韓曉東等

摘 要 目的 建立漱口水中西吡氯銨含量測定的方法。方法 采用三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用法（TSQ-HPLC-MS/MS），色譜柱Kinetex C18 （100×2.1 mm， 2.6 ?m）， 流動相（A）為乙腈，（B）為乙酸銨/乙酸緩沖溶液（5 mmoL， pH=3.5） （A：B=80：20），流速 0.3 mL/min。質(zhì)譜采用電噴霧離子源，正離子模式，選擇離子監(jiān)控模式（SRM）。結(jié)果 西吡氯銨在0.268-4.28 ?g/mL范圍內(nèi)線性關系良好，r為0.9987，平均加樣回收率為102.2%，RSD為2.44%。結(jié)論 該方法快速簡便，靈敏度高，重復性好，可用于西吡氯銨的質(zhì)量控制。

關鍵詞 西吡氯銨 漱口水 三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用

前 言

西吡氯銨（Cetylpridinium Chloride，1-十六烷基吡啶氯化物，分子式為C21H38Cl2N），是含氮陽離子表面活性劑，一般用作殺菌消毒劑，是防牙菌膜漱口水的有效成分。醫(yī)學研究發(fā)現(xiàn)，0.1%西吡氯銨含漱液對單純性牙齦炎患者牙菌斑形成具有抑制作用[1，2]；對牙齦炎、牙周炎具有明顯療效[3]；對口腔白色念珠菌感染的患者具有輔助治療作用[4]；西吡氯銨片劑治療復發(fā)性阿弗他潰瘍，能夠明顯促進潰瘍面愈合 [5，6]。文獻[7]用毛細管區(qū)帶電泳法測西吡氯銨片劑中的含量，但毛細管電泳法準確度較低，重現(xiàn)性較差，不宜推廣使用。三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用法是近年來快速發(fā)展的定量方法，具有靈敏度高、檢測限低、選擇性好的優(yōu)點，在體外藥物測定、雜質(zhì)檢測以及體內(nèi)代謝測定等方面應用廣泛[8～16]。本實驗采用三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用法（TSQ-HPLC-MS/MS）測定漱口水中的西吡氯銨含量。

1 試驗部分

1.1 儀器與裝置

TSQ Quantum Ultra三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀：美國Finnigan公司產(chǎn)品，配有電噴霧離子源（ESI）及LCquan 2.6數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；pH計： Mettlter Toledo Delta 320；移液槍：2-20μL，20-200μL，大龍興創(chuàng)實驗儀器（北京）有限公司；純水儀：Millipore公司，18.2Ω；天平：Sartorius BT-125D（ d=0.01mg）。

1.2 材料與試劑

西吡氯銨對照品（上海德默醫(yī)藥科技有限公司，純度為98%），西吡氯銨含漱液（130302， 杭州民生藥業(yè)有限公司），冷酸靈迅康抗敏感漱口水（121114110230，重慶登康口腔護理用品股份有限公司），高露潔-貝齒全面護理-10功能合一（1264TH1133，高露潔棕欖中國有限公司），高露潔-貝齒清新茶?。?047TH1133，高露潔棕欖中國有限公司），高露潔-貝齒鮮果薄荷味（2198TH1123，高露潔棕欖中國有限公司），乙腈（色譜純，F(xiàn)isher公司），乙酸銨（色譜純，Dima 公司），甲醇（色譜純，F(xiàn)isher公司），乙酸（色譜純，F(xiàn)isher公司）。

1.3 試驗條件

1.3.1 色譜條件 液相條件：Kinetex C18 （100 mm×2.1 mm， 2.6 ?m）， 流動相（A）為乙腈，（B）為乙酸銨/乙酸緩沖溶液（5 mmoL， pH=3.5） （A：B=80：20），流速 0.3 mL/min，柱溫 30℃，進樣量1 ?L。

1.3.2 質(zhì)譜條件 電噴霧離子源（ESI）， 噴霧電壓 3000 kV， 鞘氣壓力35 arb，輔助氣壓力為10 arb，毛細管溫度 350℃，蒸發(fā)氣溫度為300℃，Tube lens補償電壓為100 V，正離子模式，選擇離子監(jiān)控模式（SRM），西吡氯銨的裂解電壓為28 V，用于定量的母離子為m/z 304.297[M-Cl]+，定量子離子為m/z 80.090，進樣量為1?L。

