病研究. *通信作者：張群智，教授.