戴志喬，徐德平

江南大學(xué)食品學(xué)院，無(wú)錫214122

油菜花粉(pollen)是十字花科植物油菜(Brassica campestris L)的有性生殖的雄性配子體?；ǚ蹪饪s了植株的營(yíng)養(yǎng)精華，被人們譽(yù)為“最完美的食物”。蜂花粉是蜜蜂采集的花粉加入花蜜和唾液形成的粒狀物，因此，又被人們譽(yù)為“微型營(yíng)養(yǎng)庫(kù)”［1］。具有抗腫瘤［2］、改善記憶力［3］、防治腦心血管疾病、調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)、促進(jìn)睡眠［4］、保肝護(hù)肝、防治前列腺疾病、調(diào)節(jié)腸胃功能等功能。

有關(guān)油菜蜂花粉化學(xué)成分的研究很多，主要集中在多糖、黃酮等，而對(duì)其中的皂苷尚未有研究報(bào)道。本文對(duì)油菜蜂花粉中的皂苷進(jìn)行了初步研究，分離到三個(gè)齊墩果烷型皂苷，這在油菜蜂花粉中還是首次報(bào)道。

1 材料與儀器

油菜蜂花粉:購(gòu)于南京老山藥業(yè)有限公司;乙醇、正丁醇、硫酸、茴香醛、冰乙酸、二甲亞砜均為分析純，由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供;GF254硅膠板:山東煙臺(tái)芝罘化工廠生產(chǎn);AB-8型大孔吸附樹(shù)脂(100 mm ×1500 mm):天津南開(kāi)大學(xué)化學(xué)工廠生產(chǎn);ODS填料:Nacalai Tosoh Inc;MCI填料:Mitsubishi Chemical Corporation。

DFY-600搖擺式高速中藥粉碎機(jī):溫嶺市林大機(jī)械有限公司;CQ-005型萃取罐:常州市特威電氣自動(dòng)化系統(tǒng)有限公司;中壓輸液泵:天津科器高新技術(shù)公司;R-1002型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:上海申順生物科技有限公司;核磁共振儀Avance 500 MHz:Buker公司。

2 提取與分離

2．1 油菜蜂花粉皂苷的提取

將油菜蜂花粉粉碎過(guò)60目篩，稱(chēng)取15 kg，分次緩慢加入沸水浴中，煮沸30 min，充分滅酶后，濃縮至干。將滅酶后的花粉加入100 L萃取罐中，以料液比1∶5(w/v)加入體積分?jǐn)?shù)為80%乙醇溶液，60℃提取2 h，過(guò)濾出清液，將濾渣再按上述方法重復(fù)提取二次，合并清液減壓濃縮至無(wú)乙醇時(shí)止。加入適量的水，用石油醚脫脂后，收集水相，減壓蒸干，待用。

2．2 油菜蜂花粉皂苷的粗分

將上述脫脂粗品上樣大孔樹(shù)脂［5］(100 mm ×1500 mm，樹(shù)脂為型號(hào)為AB-8)，調(diào)節(jié)層析柱流速約20 mL/min，分別用體積分?jǐn)?shù)為30%、40%、50%、60%的乙醇梯度洗脫，TLC法跟蹤檢測(cè)洗脫液，將Rf值和顯色反應(yīng)一致的洗脫液合并。利用L-B反應(yīng)以及起泡性將40%、50%乙醇洗脫液合并濃縮得油菜蜂花粉總皂苷。

2．3 油菜蜂花粉皂苷的純化

將油菜蜂花粉總皂苷加水稀釋?zhuān)蠘覯CI柱(50 mm ×1500 mm)，調(diào)節(jié)流速15 mL/min，上樣結(jié)束后加入1500 mL去離子水洗脫，再用30%、40%、50%、60%的乙醇梯度洗脫，15 mL試管收集，經(jīng)TLC鑒定和硫酸茴香醛顯色，將洗脫液分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四個(gè)部分。將各部分濃縮至一定體積后再分別反復(fù)上ODS柱(30mm ×1000 mm)，分別用體積分?jǐn)?shù)35% ～60%的乙醇-水梯度洗脫，洗脫流速5 mL/min，15 mL收集一管，經(jīng)TLC鑒定純度，共得4個(gè)純化合物 1、2、3、4。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

以吡啶為溶劑，四甲基硅烷(TMS)為內(nèi)標(biāo)物，將上述四個(gè)化合物經(jīng)氫譜(1H NMR)和碳譜(13C NMR)等光譜數(shù)據(jù)分析，結(jié)合文獻(xiàn)確定其化學(xué)結(jié)構(gòu)。

