張海峰 李金海 戴華衛(wèi) 孫廣正 翟華偉

直腸癌組織腫瘤轉(zhuǎn)移消失蛋白的表達(dá)及其臨床意義

張海峰 李金海 戴華衛(wèi) 孫廣正 翟華偉

目的 探討腫瘤轉(zhuǎn)移消失（MIM）蛋白在直腸癌組織中的表達(dá)及其結(jié)合臨床分期對(duì)直腸癌預(yù)后的指導(dǎo)意義。 方法采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)MIM蛋白在直腸癌組織，直腸腺瘤組織，直腸正常組織中的表達(dá)，并用單因素分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。用Spearman等級(jí)相關(guān)分析MIM蛋白表達(dá)水平與直腸癌患者TNM分期的關(guān)系。Kaplan-Meier生存曲線分析直腸癌患者5年生存率情況。 結(jié)果 直腸癌組織MIM蛋白表達(dá)陽(yáng)性率（83.2%）較直腸正常組織的21.6%和直腸腺瘤組織的28.8%均明顯增高（均P＜0.05）；MIM蛋白表達(dá)水平與直腸癌患者是否處于腫瘤早期、是否有3枚以上淋巴轉(zhuǎn)移和腫瘤分化程度有關(guān)（均P＜0.05），與直腸癌患者的性別、年齡、腫瘤直徑、CEA水平、腫瘤位置高低均無(wú)關(guān)（均P＞0.05）。MIM蛋白表達(dá)水平與臨床TNM分期呈正相關(guān)，即臨床TNM越晚期MIM蛋白表達(dá)水平越高（P＜0.05）。MIM蛋白陽(yáng)性患者5年生存率明顯低于陰性及弱陽(yáng)性患者（P＜0.05）。 結(jié)論 MIM蛋白高表達(dá)可能與直腸癌的發(fā)生及生物學(xué)行為有關(guān)，并提示預(yù)后不良。

癌 直腸組織 腫瘤轉(zhuǎn)移消失蛋白 臨床研究

【 Abstract】 Objective To investigate the expression of MIM (missing in metastasis)protein in rectal carcinoma and its clinicopathological significance.Methods The expression of MIM protein was detected by immunohistochemistry in tissue samples of rectal carcinoma(n=143),rectal adenoma(n=14)and normal rectal mucosa(n=37)．Correlation between MIM expression and clinicopathological parameters was analyzed with Spearman rank regression.Postoperative 5-year survival was evaluated using Kaplan-Meier survival curve. Results The expression of MIM in rectal carcinoma was higher than those in normal rectal tissue(U=179.000,P＜0.05)and rectal adenoma(U=112.500,P＜0.05).The expression of MIM protein was correlated with clinical stage,lymphatic metastasis and tumor differentiation (separately U=256.000,227.000,236.500,all P＜0.05),but not correlated with gender，age，tumor diameter,CEA level and tumor location(P＞0.05)．MIM expression was also correlated with TNM stage of rectal cancer(r=0.369,P＜0.05)．The 5-year survival in patients with positive MIM expression was significantly poorer than those with negative or weakly positive expression (32.6%vs 67.8%,χ2=6.712,P＜0.05). Conclusion High expression of MIM protein may be associated in progression of rectal carcinoma and poor prognosis．

【 Key words】 Carcinoma Rectal tissue Missing in metastasis protein Clinical research

提高直腸癌診療水平、改善患者預(yù)后的主要措施是早期診斷和早期治療，因此研發(fā)早期分子標(biāo)志物以提高對(duì)直腸癌診斷及預(yù)后判斷的水平是目前研究的重點(diǎn)[1]。腫瘤轉(zhuǎn)移消失（missing in metastasis，MIM）蛋白又稱腫瘤轉(zhuǎn)移抑制（metastasis suppressor 1，MTSS1）蛋白，是一種新發(fā)現(xiàn)的蛋白，參與多種腫瘤的生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移過(guò)程并有著廣闊的應(yīng)用前景[2]。本研究通過(guò)免疫組化法觀察MIM蛋白在不同病理類型直腸癌組織中的表達(dá)情況，分析其對(duì)直腸癌的臨床意義。

1 材料和方法

1.1 病理標(biāo)本 （1）直腸癌組：本院2004-01—2007-01手術(shù)切除的143例直腸癌患者的手術(shù)標(biāo)本均行病理檢查確診為直腸癌，患者男81例，女62例，年齡36～82歲，平均57.7歲，術(shù)前均未行放療或化療。（2）直腸腺瘤組：同期經(jīng)術(shù)后病理檢查證實(shí)為直腸腺瘤的14例患者的手術(shù)標(biāo)本，患者年齡41～78歲，平均58.1歲。（3）直腸正常組織：取自上述37例直腸癌患者距腫瘤邊緣3cm以上的正常直腸組織，且病理檢查證實(shí)無(wú)癌細(xì)胞。

