邱賽紅，尹胭脂，余 娜，曾小艷，李富元，孫必強

（1.湖南中醫(yī)藥大學，湖南 長沙410208；2.湖南中醫(yī)藥大學2012級碩士研究生班，湖南 長沙410208；3.湖南中醫(yī)藥高等?？茖W校，湖南 株洲412012）

慢性盆腔炎指女性生殖器官、周圍結締組織及盆腔腹膜所發(fā)生的慢性炎癥。是育齡期婦女最常見的生殖器宮炎癥之一。20～49歲已婚育齡婦女中，其發(fā)病率為4.87%，約占婦科疾病的15%[1-2]?，F(xiàn)代醫(yī)學主要以對癥治療和抗菌、抗炎為主。大量的資料表明，中醫(yī)藥對慢性盆腔炎的治療具有較好的療效，在緩解癥狀、清除病灶、控制病情發(fā)展等方面均表現(xiàn)出了良好的作用趨勢[3-4]。紫英顆粒為北京著名婦科專家柴松巖教授的臨床經(jīng)驗方，由紫花地丁、蒲公英等9味藥物組成。初步的臨床觀察證實，該方對慢性盆腔炎的治療具有良好的療效。本文報告采用大鼠制備子宮內(nèi)膜炎癥模型后實驗性治療的藥理作用觀察?，F(xiàn)將試驗方法和結果報道如下。

1 實驗材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗藥物與試劑 紫英顆粒干膏粉由長沙華源醫(yī)藥科技公司提供，相當于生藥量5.045 g/g，批號：20060530；鹽酸左氧氟沙星片，重慶刻爾康制藥有限公司生產(chǎn)，批號：060501；白介素-6（IL-6）放射免疫試驗盒，北京科美東雅生物技術有限公司生產(chǎn)，批號：20061025。

1.1.2 主要儀器 GC1500型γ-放射自動免疫計數(shù)器（科大創(chuàng)新股份有限公司）；LEICA DM LB2型雙目顯微鏡（德國LEICA公司）；MIAS醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)（北京航空航天大學科學儀器廠）。

1.1.3 菌種及來源 大腸埃希菌、乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌，均由湖南中醫(yī)藥大學微生物教研室臨床微生物檢驗室從湖南中醫(yī)藥大學附屬一醫(yī)院門診婦科病人宮頸分泌物標本中分離，經(jīng)鑒定確認后用于實驗。實驗前用相應培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)后稀釋至所需濃度。

1.1.4 動物 成年SD雌性大鼠85只。購自上海西普爾—必凱實驗動物有限公司，生產(chǎn)許可證號SCXK(滬)2003-0002號。實驗動物使用許可證號：SYXK（湘）2003-0001號。

1.2 方法

1.2.1 動物模型 參照文獻[5]方法，取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌，以常規(guī)方法增菌培養(yǎng)后，按2∶1∶1的比例混合成含菌濃度為3×109/mL供造模用。200～220 g雌性大鼠，除正常組外，其余以2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉。仰位固定，腹中線切口找到子宮。注射器抽取混合菌液0.2 mL，針頭刺入一側子宮，沿子宮壁劃拔后推入一半的菌液，再向前推進后同法注入另一半菌液。完畢縫合腹腔。正常組動物不做手術處理。假手術組只打開腹腔、暴露子宮，不進行宮內(nèi)注射。

1.2.2 分組與給藥 造模后2周，將模型動物隨機分為模型組、紫英顆粒高、中、低劑量組、左氧氟沙星組。分別給予紫英顆粒24、12、6 g/kg和左氧氟沙星80 mg/kg灌胃給藥。每天1次，連續(xù)4周。模型組、假手術組和正常組給服等體積蒸餾水。末次給藥后1 h，以2%戊巴比妥鈉麻醉大鼠后進行相關檢測。

1.2.3 觀察指標 （1）子宮輸卵管的外觀及腫脹程度：肉眼觀察各動物子宮的外觀和腫脹、粘連情況。取下左、右兩側子宮分別稱質量。按下式計算各動物子宮的腫脹度、腫脹率。

腫脹度=造模側子宮質量-對照側子宮質量

腫脹率=（造模側子宮質量-對照側子宮質量）/對照側子宮質量×100%

（2）子宮組織IL-6測定 剪取造模側子宮一段，稱質量后與生理鹽水按1∶9制成組織勻漿。勻漿經(jīng)4℃、3 000 r/min離心15 min，取上清液-15℃保存。按試劑盒要求用放免方法測定勻漿IL-6含量。（3）子宮組織病理學檢查 取造模側子宮約1 cm用4%甲醛固定。常規(guī)包埋、切片。HE后光鏡下觀察組織形態(tài)與結構。參照文獻方法[6]，觀察子宮組織的上皮損傷、內(nèi)膜中炎細胞浸潤、充血水腫及成纖維細胞增生情況。按無“-”、輕度“+”、明顯“++”、嚴重“+++”分別記錄病變程度。

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 子宮組織炎癥腫脹情況

正常組和假手術組動物子宮柔軟、平整。模型組動物造模側子宮較對照側明顯增粗，部分形成包塊并與周圍組織粘連，漿膜面可見充血。質量分析顯示造模側子宮均明顯大于未造模對照側。紫英顆粒和左氧氟沙星組造模側子宮的增粗、腫脹和充血程度均較模型組不同程度減輕，腫脹度與腫脹率與模型組比較均有顯著性差異。紫英顆粒的作用隨劑量加大而增強。見表1。

