楊自副，朱曉燕

（楚雄州中醫(yī)院，云南楚雄675000）

楚雄州中醫(yī)院2011年細(xì)菌耐藥性監(jiān)測結(jié)果分析

楊自副，朱曉燕

（楚雄州中醫(yī)院，云南楚雄675000）

目的：了解2011年臨床分離菌株對常用抗生素的耐藥性。方法：采用API鑒定和ATB藥敏板條及紙片擴(kuò)散法對2011年臨床分離1 127株細(xì)菌進(jìn)行藥敏試驗。結(jié)果：1 127株細(xì)菌中革蘭陰性菌占76.8%，革蘭陽性菌占23.2%。革蘭陰性菌中前3位為大腸埃希菌45.7%（395/865）、肺炎克雷伯菌10.6%（92/865）和銅綠假單胞菌9.0%（78/865）；革蘭陽性菌中前3位為屎腸球菌27.1%（71/ 262）、金黃色葡萄球菌24.8%（65/262）和表皮葡萄球菌16.0%（42/262）。藥敏試驗結(jié)果顯示泛耐藥銅綠假單胞菌和不動桿菌檢出率分別為19.2%（15/78）和32.8%（23/70）；MRSA和MRCNS分別占金黃色葡萄球菌和CNS的32.3%（21/65）和83.3%（40/48）。結(jié)論：定期進(jìn)行耐藥性監(jiān)測有助于了解細(xì)菌耐藥性的變遷，為臨床用藥提供依據(jù)。

細(xì)菌耐藥性監(jiān)測；抗生素；藥敏試驗；耐藥率

細(xì)菌對抗生素耐藥已成為臨床治療細(xì)菌感染的難點。及時、準(zhǔn)確地掌握本地區(qū)細(xì)菌耐藥性動態(tài)，了解細(xì)菌耐藥性的變遷，對于指導(dǎo)臨床合理用藥，并為新抗生素的研制提供實驗室依據(jù)，具有非常重要的意義。為此，從2008年始我們逐年監(jiān)測臨床分離菌株耐藥性，了解臨床常見分離菌株對常用抗生素的耐藥性變遷，為臨床經(jīng)驗用藥和感染流行提供參考資料。現(xiàn)將對楚雄州中醫(yī)院2011年臨床送檢標(biāo)本分離菌的耐藥監(jiān)測結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源2011年1月1日—2011年12月31日我院臨床送檢血液、痰液、尿液、分泌物等標(biāo)本分離的菌株。剔除同一患者相同部位的重復(fù)菌株，按統(tǒng)一的方案進(jìn)行抗生素敏感試驗。

1.1.2 培養(yǎng)基及抗生素紙片ATB藥敏板條、MH瓊脂及亞胺培南/亞胺培南EDTA Etest試條和頭孢硝噻吩紙片均為法國生物梅里埃公司產(chǎn)品；氨曲南、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢替坦、頭孢唑肟、亞胺培南、美羅培南、厄他培南、利奈唑胺、多黏菌素B、米諾環(huán)素、紅霉素、克林霉素、呋喃妥因等抗生素紙片為英國OXOID公司產(chǎn)品；培養(yǎng)基制作按全國臨床檢驗操作規(guī)程第三版〔1〕規(guī)定和MH瓊脂說明配制。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌鑒定及藥敏試驗細(xì)菌鑒定采用法國生物梅里埃API鑒定板條及ATB NEW鑒定軟件鑒定至種。藥敏試驗以ATB藥敏板條為主，根據(jù)需要紙片擴(kuò)散法補(bǔ)充氨曲南、頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢替坦、頭孢唑肟、利奈唑胺、多黏菌素B、米諾環(huán)素、紅霉素、克林霉素、呋喃妥因等。另外，因腸桿菌科ATB板條藥敏折點與抗菌藥物敏感性試驗執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)等21版（CLSI M100-S21）不相符〔2〕，故采用紙片擴(kuò)散法補(bǔ)充頭孢他啶、頭孢噻肟、亞胺培南、美羅培南藥敏。質(zhì)控菌株為金黃色葡萄球菌ATCC 25923和ATCC 29213；大腸埃希菌ATCC 25922和ATCC 35218；銅綠假單胞菌ATCC 27853；糞腸球菌ATCC 29212；肺炎鏈球菌ATCC 49619，流感嗜血桿菌ATCC 49247。

1.2.2 β-內(nèi)酰胺酶檢測用頭孢硝噻吩紙片檢測葡萄球菌、流感嗜血桿菌等細(xì)菌的β-內(nèi)酰胺酶；按CLSI M100-S21規(guī)定未常規(guī)對腸桿菌科細(xì)菌進(jìn)行ESBLs檢測。

