楊雄志，王翰華

(浙江醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，浙江 寧波 315100)

三葉青(TetrastigmaeRadix)為葡萄科植物三葉崖爬藤(TetrastigmahemseyanumDielsetGld)的干燥塊根，分布于我國(guó)浙江、江西、福建、湖北、廣東、廣西等地[1]。有清熱解毒、祛風(fēng)化痰、活血止痛的功能，臨床用于治療高熱驚厥、腹痛、肺炎、哮喘、肝炎等癥[1-2]。近10年來(lái)，三葉青作為浙江特產(chǎn)藥材及瀕危的植物資源，由于其在抗腫瘤、抗病毒、治高熱等臨床應(yīng)用中具有顯著的療效，現(xiàn)倍受醫(yī)藥工作者的廣泛關(guān)注。為了進(jìn)一步探討三葉青提取物解熱作用及其機(jī)理，現(xiàn)研究其對(duì)酵母致大鼠發(fā)熱和下丘腦組織中5-HT、NE、DA含量的影響，為今后臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)藥物 三葉青采于寧波市東錢湖郊區(qū)，經(jīng)本校中藥鑒定教研室鑒定為葡萄科植物三葉崖爬藤(TetrastigmahemseyanumDielsetGld)的干燥塊根。三葉青提取物(Extract of Tetrastigmae Radix，ETR)的制備：將1 000 g藥材常規(guī)加工粉碎后過(guò)20目篩，用水回流提取2次，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至相當(dāng)于含生藥2 g/mL,置冰箱備用。實(shí)驗(yàn)用劑型為注射液。

1.2 動(dòng)物 Wiser大鼠雄性，體質(zhì)量(200±20) g，由浙江醫(yī)科院動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)前置動(dòng)物于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)適應(yīng)環(huán)境1周，5只/籠。光照節(jié)律12L:12D(6:00～18:00)，室溫(22±2)℃，保持動(dòng)物室安靜。相對(duì)濕度保持30%～40%，喂常規(guī)顆粒飼料及飲用水。

1.3 試劑 干酵母(梅山馬利有限公司，批號(hào):100518)；阿司匹林腸溶片(上海信誼藥廠有限公司，批號(hào)：100925)；鄰苯二甲醛(上海金穗生物科技有限公司，批號(hào)100628)；L-半胱氨酸(中國(guó)科學(xué)院微生物研究所產(chǎn)品，批號(hào)：100508)；5-羥色胺(5-HT:Sismg公司產(chǎn)品)；NE、DA(Fluda公司產(chǎn)品)；(5-HT、NE、DA標(biāo)準(zhǔn)液：按游離胺計(jì)算，用0.l mol/L的HCI配成1 mg/mL)貯備液，冰凍保存，臨時(shí)用0.1 mol/L的HCL稀釋成1 μg/mL)[4]。酸性正丁醇，堿式亞硫酸鈉，磷酸等試劑均為市售分析純。

1.4 儀器 RF-5301PC型熒光分光光度計(jì)：日本島津公司；便攜式數(shù)字測(cè)溫儀：上海醫(yī)用儀表廠產(chǎn)品；電子天平：瑞士產(chǎn)品。

2 方法與結(jié)果

2.1 三葉青提取物(ETR)對(duì)大白鼠酵母發(fā)熱的影響[3]選取雌雄大白鼠若干，預(yù)測(cè)體溫3 d，3次/d。實(shí)驗(yàn)當(dāng)日測(cè)定大白鼠基礎(chǔ)肛溫，取均值為正常體溫者(2次體溫波動(dòng)>0.3剔除)作為實(shí)驗(yàn)用大白鼠。用20%酵母混懸液以10 mL/kg量注入大白鼠背部皮下，6 h后測(cè)量其肛溫，凡直腸溫度上升不到0.8 ℃的大白鼠剔除不用。取合格大白鼠100只分為10組，空白對(duì)照組(NS)、ETR按高中低劑量組(6.0、4.0、2.0 g/kg)分為3組、陽(yáng)性藥組(阿司匹林100 mg/kg)，均注射給藥。給藥后，每隔1 h測(cè)量肛溫1次，連續(xù)測(cè)量5次。結(jié)果見表1。另外5組(由模型對(duì)照組替換陽(yáng)性藥組，其他不變)在注射給藥后，1 h后測(cè)肛溫，并將動(dòng)物快速斷頭，以灰結(jié)節(jié)及視交叉之間的中心點(diǎn)為中心確定下丘腦的位置，稱取一定量的下丘腦組織，立即放入灌氮罐內(nèi)，速凍于-80 ℃冰箱保存,備用以留做5-HT、NE、DA含量的提取和測(cè)定[4]。