化合物1 白色無(wú)定形粉末，可溶解于甲醇、乙醇、水，Liebermarm-Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性。從1H NMR 圖譜可見(jiàn)，δ5．4有1個(gè) H 信號(hào)，δ5．02有1個(gè)雙峰質(zhì)子信號(hào)，可能為糖的端基信號(hào)，推測(cè)該化合物含有 1 個(gè)糖基。δ1.25、1.20、1.16、1.14、0.95 有 5個(gè)單峰甲基，δ1.77，1.34，0.98 有 3 個(gè)雙峰甲基，其余H信號(hào)難以分辨。13C NMR(C5D5N，125 MHz)δ:38.6(C-1)，28.9(C-2)，90.0(C-3)，42.5(C-4)，55.9(C-5)，18.6(C-6)，33.5(C-7)，42.5(C-8)，47.9(C-9)，36.6(C-10)，22.9(C-11)，122.6(C-12)，145.1(C-13)，42.6(C-14)，28.2(C-15)，26.6(C-16)，33.6(C-17)，61.0(C-18)，40.1(C-19)，31.1(C-20)，42.6(C-21)，72.6(C-22)，28.9(C-23)，17.1(C-24)，15.8(C-25)，18.6(C-26)，25.9(C-27)，25.9(C-28)，33.4(C-29)，24.2(C-30)，101.8(Glc-1)，74.7(Glc-2)，76.9(Glc-3)，71.0(Glc-4)，75.8(Glc-5)，63.7(Glc-6)。

從13C NMR可見(jiàn)到36個(gè)碳信號(hào)，除6個(gè)糖信號(hào)外，苷元上有30個(gè)碳，分析化合物為皂苷，δ145.1、122.6處有2個(gè)雙鍵碳信號(hào)，從此信號(hào)可判斷該化合物母環(huán)為齊墩果烷型皂苷元。與標(biāo)準(zhǔn)齊墩果烷型皂苷的核磁共振碳譜和135DEPT圖譜比較發(fā)現(xiàn)，C-3的化學(xué)位移值從72移動(dòng)到90.0，說(shuō)明C-3成苷，δ72.6處有1個(gè)連氧CH信號(hào)，說(shuō)明除C-3外還有被羥基取代的碳，分析所有碳信號(hào)并與標(biāo)準(zhǔn)齊墩果烷型皂苷的碳譜比較可判斷C-22有羥基取代，其化學(xué)位移置向低場(chǎng)移動(dòng)31，C-21也向低場(chǎng)移動(dòng)10，由此可得該化合物的苷元部分為3，22二羥基—齊墩果烷皂苷。糖的鏈接方式:從化學(xué)位移置來(lái)看為葡萄糖，與苷元的C-3相連。綜合以上分析并參照相關(guān)文獻(xiàn)可知該化合物為3，22二羥基，3-O-β-D-葡萄糖-齊墩果烷。結(jié)構(gòu)式如圖1。

化合物2 白色無(wú)定形粉末，可溶解于甲醇、乙醇、水，Liebermarm-Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性。從1H NMR圖譜可見(jiàn)，δ5.6有1個(gè)雙峰H信號(hào)，可能雙鍵H信號(hào)，δ5.13有1個(gè)質(zhì)子信號(hào)，應(yīng)為糖的端基信號(hào)，該化合物連有 1 個(gè)糖基。δ1.31、1.28、1.20、1.19、0.93 有 5 個(gè)單峰甲基，δ1.78，1.32，0.96 有 3個(gè)雙峰甲基，其余 H信號(hào)難以歸屬。13C NMR(C5D5N，125MHz)δ:38.8(C-1)，29.6(C-2)，91.1(C-3)，42.5(C-4)，56.2(C-5)，18.7(C-6)，33.5(C-7)，42.5(C-8)，47.9(C-9)，36.5(C-10)，23.2(C-11)，122.6(C-12)，145.0(C-13)，42.6(C-14)，28.8(C-15)，26.6(C-16)，33.5(C-17)，61.9(C-18)，40.1(C-19)，31.1(C-20)，42.5(C-21)，72.6(C-22)，30.1(C-23)，19.1(C-24)，17.1(C-25)，18.7(C-26)，23.2(C-27)，26.0(C-28)，33.4(C-29)，24.2(C-30)，101.9(Glc-1)，78.6(Glc-2)，75.8(Glc-3)，71.4(Glc-4)，76.5(Glc-5)，69.5(Glc-6);102.3(Glc-1')，74.1(Glc-2')，76.8(Glc-3')，72.6(Glc-4')，76.3(Glc-5')，61.0(Glc-6');105.4(Glc-1″)，74.6(Glc-2″)，77.4(Glc-3″)，72.1(Glc-4″)，76.7(Glc-5″)，63.7(Glc-6″)。