1.2.3 結(jié)果的判斷和數(shù)據(jù)分析按CISI M100-S21折點標(biāo)準(zhǔn)斷判藥敏試驗結(jié)果，采用Whonet5.6軟件統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 臨床分離細(xì)菌菌種及分布1 127株菌中，革蘭陰性菌865株（76.8%），其中，前5位分別是大腸埃希菌45.7%（395/865）、肺炎克雷伯菌10.6%（92/ 865）、銅綠假單胞菌9.0%（78/865）、陰溝腸桿菌6.2%（54/865）和鮑曼不動桿菌6.2%（54/865），其它尚有流感嗜血桿菌3.0%（26/865）、淋病奈瑟菌0.6（5/865）等；革蘭陽性菌262株（23.2%），其中，前5位分別是屎腸球菌27.1%（71/262）、金黃色葡萄球菌24.8%（65/262）、表皮葡萄球菌16.0%（42/262）、糞腸球菌12.6%（33/262）、肺炎鏈球菌6.1%（16/262）。

上述菌株在門診患者和住院患者中分別占5.6%和94.4%。標(biāo)本分布為尿液標(biāo)本分離菌占34.3%、呼吸道標(biāo)本占28.9%，傷口分泌物占17.5%，血液等無菌體液占14.8%。尿液標(biāo)本分離菌中大腸埃希菌、屎腸球菌和糞腸球菌分別占47.2%、11.9%和6.0%；呼吸道標(biāo)本分離菌中克雷伯菌、不動桿菌和銅綠假單胞菌分別占17.5%、11.7%和9.8%；傷口分泌物分離菌中大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和克雷伯菌分別占33.5%、15.2%和5.6%；血液等無菌體液分離菌中大腸埃希菌、屎腸球菌和克雷伯菌分別占41.9%、6.0%和4.8%。

2.2 藥敏試驗結(jié)果

2.2.1 苛養(yǎng)菌16株肺炎鏈球菌（均為非腦脊液分離菌株）中，經(jīng)最低抑菌濃度（MIC）檢測，5株為青霉素耐藥肺炎鏈球菌PRSP（31.2%），4株為青霉中介肺炎鏈球菌PISP（25.0%），16株肺炎鏈球菌對紅霉素和克林霉素全耐藥，對四環(huán)素耐藥率達(dá)93.8%，未檢出復(fù)方新諾明敏感菌株；6株β溶血性鏈球菌對青霉素均敏感，4株克林霉素和四環(huán)素耐藥，5株對紅霉素耐藥；26株流感嗜血桿菌中β-內(nèi)酰胺酶陽性率為66.7%，對阿莫西林/克拉維酸、頭孢噻肟、氧氟沙星均敏感，對復(fù)方新諾明耐藥率達(dá)66.7%。另外，5株淋病奈瑟菌均為β-內(nèi)酰胺酶陽性株且四環(huán)素全部耐藥，4株均對環(huán)丙沙星耐藥。見表1。

2.2.2 葡萄球菌屬62株金黃色葡萄球菌中MRSA檢出率為32.3%，48株凝固酶陰性葡萄球菌中MRCNS檢出率為83.9%。苯唑西林耐藥葡萄球菌對常用抗生素的耐藥率明顯高于苯唑西林敏感的葡萄球菌。MSSA產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶陽性率為95.5%，未發(fā)現(xiàn)萬古霉素、替考拉寧和利奈唑胺耐藥葡萄球菌。見表2。

2.2.3 腸球菌屬屎腸球菌對大部分抗生素的耐藥率明顯高于糞腸球菌，如糞腸球菌對青霉素和氨芐西林耐藥率分別為11.4%和8.6%，而屎腸球菌則高達(dá)85.9%和84.5%，對呋喃妥因耐藥率分別為2.9%，和42.3%；兩種腸球菌對紅霉素和利福平耐率均在85%以上。未檢出萬古霉素、替考拉寧和利奈唑胺耐藥腸球菌。見表3。

2.2.4 腸桿菌科大腸埃希菌、克雷菌屬、腸桿菌屬和其它腸桿菌對常用抗生素的耐藥性率見表4，共檢

出對亞胺培南耐藥的肺炎克雷伯菌4株，陰溝腸桿菌2株，根據(jù)CLSIM100-S21規(guī)定，用厄他培南和美羅培南抗生素紙片進(jìn)行霍奇試驗（Hodge）試驗檢測均為陰性，用亞胺培南/亞胺培南EDTA Etest試條進(jìn)行金屬酶表型確認(rèn)試驗陰性。另外，檢出沙門氏菌1株，對阿莫西林耐藥，環(huán)丙沙星和復(fù)方新諾明均敏感。

