馬珍珍，劉 艷，呂宏迪，郝少君，張正臣

(中國人民解放軍第371中心醫(yī)院，河南 新鄉(xiāng) 453000)

心腦寧片由人參、當(dāng)歸、川芎等組成，具有活血化瘀、益氣安神等功效，用于治療冠心病、腦血栓等，亦可用于記憶力減退、抗衰老等。為探究其抗衰老的作用機(jī)理，筆者進(jìn)行了心腦寧片對D-半乳糖致小鼠亞急性衰老模型腦組織結(jié)構(gòu)影響的試驗研究?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與儀器

心腦寧片由本院制劑室提供(批號為20110606);尼莫地平片(山東新華制藥股份有限公司，批號為1105036);腦安片(哈藥集團(tuán)三精制藥四廠有限公司，批號為201109002);D-半乳糖(北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號為18Q10260);氯化鈉注射液(鄭州永和制藥有限公司，批號為11103065);PVP絡(luò)合碘消毒劑(洛陽市潔康消毒劑廠，批號為110903);甲醛(煙臺市雙雙化工有限公司，批號為20111101);冰醋酸(天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司，批號為20110113);總超氧化物歧化酶(T-SOD)測試盒(南京建成生物工程研究所，批號為20120316);過氧化氫酶(Catalase CAT)試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號為20120315);谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)測試盒(南京建成生物工程研究所，批號為20120316);丙二醛(MDA)試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號為20120316);考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號為20120317);羧甲基纖維素鈉(天津恒興化學(xué)試劑制造有限公司，批號為20090723)。

小鼠，清潔級，昆明種，河北省動物實驗中心提供，合格證號1202041。

U電子秤(余姚記銘稱重校驗設(shè)備有限公司，型號JM 1000);離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠，型號TDL-40B);電子天平(河南中良科學(xué)儀器有限公司，型號JA1103N);電子天平(上海精天電子儀器廠，型號JT6001);高速冷凍離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司，型號KDC-160HR);電子恒溫水浴鍋(北京永光明醫(yī)療儀器廠，型號DZKW-4);紫外可見分光光度計(日本島津公司，型號 UV-2201);酶標(biāo)儀(made by BIO-RAD Laboratories，Model 680);電動玻璃勻漿機(jī)(寧波新芝生物科技有限公司，型號DY89-1);可調(diào)式移液器(上海雷勃分析儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2．1 試驗方法

取體重18～21 g小鼠72只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，各12只(雌雄各半)，其中5組造D-半乳糖亞急性衰老模型，每天頸背部皮下注射D-半乳糖(生理鹽水配成5%，注射量為0．025 mL/g)造糖代謝衰老模型，每天造模1次，連續(xù)40 d;另1組為空白對照組，每天頸背部皮下注射同體積生理鹽水。從第11天開始，造模型5組分別灌服大、中、小劑量心腦寧片混懸液(2．24 g/kg，1．12 g/kg，0．56 g/kg，112 g/L，56 g/L，28 g/L，0．2 mL/10 g，相當(dāng)于臨床劑量的 30，15，7．5 倍)、腦安片混懸液(0．53 g/kg，26．5 g/L，0．02 mL/g，相當(dāng)于臨床用量的 15 倍)及同體積的生理鹽水;空白對照組灌服同體積的生理鹽水[1-2]。每天給藥1次，連續(xù)30 d。每3 d稱體重1次，根據(jù)體重調(diào)整D-半乳糖和相應(yīng)藥物用量。用藥第40天，各組小鼠均禁食不禁水12 h，于給D-半乳糖和灌胃2 h后，處死小鼠，解剖，取小鼠腦組織，用福爾馬林固定，石蠟包埋，切片，HE染色[3]，光鏡觀察小鼠腦組織結(jié)構(gòu)的變化。

