韓衛(wèi)杰　黃曉鳳　劉曉華

摘要：以人工養(yǎng)殖的斑嘴鴨（Anas poecilorhyncha）為研究對象，建立適于斑嘴鴨的人工采精技術(shù)，通過感官評定和顯微鏡鏡檢，對斑嘴鴨精液品質(zhì)進行評價，并對其精液稀釋液進行篩選。結(jié)果表明，斑嘴鴨的人工采精可采用背腹式按摩法，采精成功率可達80%以上。斑嘴鴨精液呈乳白色，采精量約0.08 mL，精子密度約8.0億個/mL，活力0.7。1號稀釋液的精子有效存活時間、生存指數(shù)及總存活時間優(yōu)于其他稀釋液（P<0.05）。

關(guān)鍵詞：斑嘴鴨（Anas poecilorhyncha）；人工采精；精液品質(zhì)

中圖分類號：S864.3 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）07-1610-03

斑嘴鴨（Anas poecilorhyncha）又名谷鴨、黃嘴尖鴨、火燎鴨，屬雁形目鴨科鴨屬，其肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)豐富、野味濃郁，且有一定的保健功效，受到廣大消費者的青睞，是集食用、保健和觀賞于一體的經(jīng)濟鳥類。2000年斑嘴鴨被中國列入“三有”動物名錄。近年來，由于過度獵取，加之生境條件惡化，野生斑嘴鴨種群數(shù)量日趨減少[1]。為了緩減野生斑嘴鴨的保護壓力、開辟農(nóng)村致富新途徑，斑嘴鴨人工養(yǎng)殖得到政府的扶持，在中國快速發(fā)展起來，已成為農(nóng)村產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整、農(nóng)民快速致富的重要途徑之一。

目前，斑嘴鴨的人工養(yǎng)殖管理粗放、培育程度低，所養(yǎng)殖群體的優(yōu)良性狀需要進一步選育。另外，由于斑嘴鴨是家鴨的祖先之一[2，3]，可利用其脂肪沉積少、肉質(zhì)細嫩、抗病力強等特點對家鴨品種進行改良[4]。但斑嘴鴨與家鴨體型差異過大、自然交配存在一定困難是制約其雜交利用的技術(shù)瓶頸。為充分發(fā)揮優(yōu)秀斑嘴鴨個體的遺傳優(yōu)勢，加快斑嘴鴨良種選育及雜交利用，本試驗對斑嘴鴨人工采精技術(shù)及精液稀釋液進行研究，以期為斑嘴鴨優(yōu)良性狀基因利用奠定技術(shù)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物及日糧 10只成年健康雄性斑嘴鴨由江西省林業(yè)科學(xué)院野生動物馴養(yǎng)繁育基地提供，平均體重1 100 g。供試斑嘴鴨采取地面平養(yǎng)，與雌性隔離；自由采食、飲水；日糧采用全價顆粒飼料，含粗蛋白16%，消化能10.8 MJ/kg。

1.1.2 試驗儀器及試劑 生物顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、試管、精密試紙（pH 5.5～9.0）、血球計數(shù)器、移液器、紗布、氯化鈉、葡萄糖、果糖、谷氨酸鈉、醋酸鈉、檸檬酸鈉、氯化鎂、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉。

1.2 方法

1.2.1 斑嘴鴨人工采精 根據(jù)目前禽類常用的人工采精技術(shù)，在電刺激采精法和背腹式按摩采精法的基礎(chǔ)上探索適合斑嘴鴨的采精技術(shù)和方法。

1.2.2 精液品質(zhì)檢測評定方法 采用感官評定和顯微鏡檢查對精液品質(zhì)進行評定。感官評定指標主要有采精量、色澤、氣味等。顯微鏡檢查主要確定精子活力和精子密度，精子活力檢查方法采用0～1.0的10級評分法，即滴1滴精液于載玻片上，蓋上蓋玻片置于顯微鏡下，觀察做直線運動的精子所占的比例，確定活力。精子密度評定方法為取10 μL精液緩慢注入含1.99 mL 3%NaCl的溶液中，搖勻，靜置2 h以殺死精子，隨后取1滴稀釋均勻的精液于血細胞計數(shù)板的計數(shù)室邊緣靜置2 min后鏡檢，統(tǒng)計精子數(shù)，計算精子密度。精液pH用精密試紙測定。

1.2.3 精液稀釋液篩選試驗 采用已報道的家禽精液常用稀釋液配方[5-7]，將不同稀釋液與精液按2∶1比例稀釋，在室溫下保存，每2 h進行一次鏡檢，記錄精子總存活時間、有效存活時間并計算精子生存指數(shù)。所用稀釋液的配方見表1。

有效存活時間：精子活力在0.5以上的維持時間[8]。

精子生存指數(shù)=t1×[（m1+m2）/2]+t2×[（m2+m3）/2]+…+tn×[（mn+mn+1）/2]，式中t為2次檢查的間隔時間，m為檢查時精子活力。

1.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)分析處理采用SPSS 16.0進行單因素方差分析，利用LSD法進行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 斑嘴鴨采精技術(shù)

進行人工采精的斑嘴鴨應(yīng)具備體格健壯、羽毛鮮亮整潔、性反射良好等特征，與雌性斑嘴鴨隔離飼養(yǎng)。采精前2 h應(yīng)停止喂食，并清除泄殖腔附近的羽毛，以防止污染精液。