從13C NMR可見(jiàn)到48個(gè)碳信號(hào)，除18個(gè)糖信號(hào)外，苷元上有30個(gè)碳，與化合物1相比較，苷元部分的化學(xué)位移值基本一致，說(shuō)明化合物2與化合物1具有相同的苷元結(jié)構(gòu)，二者不同僅在于糖鏈部分。化合物2有三個(gè)糖，從化學(xué)位移值來(lái)看三個(gè)糖都為葡萄糖。糖的鏈接方式:端基信號(hào)101.9的糖與苷元相連，另二個(gè)糖分別連在該糖的2、6位上。綜合以上分析可知該化合物為3，22二羥基，3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-［-β-D-吡喃葡萄糖 (1→6)］—齊墩果烷。結(jié)構(gòu)式如圖1。

化合物3 白色無(wú)定形粉末，可溶解于甲醇、乙醇、水，Liebermarm-Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性。從1H NMR圖譜可見(jiàn)，δ5.4有1個(gè)雙峰H信號(hào)，δ5.08有1個(gè)質(zhì)子信號(hào)，為糖的端基信號(hào)，推測(cè)該化合物含有1 個(gè)糖基。δ1.29、1.23、1.20、1.17、0.96 有 5 個(gè)單峰甲基，δ1.81、1.33、0.99有3個(gè)雙峰甲基，其余 H信號(hào)不能歸屬。

13C NMR(C5D5N，125 MHz)δ:38.8(C-1)，29.6(C-2)，91.1(C-3)，42.5(C-4)，56.2(C-5)，18.7(C-6)，33.5(C-7)，42.5(C-8)，47.9(C-9)，36.5(C-10)，23.2(C-11)，122.6(C-12)，145.0(C-13)，42.6(C-14)，28.8(C-15)，26.6(C-16)，47.7(C-17)，41.9(C-18)，40.1(C-19)，31.1(C-20)，42.5(C-21)，72.6(C-22)，30.1(C-23)，19.1(C-24)，17.1(C-25)，18.7(C-26)，23.2(C-27)，26.0(C-28)，33.4(C-29)，24.2(C-30)，101.9(Glc-1)，78.6(Glc-2)，75.8(Glc-3)，71.4(Glc-4)，76.5(Glc-5)，69.5(Glc-6);102.3(Glc-1')，74.1(Glc-2')，76.8(Glc-3')，72.6(Glc-4')，76.3(Glc-5')，61.0(Glc-6');105.4(Glc-1″)，74.6(Glc-2″)，77.4(Glc-3″)，72.1(Glc-4″)，76.7(Glc-5″)，63.7(Glc-6″)。

從13C NMR可見(jiàn)到48個(gè)碳信號(hào)，其中18個(gè)糖信號(hào)外，苷元上有30個(gè)碳，與化合物2相比較，糖鏈部分的化學(xué)位移置基本一致，說(shuō)明化合物3與化合物Ⅱ具有相同的糖鏈結(jié)構(gòu)，二者不同僅在于苷元部分?；衔?在δ175.3處有一個(gè)羧基，表明該化合物為齊墩果酸，對(duì)應(yīng)有 C-17值為 47.7，C-18為41.9。綜合以上分析可知該化合物為3，22二羥基，3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-［-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)］—齊墩果酸。結(jié)構(gòu)式如圖1。

化合物4 白色無(wú)定形粉末，可溶解于甲醇、乙醇、水。從1H NMR圖譜可見(jiàn)，δ5.4有1個(gè)雙峰H信號(hào)，δ5.02有1個(gè)質(zhì)子信號(hào)，可能為糖的端基信號(hào)，推測(cè)該化合物含有1個(gè)糖基。δ1.03、0.94有2個(gè)單峰甲基，δ1.22、1.14、0.76有 3個(gè)雙峰甲基，0.97處有一個(gè)多峰甲基。

13C NMR(C5D5N，125 MHz)δ:37.6(C-1)，32.3(C-2)，78.7(C-3)，39.9(C-4)，141.1(C-5)，122.0(C-6)，34.4(C-7)，32.2(C-8)，50.5(C-9)，36.5(C-10)，21.4(C-11)，39.4(C-12)，42.6(C-13)，56.4(C-14)，24.6(C-15)，28.7(C-16)，57.0(C-17)，12.1(C-18)，19.2(C-19)，36.3(C-20)，19.2(C-21)，32.3(C-22)，29.4(C-23)，46.2(C-24)，12.3(C-25)，32.2(C-26)，12.1(C-27)，26.6(C-28)，21.6(C-29)，102.7(Glc-1)，75.4(Glc-2)，78.6(Glc-3)，71.9(Glc-4)，78.3(Glc-5)，63.0(Glc-6)。

從13C NMR可見(jiàn)到35個(gè)碳信號(hào)，其中6個(gè)糖信號(hào)外，苷元上有29個(gè)碳，根據(jù)化學(xué)位移值判斷該化合物為甾苷類(lèi)化合物，對(duì)應(yīng)C-3位連有一個(gè)葡萄糖。綜合分析并參照文獻(xiàn)可知該化合物為3-O-β-D-葡萄糖—谷甾醇苷。

圖1 化合物1、2、3的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig．1 Chemical structures of compounds 1，2 and 3

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