表1 肺炎鏈球菌、β溶血性鏈球菌和流感嗜血桿菌對常用抗生素的敏感率和耐藥率（n）

表2 葡萄球菌屬細(xì)菌對常用抗生素的敏感率和耐藥率/%

表3 腸球菌屬細(xì)菌對常用抗生素的敏感率和耐藥率/%

表4 腸桿菌科細(xì)菌對常用抗生素的敏感率和耐藥率/%

2.2.5 非發(fā)酵菌銅綠假單胞菌、不動桿菌屬和嗜麥芽窄單胞菌對常用抗生素的耐藥率見表5，泛耐藥銅綠假單胞菌和不動桿菌檢出率分別為19.2%（15/ 78）和32.8%（23/70）。

表5 非發(fā)酵菌對常用抗生素的敏感率和耐藥率/%

3 討論

2011 年我院臨床標(biāo)本共分離病原菌1 127株，與我院2009年及2010年分離的病原菌數(shù)相比分別增加24.4%和19.1%〔3-4〕，其中，革蘭陰性菌占76.8%，革蘭陽性菌占23.2%，陰性菌所占比率較2010年的增加8.3%〔4〕。

苛養(yǎng)菌方面，與我院2010年監(jiān)測結(jié)果相比，檢出率明顯上升，特別是流感嗜血桿菌分離率，這可能與臨床重視及標(biāo)本采樣送檢及時有關(guān)。在肺炎鏈球菌中，PRSP也有檢出，且對紅霉素、克林霉素全部耐藥，未檢出復(fù)方新諾明敏感株；β溶血性鏈球菌對青霉素全部敏感，這與其它報道相當(dāng)〔3-12〕；流感嗜血桿菌β-內(nèi)酰胺酶陽性率達(dá)66.7%，對復(fù)方新諾明耐藥率達(dá)66.7%，也較其它報道高〔5-12〕；5株淋病奈瑟菌均為β-內(nèi)酰胺酶陽性株，且四環(huán)素全部耐藥，4株對環(huán)丙沙星耐藥；雖然這些菌株檢出率較低，但耐藥性卻很嚴(yán)重，應(yīng)引起臨床高度重視。

葡萄球菌中金黃色葡萄球菌分離率較低，MRSA檢出率為32.3%，是我院2010年的1倍〔4〕，但仍明顯低于其它報道〔5-12〕，MRSA對所有的β內(nèi)酰胺類抗生素耐藥，并可同時對氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)脂類、四環(huán)素類和克林霉素抗生素交叉耐藥，其耐藥率明顯高于MSSA。MRSA對復(fù)方新諾明的耐藥率為23.8%，較我院2009、2010年明顯降低〔3-4〕，和國內(nèi)其它學(xué)者報道相當(dāng)〔5-12〕；MRCNS檢出率為83.3%，明顯高出國內(nèi)其他學(xué)者報道〔5-12〕，與我院2009年～2010年相當(dāng)〔3-4〕。未發(fā)現(xiàn)萬古霉素、替考拉寧和利奈唑胺耐藥葡萄球菌。

腸球菌中屎腸球菌檢出率明顯高于糞腸球菌，且對于大部分抗生素的耐藥率也明顯高于糞腸球菌，和其它學(xué)者報道的相當(dāng)〔5-7〕，對青霉素和氨芐西林耐藥率較我院2010年有所上升〔4〕，糞腸球菌和屎腸球菌對高單位慶大霉素耐藥率分別為14.3%和56.3%，對高單位鏈霉素耐藥率分別為22.9%和21.1%，與其他學(xué)者報道有較大差異〔5-7〕。屎腸球菌對呋喃妥因耐藥率已高達(dá)42.3%，也較我院2010年明顯上升〔4〕，已和2011年CHINET報道相當(dāng)〔5〕。值得注意的是兩種腸球菌對紅霉素和利福平的耐藥率都已達(dá)到或超過85%，與我院2010年相當(dāng)〔4〕，但明顯高于2011年CHINET報道〔5〕。未發(fā)現(xiàn)萬古霉素、替考拉寧和利奈唑胺耐藥腸球菌。