表1 三葉青提取物(ETR)對(duì)大白鼠酵母發(fā)熱的影響(±s,n=10) h

2.2 三葉青提取物(ETR)對(duì)大白鼠下丘腦組織5-HT、NE、DA含量的影響[5]取一定量冰凍的下丘腦組織，放入預(yù)先冰冷的玻璃勻漿器中，每100 mg腦組織加預(yù)冷酸性正丁醇(1∶30)制成勻漿，離心。1)取正丁醇上清液，加正庚烷2.5 mL，加0.1 mol/L HCIl mL振蕩，離心。取水相，加入L半胱氨酸與OPT反應(yīng),用熒光分光光度計(jì)在480 nm/365 nm處測(cè)定5-HT熒光強(qiáng)度。2)取正丁醇上清液，加磷酸緩沖液2.1 rnL,加0.01 mol/HCI 0.2 mL，內(nèi)標(biāo)管加入NE、DA標(biāo)準(zhǔn)液0.l mL，離心。取水相，在堿性條件下與碘試劑反應(yīng)，生成具有熒光性的化合物。用熒光分光光度計(jì)在480 nm/385 nm測(cè)定NE熒光強(qiáng)度。在375 nm/325 nm處測(cè)定DA熒光強(qiáng)度。大白鼠下丘腦5-HT、NE，DA的含量以ng/mg鮮腦組織的濕重?cái)?shù)表示。結(jié)果見表2。

3 小結(jié)

三葉青是浙江省一味具有地方特色、分布甚廣、蘊(yùn)藏量大、優(yōu)勢(shì)發(fā)展、效果顯著的中藥材。十多年來(lái)，許多學(xué)者借助《中藥大辭典》等著作以及古人對(duì)三葉青臨床應(yīng)用的寶貴經(jīng)驗(yàn)，對(duì)其抗腫瘤、抗病毒等方面的現(xiàn)代研究取得了一定的成效。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明三葉青提取物具有較強(qiáng)的解熱降溫作用。這與現(xiàn)已證實(shí)的體溫調(diào)節(jié)的單胺學(xué)說(shuō)(中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)參與體溫調(diào)節(jié)活動(dòng)，并且是溫度敏感神經(jīng)元活動(dòng)的神經(jīng)化學(xué)基礎(chǔ);5-HT、NE、DA含量的動(dòng)態(tài)平衡可保持體溫的恒定，單胺參與體溫調(diào)節(jié)及致熱原通過(guò)釋放單胺引起發(fā)熱)基本一致。

表2 三葉青提取物(ETR)對(duì)大白鼠下丘腦組織5-HT、NE、DA含量的影響(±s,n=10) ng/mg

三葉青提取物對(duì)酵母致發(fā)熱大白鼠體溫升高有顯著的降低作用。盡管三葉青提取物高中低3個(gè)劑量效果有一定的差異，但高劑量尤為突出。其主要表現(xiàn)在大白鼠給藥后1 h體溫顯著下降，體溫變化值與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；下丘腦組織中5-HT、NE、DA含量亦明顯降低，與正常對(duì)照組比較也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。所以,三葉青提取物的解熱作用，影響體溫調(diào)節(jié)中樞發(fā)熱介質(zhì)5-HT、NE、DA代謝，降低下丘腦組織中5-HT、NE、DA含量，使體溫調(diào)定點(diǎn)下移可能是三葉青提取物降熱作用機(jī)理之一。

[1]中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所.中藥志(第2冊(cè))[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1984:2198.

[2]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大詞典(下冊(cè))[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1977:2123.

[3]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1996:298-300.

[4]李儀奎.中藥藥理研究方法學(xué)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1992:182.

[5]杜旭,江志君,劉曉謙,等.白樺提取物的解熱作用及對(duì)下丘腦組織中5-HT,NE,DA含量影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2001,7(9):29.