1.2 免疫組化染色檢測(cè) MIM抗體 (兔多克隆抗體)及二抗購(gòu)自美國(guó)eBioscience公司。使用LAB VISION 2D

1.3 結(jié)果判定 細(xì)胞膜及胞質(zhì)有棕黃色染色為陽(yáng)性反應(yīng)，高倍鏡下計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞。綜合細(xì)胞染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分率作為判斷標(biāo)準(zhǔn)：不著色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，深棕色3分；無(wú)染色陽(yáng)性細(xì)胞為0分，陽(yáng)性細(xì)胞＜25%為1分，25%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色強(qiáng)度和陽(yáng)性百分率的乘積＞3分為免疫反應(yīng)陽(yáng)性，按乘積分?jǐn)?shù)將染色結(jié)果分為4個(gè)等級(jí)：陰性（-）0～2分，弱陽(yáng)性（+）3～5分，中等陽(yáng)性（++）6～8分，強(qiáng)陽(yáng)性（+++）9～12分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件。組間等級(jí)相關(guān)資料的比較采用秩和檢驗(yàn)。兩因素相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。繪制Kaplan-Meier生存曲線，采用Log-rank法檢驗(yàn)生存率，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 MIM蛋白在直腸良惡性組織中的表達(dá) MIM蛋白在絕大多數(shù)直腸癌組織中表達(dá)為陽(yáng)性，有些甚至是強(qiáng)陽(yáng)性，陽(yáng)性表達(dá)位于胞質(zhì)區(qū)域，部分胞質(zhì)染色為棕黃色或棕褐色，細(xì)胞核內(nèi)無(wú)表達(dá)（圖1a）；而在大多數(shù)直腸腺瘤和正常組織中表達(dá)為陰性，少部分為弱陽(yáng)性（圖1b、c）。MIM蛋白表達(dá)陽(yáng)性率直腸正常組織為21.6%，直腸腺瘤組織為28.8%，兩者之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（U=89.000，P＞0.05）；而直腸癌組織陽(yáng)性率為83.2%，遠(yuǎn)高于正常組織與直腸腺瘤組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（U=179.000、112.500，均P＜0.05），詳見(jiàn)表1。另外早期（TNM分期為Ⅰ、Ⅱ期）直腸癌組織陽(yáng)性率78.8%，亦高于正常組織與直腸腺瘤組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（U=228.000、198.000，均P＜0.05），詳見(jiàn)表2。

表1 不同直腸組織MIM蛋白表達(dá)水平的比較（例）

表2 直腸正常、腺瘤組織與早期直腸癌組織的MIM蛋白表達(dá)水平的比較（例）

2.2 直腸癌組織中MIM蛋白的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 MIM蛋白在直腸癌組織中的表達(dá)與性別、年齡、腫瘤大小、CEA水平及腫瘤位置高低無(wú)關(guān)，而與腫瘤是否處于早期、是否有3枚以上區(qū)域性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及分化程度有關(guān)，詳見(jiàn)表3。MIM蛋白表達(dá)水平與臨床TNM分期間呈正相關(guān)，即臨床TNM分期越晚，所對(duì)應(yīng)的MIM蛋白表達(dá)水平越高，詳見(jiàn)表4。

表3 臨床病理參數(shù)與直腸癌組織中MIM蛋白表達(dá)的關(guān)系（例）

表4 TNM分期與直腸癌組織中MIM蛋白表達(dá)的關(guān)系（例）

2.3 MIM蛋白表達(dá)與直腸癌患者生存率的關(guān)系 143例直腸癌患者術(shù)后隨訪5年，其中10例失訪，實(shí)際隨訪133例。MIM蛋白陰性及弱陽(yáng)性者共隨訪到87例，死亡28例，5年生存率為67.8%；MIM蛋白中等陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性者共隨訪到46例，死亡31例，5年生存率32.6%， MIM蛋白陰性及弱陽(yáng)性者5年生存率明顯高于MIM蛋白中等陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 6.712，P＜0.05），見(jiàn)圖2。

圖1 MIM蛋白在不同病理類型直腸組織中的表達(dá)（a：直腸癌中MIM蛋白強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；b：直腸腺瘤中MIM蛋白弱陽(yáng)性表達(dá)；c：直腸正常組織中陰性表達(dá)；免疫組織化學(xué)染色，×200）

