吳穎秀

（天津中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院，天津300150）

皮膚和淺表組織化膿性感染在臨床上較為常見，多為化膿性細菌侵入毛囊或皮脂腺引起，屬于中醫(yī)外科“癤”、“癰”的范疇。其病原菌多為金黃色葡萄球菌，可造成局限性組織壞死，引起全身化膿性感染及轉移性膿腫，同時容易對抗抗生素產生耐藥性［1］。因此，在盡量減少抗生素應用的基礎上，促進感染早期炎性反應的控制尤為重要。而外用中成藥制劑的開發(fā)和應用，則為此提供了一種新的思路。本實驗旨在觀察中成藥如意金黃散酊劑對家兔淺表皮膚感染模型的治療作用，并對其抗炎機制進行初步探討。

1 資料與方法

1.1 實驗動物 取12個月新西蘭大白兔30只，體重（3.4±0.4）kg，雌雄不拘，雌性無孕，由天津中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。實驗動物均預先飼養(yǎng)2天，適應動物房環(huán)境條件。

1.2 實驗藥物 如意金黃散 （天津同仁堂股份有限公司，國藥準字Z11020906），主要成分：姜黃、大黃、黃柏、蒼術、厚樸、陳皮、甘草、生天南星、白芷、天花粉。莫匹羅星軟膏 （中美天津史克制藥有限公司，批號：國藥準字H10930194），卡波姆940（上海人民制藥廠，批號：01050），無水乙醇，金黃色葡萄球菌（ATCC25923廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）。

1.3 如意金黃散酊劑制備方法 如意金黃散按標準劑量秤取如意金黃散粉劑100g，溶于8倍無水乙醇內浸泡48h，分兩次回流提取，每次2～3h，濾過殘渣收集醇提取液即成如意金黃散酊劑。

1.4 實驗設備 全自動生化分析儀 （強生，VITROS5，1FS），酶標儀 （Labsystems Multiskan MS，352型），洗板機 （Thermo Labsystems，AC8型），恒溫箱 （GNP.9080型，隔水式恒溫培養(yǎng)箱儀器。家兔IL－1βELISA試劑盒，家兔TNF－αELISA試劑盒，以上均購自美國GBD公司。

1.5 實驗方法

1.5.1 動物分組及模型建立 新西蘭大白兔30只按金黃散治療組、抗生素組及空白對照組隨機分為3組，每組各10只。按體重給予3%戊巴比妥鈉靜脈麻醉，腹位固定于實驗臺上，背部去毛備皮，清水沖凈擦干局部皮膚。常規(guī)碘伏消毒術區(qū)，鋪無菌巾，自背部中部距棘突2cm兩側分別皮下注射0.2ml金黃色葡萄球菌液 （細菌濃度為10萬個／ml）造成2處早期皮膚局部感染模型以防保證造模質量。

1.5.2 治療方法 自造模成功后第二日起各組動物行換藥治療；金黃散治療組采用無菌紗布浸如意金黃散酊劑外敷至以注射部位為中心直徑2cm范圍，每日3次；抗生素組以0.2g／cm2莫匹羅星軟膏涂抹相同部位及范圍，每日3次；空白對照組不作任何處理。三組均以無菌紗布固定包扎，注意防止彼此間交叉感染，共觀察7d。

1.5.3 療效標準 愈合：炎癥完全消退或范圍較前明顯減小。未愈：炎癥范圍較前無明顯變化或炎癥進一步擴散，形成局部膿腫。

1.5.4 觀察指標

1.5.4.1 造模及局部感染控制情況評估 造模后12h后觀察局部紅腫情況，有無破潰、成膿情況，并選擇性剔除無意義樣本，并在治療后根據(jù)2.3療效標準進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。

1.5.4.2 早期感染區(qū)域面積計算 取治療后第1d、2d、3d為時間點，以透明硫酸紙覆蓋并描記出感染區(qū)域輪廓并裁下稱重，稱得單位面積硫酸紙 （1×1cm2）為4.8mg。按以下公式計算感染區(qū)域面積：感染區(qū)域面積（cm2）＝所裁硫酸紙重量／4.8。

治療前后耳緣動脈取血，用家兔TNF－αELISA試劑盒、家兔IL－1βELISA試劑盒測定血液樣本中的TNF－α、IL－1β含量。

1.6 統(tǒng)計學方法 所得數(shù)據(jù)采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行分析，兩組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用卡方檢驗，計量資料利用ANOVA檢驗進行統(tǒng)計學處理。所得數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差 （χ±S）表示，P＜0.05有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 造模情況 三組造模后家兔背部注射位置大部分出現(xiàn)局部以針孔為中心的局部紅腫，空白對照組20處紅腫范圍中8處已形成淺表膿腫，7處紅腫范圍擴散但未形成膿腫，5處未見明顯變化，金黃散治療組20處紅腫范圍中7處已形成淺表膿腫，10處紅腫范圍擴散但未形成膿腫，3處未見明顯變化，抗生素組20處紅腫范圍中9處已形成淺表膿腫，7處紅腫范圍擴散但未形成膿腫，4處未見明顯變化，且每只家兔背部感染均≥1處。剔除各組未形成感染樣本，各組局部感染例數(shù)無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。見表1。

