宋 林，張 麗，許 康

(湖北省新華醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)科，武漢 430015)

腦卒中是老年人的常見(jiàn)疾病，具有高發(fā)病率、高病死率以及高致殘率的特點(diǎn)，嚴(yán)重危害人類(lèi)健康,給社會(huì)和家庭造成了沉重的精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。缺血性腦卒中約占全部卒中的75%左右，對(duì)其治療主要集中在促進(jìn)卒中后神經(jīng)系統(tǒng)功能的恢復(fù)、改善腦部循環(huán)、抗氧化自由基損傷、抗興奮性氨基酸等方面[1-2]。槲皮素是中藥中廣泛存在的黃酮類(lèi)化合物，研究[3]證實(shí)其具有抗氧化、清除自由基、抗炎、抗腫瘤等功效。傳統(tǒng)中醫(yī)針刺治療也被認(rèn)為能夠很好的改善腦血管再通(即再灌注)造成的腦神經(jīng)損傷。本試驗(yàn)研究目的旨在探討槲皮素與針刺療法聯(lián)用在體內(nèi)對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及抗炎機(jī)制，從而為臨床更好的進(jìn)行腦保護(hù)治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 健康SD雄性大鼠100只，體質(zhì)量(200±20) g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。槲皮素購(gòu)自sigma公司；水合氯醛購(gòu)自上海試劑一廠;考馬斯亮蘭蛋白測(cè)定試劑盒、谷胱甘肽試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶試劑盒、丙二醛試劑盒、總抗氧化能力試劑盒等均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2 動(dòng)物分組與干預(yù) 100只大鼠隨機(jī)均分成5組，每組20只，分別為假手術(shù)組、模型組、槲皮素干預(yù)組、針刺干預(yù)組、槲皮素針刺聯(lián)合干預(yù)組。假手術(shù)組除不進(jìn)行栓線外，其余處理皆與模型組相同。槲皮素干預(yù)于實(shí)驗(yàn)前3 d開(kāi)始灌胃給藥,1次/d，造模前1 h再次灌胃給藥，每次給藥劑量均為100 mg/kg。電針干預(yù)依據(jù)《大鼠穴位圖譜的研制》[4]及《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》進(jìn)行選穴，分別選擇人中穴(也稱(chēng)水溝穴，位于大鼠唇裂鼻尖下1 mm正中處，直或向上刺1 mm)、中沖穴(雙側(cè)，中指末節(jié)尖端中央，直刺1 mm，選穴依據(jù)1999年9月第1版《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》附常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的針灸穴位)及風(fēng)府穴(也稱(chēng)天門(mén)穴，位于大鼠枕骨頂嵴后枕寰關(guān)節(jié)背凹陷處，向后下方斜刺1 mm進(jìn)針)。針刺組動(dòng)物在造模后1 h通以電針治療儀(G6805型，疏密波)，頻率為2 Hz，刺激強(qiáng)度為2 mA,以大鼠肢體或針柄微微顫動(dòng)為度，每次持續(xù)時(shí)間20 min。

1.3 動(dòng)物模型的建立 參照Z(yǔ)ea Longa等[5]方法并稍加改良建立大鼠中動(dòng)脈栓塞缺血/再灌注損傷模型，使用10%的水合氯醛4 mL/kg腹腔注射麻醉大鼠，頸部正中切口，分離出頸總動(dòng)脈(CCA)、頸外動(dòng)脈(ECA)及頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)。結(jié)扎右側(cè)CCA的近心端、ECA及其分支動(dòng)脈。沿ICA向下分離翼顎動(dòng)脈，根部結(jié)扎該分支。在ICA近端備線，遠(yuǎn)端放置動(dòng)脈夾，CCA分叉處切口，插入直徑約0.22 mm的尼龍線(深度約為17～20 mm)，尼龍線沿ICA入顱至大腦前動(dòng)脈，阻斷大腦中動(dòng)脈所有血流來(lái)源。缺血1 h后，緩慢拉出尼龍線再灌注。

1.4 神經(jīng)功能評(píng)分 存活鼠在灌注24 h后，參照Z(yǔ)ea Longa等[5]標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。0分：正常，無(wú)任何神經(jīng)損傷癥狀及功能缺陷；1分：不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪；2分：向外側(cè)轉(zhuǎn)圈；3分：向?qū)?cè)傾倒；4分：不能行走，意識(shí)喪失。行為評(píng)分結(jié)束后，快速斷頭并于冰上分離患側(cè)腦組織，取皮質(zhì)100 mg，制成5%的組織勻漿。同時(shí)取新鮮血液5 mL，使用離心機(jī)以3 000 r/min,離心10 min，分離血漿，置于-80 ℃冰箱保存，待測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 槲皮素與針刺聯(lián)用對(duì)缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能的影響 見(jiàn)表1。

表1 槲皮素與針刺聯(lián)用對(duì)缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能的影響(±s,n=20)

2.2 槲皮素與針刺聯(lián)用對(duì)缺血再灌注大鼠腦組織抗氧化水平的影響 見(jiàn)表2。

表2 槲皮素與針刺聯(lián)用對(duì)缺血再灌注大鼠腦組織抗氧化水平的影響(±s,n=20)

3 討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，缺血性腦卒中乃氣血逆亂，產(chǎn)生風(fēng)、火、痰、瘀，進(jìn)而導(dǎo)致腦脈痹阻所致。多年來(lái)的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)[6]認(rèn)為，缺血性腦血管病的栓塞期給予及時(shí)有效的針刺治療能夠很好的改善腦血管再通(即再灌注)造成的損傷，降低本病的致死率和致殘率。研究[7]提示，針刺對(duì)腦缺血再灌注所致的自由基損傷有明顯的改善作用，提示針刺可以通過(guò)改善氧化應(yīng)激損傷發(fā)揮神經(jīng)元保護(hù)作用[8]。中醫(yī)治療腦卒中的關(guān)鍵是“竅閉神匿，神不導(dǎo)氣”，本實(shí)驗(yàn)選用的人中、中沖、風(fēng)府3穴共奏醒腦開(kāi)竅、健腦補(bǔ)髓、疏風(fēng)通絡(luò)的功效。

槲皮素具有超強(qiáng)抗氧化及清除自由基的作用，同時(shí)還被證實(shí)[9]具有抗癌、抗感染、抗病毒、降糖、降壓、免疫調(diào)節(jié)及心血管保護(hù)作用等多種生物學(xué)功效。有研究[10]提示其可能通過(guò)抑制海馬錐體神經(jīng)元的外向鉀電流進(jìn)而對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)損傷起保護(hù)作用，從而提示槲皮素對(duì)缺血樣損傷的神經(jīng)具有保護(hù)作用。

本研究結(jié)果表明，槲皮素與針刺聯(lián)用能夠有效改善腦缺血再灌注大鼠的神經(jīng)損傷，提高腦組織抗氧化系統(tǒng)的能力，減少脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，對(duì)腦神經(jīng)具有良好的保護(hù)作用。從而提示選用藥物與物理治療相結(jié)合的方式治療缺血性腦卒中與單一治療方式相比具有更好的療效。此研究將為缺血性腦卒中的臨床治療提供一定的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及理論基礎(chǔ)。

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