2.2 子宮組織IL-6含量測定

檢測顯示，造模動物子宮組織內(nèi)IL-6水平較對照組明顯增加。紫英顆粒各組的IL-6水平均明顯降低，且作用較左氧氟沙星明顯。見表1。

2.3 子宮組織病理學檢查

光鏡下，模型組可見子宮上皮細胞變性壞死、脫落明顯，有較多的炎性細胞浸潤和充血水腫，成纖維細胞增生顯著，個別管腔內(nèi)還有積膿。紫英顆粒和左氧氟沙星組上述病變程度均減輕。12 g/kg以上劑量的紫英顆粒組較模型組差異有統(tǒng)計學意義。見表2～3。

表1 紫英顆粒對混合菌液致大鼠盆腔炎模型子宮炎癥的影響 （±s）

表1 紫英顆粒對混合菌液致大鼠盆腔炎模型子宮炎癥的影響 （±s）

注：與假手術組比較★★P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與左氧氟沙星比較△P＜0.05，△△P＜0.01；以下表同。

組 別正常組假手術組模型組紫英顆粒高組紫英顆粒中組紫英顆粒低組左氧氟沙星組劑量（g/kg）n——24 12 6 0.08 10 11 12 12 12 12 12腫脹度0.02±0.01 0.02±0.01 0.20±0.07★★0.11±0.04**0.11±0.04**0.13±0.06*0.14±0.04*腫脹率（%）8.35±4.69 9.0±5.88 68.62±26.28★★36.13±13.07**38.40±13.07**45.43±23.91*47.69±16.74*IL-6(pg/mL)27.65±6.84 28.21±6.54 64.03±22.42★★39.49±14.87**△△42.08±17.79*△△49.67±12.51△60.09±12.27

表2 紫英顆粒對子宮組織病理學上皮、炎性細胞的影響（只）

表3 紫英顆粒對子宮組織病理學內(nèi)膜、成纖維細胞的影響（只）

3 討論

慢性盆腔炎的發(fā)病多為混合菌感染。且宮腔操作也是造成內(nèi)膜炎癥的常見原因之一。機械損傷加混合菌液感染的方法制備子宮內(nèi)膜炎模型比較接近臨床實際，已在相關研究中被證實穩(wěn)定和可靠[6]。故本文研究采用了該法制備病理模型。

中醫(yī)理論認為，有關慢性盆腔炎相類疾病的病因及病機，不外寒、熱、濕、瘀、虛”[4，7-8]。柴松巖教授在總結多年治療慢性盆腔炎臨床經(jīng)驗的基礎上，結合《傅青主女科》關于“夫帶下俱是濕證”的論述，認為慢性盆腔炎在癥狀明顯期的病理機制主要與熱、濕、瘀有關。由于濕、熱、瘀互結積于胞宮，致氣血失調、沖任受阻，故成帶下、腹痛等癥。治療宜清熱、化濕、祛瘀并舉。紫英顆粒即以此為原則組方。研究證實，紫英顆粒對子宮內(nèi)膜炎有較好的治療作用，可減輕模型大鼠的子宮腫脹，對子宮組織的病理學改變有明顯的改善。表明這種立法、組方的原則是非常有效的。

在慢性盆腔炎病變過程中，IL-6作為炎癥反應的免疫效應分子有著重要影響，在組織的炎性反應中起著誘導和傳遞的作用[9]。研究顯示紫英顆?？山档妥訉m組織中IL-6的水平。我們在前期的研究報道中證實，紫英顆粒具有較廣譜的抑菌作用，對引起婦科炎癥的10種常見致病菌均有較好的抑制作用，且抑菌作用較穩(wěn)定[10]。故由此推測，紫英顆粒治療子宮內(nèi)膜炎有效的作用機制，有可能與具有較廣譜的抑菌作用及抑制子宮組織中炎性細胞因子IL-6的表達有關。

[1]張新國，李彥新，張曉娜.14 498例農(nóng)村已婚育齡婦女生殖道感染狀況分析[J].中國計劃生育雜志，2005，112（2）：123.

[2]張催蘭.慢性盆腔炎研究進展[J].臨床醫(yī)學2011，31（3）：115-116.

[3]朱藹美.慢性盆腔炎的中醫(yī)藥治療進展[J].中醫(yī)藥信息，2005，22（6）：14～15.

[4]劉 靜，高 慧.慢性盆腔炎的中醫(yī)藥治療進展[J].承德醫(yī)學院學報，2011，28（1）：48-50.

[5]聞 莉，張三元，李 莉，等.大鼠慢性盆腔炎模型的技術要求及模型特點[J].浙江中西醫(yī)結合雜志，2001，11（8）：484-486.

[6]張小麗，張靜云，陳瑞明，等.盆炎寧對混合菌液致大鼠慢性盆腔炎治療作用的實驗研究[J].中藥藥理與臨床，2005，21（2）：37-39.

[7]李曉燕，程 涇.慢性子宮內(nèi)膜炎中西醫(yī)研究進展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2010，6(9)：154-156.

[8]孫英杰.中醫(yī)辨證治療慢性盆腔炎[J].中醫(yī)藥學刊，2005，23(6)：1 147-1 148.

[9]趙廣興，馬寶璋，袁家麟.慢性盆腔炎輸卵管病理與IL-2、IL-6的關系[J].遼寧中醫(yī)雜志，2003，30(9)：704-705.

[10]朱傳湘，邱賽紅，胡建中，等.紫英顆粒對慢性盆腔炎常見致病菌抑菌作用的研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2009，16（4）：39-41.