圖2 MIM蛋白表達(dá)與直腸癌患者的生存率關(guān)系

3 討論

MIM蛋白在腫瘤中的作用目前仍在探索之中。MIM基因最先由Lee等[3]于2002年在研究膀胱癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制時(shí)通過(guò)改良的mRNA差異顯示技術(shù)發(fā)現(xiàn)，并認(rèn)為該基因是腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因。Parr等[4]發(fā)現(xiàn)MIM蛋白在乳腺癌細(xì)胞中扮演一個(gè)控制轉(zhuǎn)移特性的角色，MIM蛋白低表達(dá)的乳腺癌患者，其生存率低，預(yù)后差。Dawson等[5]研究表明，MIM蛋白通過(guò)調(diào)控表皮生長(zhǎng)因子信號(hào)通路從而抑制頭頸部鱗癌的轉(zhuǎn)移。以上研究都支持了MIM蛋白是一種新的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因子的觀點(diǎn)。但隨著研究的深入，越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)MIM蛋白還有諸多其他作用。Ma等[6]首次報(bào)道了人肝細(xì)胞癌中MIM mRNA的過(guò)表達(dá)可導(dǎo)致MIM蛋白的過(guò)表達(dá)，可促進(jìn)肝細(xì)胞癌的早期發(fā)展。Xie等[7]認(rèn)為MIM蛋白是一種多功能蛋白，在促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮作用。這一觀點(diǎn)與Lee等[3]所認(rèn)為的MIM基因是腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因的結(jié)論完全相反。Ma等[6]認(rèn)為既往對(duì)MIM蛋白作用的研究結(jié)果不盡一致，甚至完全相反的原因可能與MIM蛋白表達(dá)具有組織類型特異性有關(guān)。此外，Mattila等[8]認(rèn)為MIM基因不是腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，而是作為與Rac、actin以及actin偽足形成相關(guān)蛋白相作用的支架蛋白。Lin等[9]認(rèn)為可直接作用于肌動(dòng)蛋白，并通過(guò)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑影響細(xì)胞骨架，與cortactin一起參與血小板源生長(zhǎng)因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，從而改變細(xì)胞與基質(zhì)間的黏附狀態(tài)。

MIM蛋白在腫瘤中所發(fā)揮的作用機(jī)制也是目前研究的熱點(diǎn)。MIM蛋白是一種新的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，基因定位于8q24.1上，通過(guò)結(jié)合細(xì)胞內(nèi)不同的分子改變肌動(dòng)蛋白的動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)，參與細(xì)胞骨架的重塑、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化等[10]。調(diào)節(jié)MIM蛋白表達(dá)的具體機(jī)制目前尚不清楚，可能與DNA甲基化相關(guān)，但MIM蛋白作為信號(hào)通路蛋白已得到證實(shí)。Callahan等[11]發(fā)現(xiàn)MIM基因是一個(gè)應(yīng)答基因，它可能有Gli轉(zhuǎn)錄激活功能，MIM蛋白可與鋅指轉(zhuǎn)錄因子Glil/Gli2及Sufu結(jié)合形成三元復(fù)合體促進(jìn)Gli介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄，激活Hedgehog(Hh)-Glioblas-toms（Gli）信號(hào)通路，因此，編碼MIM的基因被認(rèn)為是SHh相關(guān)通路的基因，是SHh-Gli通路的新成員，在成瘤和瘤體生長(zhǎng)過(guò)程中起促進(jìn)作用，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖與侵襲。

在直腸癌的臨床治療中，有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的數(shù)量是影響預(yù)后的重要因素之一[12]。Moran等[13]的研究表明，如果淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量大于3枚，其局部復(fù)發(fā)率顯著升高，且5年生存率也明顯降低。因此，本研究在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移量上選用3枚作為分界點(diǎn)進(jìn)行研究。本研究結(jié)果顯示，在直腸癌組中MIM蛋白的表達(dá)率明顯高于直腸正常組織組及直腸腺瘤組，提示其在腫瘤的形成中具有一定作用。此外，MIM蛋白的表達(dá)也與腫瘤的臨床病理特點(diǎn)相關(guān)，在低分化腫瘤中，陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于中、高分化腫瘤，這表明其可能參與腫瘤的分化調(diào)控。晚期直腸癌MIM蛋白的表達(dá)水平明顯高于早期直腸癌，且MIM蛋白表達(dá)水平與直腸癌TNM分期呈正相關(guān)，并也與是否有3枚以上淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)，這些結(jié)果提示MIM蛋白的表達(dá)與腫瘤的生物學(xué)行為相關(guān)，可能是腫瘤惡性程度的一種表現(xiàn)。以上研究結(jié)果提示MIM蛋白可能在直腸癌形成及進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，但具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

總之，MIM蛋白在直腸癌早期就已經(jīng)高表達(dá)且陽(yáng)性表達(dá)者5年生存率下降，提示MIM蛋白可能成為早期發(fā)現(xiàn)及評(píng)估直腸癌等惡性腫瘤預(yù)后的重要指標(biāo)之一，為臨床治療及預(yù)后評(píng)估提供新的靶點(diǎn)。

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（本文編輯:沈叔洪）

Expression of MIM protein in rectal carcinoma and its clinicopathological significance

ZHANG Haifeng，LI Jinhai，DAI Huawei，et al.

Department of General Surgery，the Third Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College，Rui’an 325200,China

325200 瑞安，溫州醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院普通外科

張海峰，E-mail：zhanghaifeng1020@126.com全自動(dòng)免疫組化染色儀，以Elivision二步法進(jìn)行染色。并使用泰康全自動(dòng)組織脫水機(jī)（TKY-TSF）、惠達(dá)組織包埋機(jī)（HD-310A）、惠達(dá)切片機(jī)（HD-325B）、惠達(dá)組織漂烘儀（HD-330）、OLYMPUS BS51顯微鏡及哈爾濱海慈病理圖文分析系統(tǒng)。石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化，其余操作按照Elivision試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。檢測(cè)過(guò)程均在自動(dòng)免疫組化染色儀中按照事先編好的程序完成。

2012-05-07）