1.4 溶液配制

1.4.1 對照品溶液 準確稱取西吡氯銨對照品溶液 1.07 mg， 置于200 mL的容量瓶中，加50%甲醇-水溶解并定容至刻度，搖勻，即得對照品儲備液。分別取該儲備液0.5 mL， 1.0 mL， 2.0 mL，4.0 mL， 8.0 mL分置5個10 mL的容量瓶中，加50%甲醇-水溶解并定容至刻度，搖勻，配置成濃度分別為0.268?g/mL， 0.535?g/mL， 1.07?g/mL， 2.14?g/mL， 4.28 ?g/mL 的系列對照品。

1.4.2 供試品溶液 取100 ?L 漱口水，置于100 mL 容量瓶中，以50%甲醇-水溶解并定容至刻度，即得供試樣品。

2 結(jié)果

2.1 線性關系考察

取1.4.1項下溶液各1?L 注入色譜儀，按照1.3項下色譜質(zhì)譜條件進樣，測定峰面積，以西吡氯銨的濃度（X）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程Y= 18471.3X-732985， r=0.9987。結(jié)果表明，西吡氯銨在0.268-4.28 ?g/mL范圍內(nèi)線性關系良好。

2.2 精密度實驗

準確吸取對照品溶液，按照1.3項下色譜質(zhì)譜條件，連續(xù)進樣5次。結(jié)果顯示RSD =1.90%，提示該方法精密度良好。

2.3 重復性試驗

平行制備5份對照品溶液，按照1.3項下色譜質(zhì)譜條件進行測定，結(jié)果為RSD =0.27%，說明該方法的重復性符合要求。

2.4 穩(wěn)定性試驗

取新配置的標準品溶液，按照1.3項下色譜質(zhì)譜條件，分別在0， 2， 4， 8， 12， 24 h進行測定，結(jié)果，RSD =2.61%，說明該溶液的穩(wěn)定性符合要求。

2.5 回收率實驗

取已知含量的漱口水5份，精密加入西吡氯銨對照品儲備液0.5 mL， 按照1.4項下制備溶液，按照1.3項下色譜質(zhì)譜條件測定，計算回收率，結(jié)果西吡氯銨平均加樣回收率為102.2 %，RSD =2.49%。

2.6 檢測限測定

取最低濃度（0.268 ?g/mL）的西吡氯銨對照品溶液，分別稀釋至不同濃度，按1.3項下色譜質(zhì)譜條件，在正離子模式下使用單反應監(jiān)測西吡氯銨，測定其最小檢測限（S/N =3）。結(jié)果最小檢測值為0.150 pg/mL。

2.7 樣品測定

分別吸取2個不同濃度的對照品和不同廠商的漱口水各3份，按照1.4.2項下配制供試品溶液，按1.3項下色譜質(zhì)譜條件測定，計算樣品中的西吡氯銨的含量見表1。

3 討論

在液相色譜條件優(yōu)化時，通過調(diào)整流動相組成、比例以及緩沖液的類型以及pH值，得到正態(tài)、對稱的譜圖，確定了液相色譜最佳測定條件。在質(zhì)譜條件優(yōu)化的過程中，通過正負離子檢測模式、不同離子源、裂解電壓等質(zhì)譜參數(shù)進行比較，發(fā)現(xiàn)在電噴霧電離正離子模式下靈敏度高，噪音小，從而確定質(zhì)譜條件。

對5個不同來源的漱口水中的西吡氯銨的含量進行比較，發(fā)現(xiàn)民生藥業(yè)的含漱液含量最高，高露潔的3款產(chǎn)品含量相近，冷酸靈品牌的含量最低。

采用三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用法測定漱口水中西吡氯銨的含量，檢測限可達0.150 pg/mL， 遠遠低于采用毛細管電泳法時的10.27 ?g/mL[7]。該方法靈敏度高，選擇性好，檢測限低，操作方便，可以推廣作為西吡氯銨含量的評價方法。

致謝：本論文得到新藥研究國家重點實驗室（中國科學院上海藥物研究所）開放基金資助（SIMM1106KF-12）和設備支持。

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