采精過程由一人完成。采精時，采精員坐在凳子上，將公鴨放于膝上，頭向下，用雙腿對公鴨進行固定，用右手固定公鴨雙腳，右手中指與無名指之間夾住集精管，管口向外。左手掌心向下緊貼公鴨背腰部，并向尾部方向撫摸20～30次，同時用右手輕輕擠壓其腹部。公鴨泄殖腔出現(xiàn)性反射，生殖器將要外翻時，左手向外壓尾羽，用食指和拇指擠壓泄殖腔基部；同時也用右手食指和拇指擠壓泄殖腔基部，使生殖器外翻。再擠壓數(shù)次后可見乳白色精液流出，此時用右手所夾的集精管收集精液。采精完成后將斑嘴鴨放回。

斑嘴鴨經(jīng)2周人工采精的調(diào)教能夠形成良好的性反射。利用上述采精技術(shù)，可一個人完成斑嘴鴨采精過程，每次采精用時大約3 min左右，采精成功率達80%以上，大大提高了工作效率。采精后斑嘴鴨恢復(fù)良好，未見異常反應(yīng)。采精頻率以2次/周為宜，每次間隔3～4 d。

2.2 斑嘴鴨精液感官評定和精液生理指標

2012年4月中旬至5月中旬，對10只斑嘴鴨進行了總計60次的背腹式按摩法采精，每只每次采精時間約2～3 min，采精成功率達80%以上。斑嘴鴨精液呈乳白色，采精量介于0.05～0.12 mL之間，平均為0.08 mL。精子密度為6.0億～10.0億個/mL，平均為8.0億個/mL，活力0.7級以上。精液pH為6～7，偏酸性。

2.3 斑嘴鴨精液稀釋液的篩選結(jié)果

將經(jīng)過鏡檢精子活力在0.9以上的斑嘴鴨精液與稀釋液按1∶2比例稀釋，常溫保存。記錄精液被不同稀釋液處理后的有效存活時間、生存指數(shù)及總存活時間，結(jié)果見表2。由表2可見，經(jīng)不同稀釋液稀釋處理后的精子有效存活時間、總存活時間和生存指數(shù)也不盡相同。1號稀釋液在有效存活時間、生存指數(shù)和總存活時間方面優(yōu)于其他稀釋液；6號稀釋液處理效果次之，其他稀釋液只能在短時間內(nèi)保存精液。

3 討論

3.1 斑嘴鴨采精技術(shù)

鳥類的人工授精是從家禽養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展起來的。家禽的人工授精技術(shù)經(jīng)改進后在金雕、鴕鳥、草原隼、蒼鷹、波斑鴇、角雉、褐馬雞等非家禽鳥類得到廣泛應(yīng)用。目前，鳥類的人工采精方法主要有按摩法、電刺激法、假陰道法和順應(yīng)法，其中按摩法最為常用[9]。

關(guān)于斑嘴鴨人工授精技術(shù)的研究迄今尚未見相關(guān)報道。本研究嘗試使用電刺激法和人工按摩法對斑嘴鴨進行人工采精。成年雄性斑嘴鴨個體較小，體重約1 kg左右。采用電刺激法時，需要將電極棒由泄殖腔插入，但由于其生殖器相對較小，插入的電極棒對生殖器充血外翻有一定的阻礙作用，致使采精效果不理想。在采用按摩法采精時，由于斑嘴鴨個體較小，采精人員容易固定，采精成功率較高。人工養(yǎng)殖的雄性經(jīng)2周左右調(diào)教后，可形成良好的性反射，采精成功率可達80%以上。另外，由于鳥類的尿酸呈白色，在采精時要注意與精液區(qū)分，防止污染。

3.2 斑嘴鴨精液稀釋液的篩選

精液稀釋液主要用于擴大精液容量和為精子提供營養(yǎng)物質(zhì)。精液稀釋液的種類很多，不同的稀釋液保存精子的效果也不盡相同。配制精液稀釋液常用的試劑有氯化鈉、葡萄糖、蔗糖、果糖、谷氨酸鈉、檸檬酸鈉等[10]。

本試驗以已報道的家禽精液稀釋液作為參考，配制了6種精液稀釋液，進行斑嘴鴨精液保存試驗。在精子活力和有效存活時間方面，1號稀釋液最好，6號次之。這與稀釋液的組成成分有較大關(guān)系。1號和6號稀釋液中含有葡萄糖和果糖等營養(yǎng)成分，可為精子活動提供能量；并且其中的緩沖成分可有效緩解因精子進行無氧酵解引起的pH變化，維持總體環(huán)境穩(wěn)定，有利于精子存活。2號稀釋液同樣包含營養(yǎng)和緩沖物質(zhì)，但配制后經(jīng)高壓高溫消毒易出現(xiàn)顏色變黃，溶質(zhì)改變，精液保存效果不理想。其他稀釋液因溶質(zhì)種類使用較少，易于配制，可用于短時間內(nèi)的精液保存。

參考文獻：

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[10] 權(quán) 凱，黃炎坤.雞精液稀釋液研究進展[J].養(yǎng)禽與禽病防治，2006（2）：4-5.