腸桿菌科中，根據(jù)CLSI M100-S21規(guī)定未常規(guī)對腸桿菌科細(xì)菌進(jìn)檢ESBLs檢測，與我院2009年～2010年監(jiān)測結(jié)果相比，克雷伯菌屬檢出率有所上升，沙雷菌屬檢出率明顯下降〔3-4〕。2010年新增的頭孢唑肟和頭孢替坦，與同類的頭孢噻肟和頭孢西丁相比，耐藥率依然較低，臨床可考慮推廣這類藥物的應(yīng)用以緩解其它頭孢類抗生素的壓力。在對腸桿菌科的監(jiān)測中，共檢出對亞胺培南耐藥的肺炎克雷伯菌4株，陰溝腸桿菌2株，KPC酶和金屬酶檢測均為陰性，推測其耐藥機(jī)制可能為產(chǎn)生ESBLs和/或AmpC及同時合并外膜孔蛋白丟失有關(guān)。

非發(fā)酵糖菌中銅綠假單胞菌對臨床常用抗生素的耐藥率明顯低于其它地區(qū)的報道〔5-12〕，不動桿菌屬中以鮑曼不動桿菌為主，其耐藥率也明顯低于其它地區(qū)的報道〔5-12〕，但泛耐藥的銅綠假單胞菌和鮑曼屬不動桿菌檢出率較我院2010年明顯上升。因使用高效廣譜抗生素后而出現(xiàn)的嗜麥芽窄食單胞菌也有檢出，且檢出2株復(fù)方新諾明耐藥株。與我院2010年監(jiān)測結(jié)果相比，非發(fā)酵糖菌的檢出率明顯上升〔4〕，應(yīng)引起臨床醫(yī)生重視。

細(xì)菌對抗生素的耐藥程度存在較大的地域差異〔3-10〕。全國大范圍或地區(qū)性的耐藥監(jiān)測固然重要，城市和醫(yī)院的小范圍細(xì)菌耐藥性也各有其特點。因此，加強(qiáng)本地及本院細(xì)菌耐藥性監(jiān)測，及時發(fā)現(xiàn)本地區(qū)細(xì)菌耐藥性特征及發(fā)展趨勢，可為臨床經(jīng)驗用藥提供更好的參考依據(jù)。

〔1〕葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜，等.全國臨床檢驗操作規(guī)程〔M〕. 3版.南京：東南大學(xué)出版社，1996：890-920.

〔2〕Clinical and Laboratory Standards Institute.Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing；Twenty-First Informational Supplement〔S〕.2011.

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比利時核能研究中心(SCK-CEN)正在開發(fā)DosDiMEco方法(文獻(xiàn)中當(dāng)時的說法)。該方法包括一個軟件包(用MathCad 2001i professional編寫)，其中包含3個子程序。第一個子程序用于計算參考有機(jī)體由于γ射線產(chǎn)生的能量吸收。另外兩個子程序與此類似，分別計算α和β污染物。該模型從文獻(xiàn)中獲取適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量衰變數(shù)據(jù)。

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（責(zé)任編輯 董杰）

Surveillance of Bacterial Resistance in the Chinese Medicine Hospital of Chuxiong Prefecture in 2011

YANG Zifu,ZHU Xiaoyan
（Chinese Medicine Hospital of Chuxiong Prefecture,Chuxiong,Yunnan 675000,China)

Objective:To investigate the resistance of clinical isolates in the Chinese Medicine Hospital of Chuxiong Prefecture in 2011.Methods:Antimicrobial susceptibility testing of 946 clinical isolates were carried out by Kirby-Bauer（K-B）method and microdilution method.Results:Among the 1 127 clinical isolates,gram-negative bacteria and gram-positive bacteria accounted for 76.8%and 23.2%,respectively.In 865 gram negative bacillis,E.coli,Klebsiella pneumoniae and Pseudomonas aeruginosa. accounted for 45.7%（395/865）,10.6%（92/865）and 9.0%（78/865）,respectively.In 262 gram positive cocci,E.faecium,S.aureus and Staphylococcus epidermidis.accounted for 27.1%（71/262）,24.8%（65/262）and 16.0%（42/262）.Susceptibility test results showed that Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter spp.were detected in 19.2%（15/78）and 32.8%（23/70）pan-resistant strains.The prevalence of emethicillin-resistant Staphylococcus was 83.3%（40/48）in S.aureus and 32.3%（21/65）incoagulasenegative Staphylococcus.Conclusion:Surveillance of bacterial resistance is most important and valuable for guidance of rational selection of antimicrobial agents.

bacterial resistance surveillance;antimicrobial agents;susceptibility testing;resistance rate

R378

B

1672-2345（2013）06-0054-06

10.3969/j.issn.1672-2345.2013.06.016

2012-10-22

2013-03-07

楊自副，副主任檢驗技師，主要從事臨床檢驗及病原微生物檢驗研究.