2．2 結(jié)果

心腦寧片對小鼠衰老模型腦組織形態(tài)的影響:空白對照組小鼠腦神經(jīng)細(xì)胞核和胞漿，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞均基本正常，見圖1A;模型組小鼠腦神經(jīng)細(xì)胞核和胞漿明顯水腫增大呈球形，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞均出現(xiàn)固縮現(xiàn)象，見圖1B;腦安片組小鼠部分腦神經(jīng)細(xì)胞核和胞漿出現(xiàn)水腫，部分神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)固縮現(xiàn)象，見圖1C;大劑量心腦寧組小鼠個別腦神經(jīng)細(xì)胞胞漿呈水腫現(xiàn)象，個別神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)固縮現(xiàn)象，見圖1D;中劑量心腦寧組小鼠大多數(shù)腦神經(jīng)細(xì)胞核和胞漿呈水腫現(xiàn)象，少數(shù)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞呈固縮現(xiàn)象，見圖1E;小劑量心腦寧組小鼠腦神經(jīng)細(xì)胞核和胞漿呈水腫現(xiàn)象，大多神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞呈現(xiàn)固縮現(xiàn)象，見圖1F。結(jié)果見表1。

圖1 HE染色組織切片圖(×400)

表1 心腦寧片對D-半乳糖致小鼠亞急性衰老模型腦神經(jīng)細(xì)胞的影響(n=10)

由表1可見，經(jīng) Ridit檢驗，與空白對照組相比，模型組腦組織出現(xiàn)顯著病理變化(P＜0．01)，說明造D-半乳糖致小鼠亞急性衰老模型成功。與模型組相比，大、中劑量心腦寧組可顯著改善D-半乳糖致小鼠亞急性衰老模型腦神經(jīng)細(xì)胞組織形態(tài)(P＜0．01)，小劑量心腦寧組和腦安片組僅有改善腦神經(jīng)細(xì)胞組織形態(tài)的趨勢。

3 討論

心腦寧片是根據(jù)中醫(yī)理論和現(xiàn)代藥理研究成果擬訂的院內(nèi)協(xié)定處方，方中以人參為君藥，調(diào)中，止消渴，通血脈，破堅疾，令人不忘，以其主補(bǔ)五臟，安精神，定魂魄;黃芪為臣藥，補(bǔ)中益氣;當(dāng)歸為佐藥，活血養(yǎng)血;川芎為佐藥，其性善降結(jié)氣，以走肝經(jīng)，氣中之血藥，通行十二經(jīng)，具有理氣、活血化瘀的作用。諸藥合用，集活血化瘀、抗血栓、益氣之功效于一體，既重視疏通脈管，以改善臟器供血，又能改善人體整體功能及代謝，達(dá)到扶正祛邪之目的。試驗結(jié)果顯示，與空白對照組相比，模型組腦組織出現(xiàn)顯著病理變化(P＜0．01)，說明造D-半乳糖致小鼠亞急性衰老模型成功。與模型組相比，大、中劑量心腦寧組可顯著改善D-半乳糖致小鼠亞急性衰老模型腦神經(jīng)細(xì)胞組織形態(tài)(P＜0．01)，小劑量心腦寧組和腦安片組僅有改善腦神經(jīng)細(xì)胞組織形態(tài)的趨勢。本試驗結(jié)果表明，心腦寧片、腦安片均能改善腦組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，但心腦寧片效果更好，其中以大劑量心腦寧組(2．24 g/kg)效果最好。

致謝:本試驗在河南中醫(yī)學(xué)院苗明三教授指導(dǎo)下完成，特此致謝。

[1]苗明三，方曉艷．蘆薈多糖對衰老模型小鼠的影響[J]．中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2005，22(3):181-184．

[2]苗明三，顧麗亞，方曉燕，等．阿膠益壽顆粒對小鼠衰老模型的影響[J]．中國中藥雜志，2004，29(8):817-818．

[3]沈霞芬．家畜組織學(xué)與胚胎學(xué)[M]．北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2011:148．