2.2 金黃散酊劑對皮膚淺表感染家兔模型感染的早期控制情況 金黃散治療組愈合率明顯高于抗生素治療組及空白對照組，其中金黃散治療組與空白對照組比較，差異具有統(tǒng)計學意義 （P＜0.01），而金黃散治療組與抗生素治療組比較以及抗生素治療組與空白對照比較，差異無統(tǒng)計學意義 （見表2）。

表1 皮膚淺表感染家兔模型感染家兔造模情況 （n＝20）

表2 金黃散酊劑對皮膚淺表感染家兔模型感染的早期控制情況 （%）

2.3 早期感染區(qū)域面積計算 考慮4d后部分家兔感染完全消失，故取換藥后3天感染區(qū)域面積進行早期觀察。觀察顯示三組感染區(qū)域面積均有不同程度縮小，其中金黃散治療組面積縮小最為明顯。在第2d差異較其他兩組均有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05或P＜0.01），第3d金黃散治療組感染區(qū)域面積較其他兩組均有統(tǒng)計學差異 （P＜0.01），而抗生素治療組與空白對照組比較差異亦有統(tǒng)計學意義 （P＜0.01）。結果見表3。

表3 感染區(qū)域面積 （χ±S，cm2）

2.4 金黃散酊劑對IL－1β、TNF－α表達的影響 三組治療后IL－1β、TNF－α均呈下降趨勢，其中金黃散治療組治療前后IL－1β、TNF－α低于其他兩組，差異均有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05或P＜0.01）。而抗生素組與空白對照組之間比較差異無統(tǒng)計學意義 （P＞0.05）。結果見表4。

表4 金黃散酊劑對IL－1、TNF－α表達的影響 （pg／mL）

3 討論

隨著細菌耐藥性的不斷增強，如何在保證療效的基礎上盡量減少抗生素的使用成為現(xiàn)代醫(yī)學亟需解決的重要問題之一。研究表明，部分清熱解毒中藥的藥理作用與抗炎有關，在聯(lián)合應用時能夠提高其抗菌效價［1］。隨著中藥制劑在外用控制感染以及抗炎消腫方面等作用逐漸得到認可，中藥及中成藥制劑逐漸成為外科控制感染和避免抗生素不合理應用的重要力量。

如意黃散源于明·陳實功 《外科正宗》，稱之為 “瘡家良便方”。由姜黃、大黃、黃柏、蒼術等十味藥組成，具有清熱解毒，消腫止痛等功效，對于癰疽、發(fā)背、疔腫、跌撲損傷、丹毒等頑惡腫毒外用箍圍具有明顯療效，并作為復方成藥制劑為 《中華人民共和國藥典》收錄?，F(xiàn)代醫(yī)學認為，如意金黃散具有增強巨噬細胞吞噬功能，提高血清溶菌酶含量，促進淋巴細胞轉化，降低毛細血管通透性的作用，從而使入侵機體的微生物得以清除，使炎癥及感染得以迅速緩解［2］。而以最大限度提取其有效成分，從而促進局部吸收是提高療效的重要手段。本實驗通過無水乙醇萃取如意金黃散溶液所制金黃散酊劑，能夠溶解并充分吸收金黃散粉劑中的有效成分，并在局部范圍內集中、長久地形成一個促進藥物的充分釋放的區(qū)域，大大增強了局部吸收效果，使得家兔皮膚早期感染能夠得到有效控制，感染區(qū)域迅速縮小。

TNF－α是由活化的單核巨噬細胞、淋巴細胞、枯否氏細胞、血管平滑肌細胞分泌的多肽分子，在創(chuàng)傷條件下主要由細菌內毒素誘導合成［3］，是大量感染和非感染性炎癥早期出現(xiàn)的一種細胞因子，在激活的眾多細胞因子中起核心作用，是激活細胞因子級聯(lián)反應的重要介質［4］，在創(chuàng)傷早期明顯升高。IL－1β是由單核巨噬細胞產生的一種細胞因子，主要作用于淋巴細胞的單核因子，具有廣泛的生物學活性，具有促炎、促凝、調節(jié)細胞生長等作用，在細菌感染時表達可明顯增加［5］。實驗顯示，外用如意金黃散酊劑能夠迅速降低TNF－α及IL－1β等炎性因子的表達，將早期感染迅速控制在一個相對穩(wěn)定的范圍內，從而防止感染進一步擴散造成對機體的打擊，有效縮短了感染時間。

本實驗研究表明，傳統(tǒng)中成藥制劑如意金黃散酊劑應用于早期皮膚感染，能夠深入提取并保留使其有效成分，使其抗炎功效在原有基礎上進一步增強，同時避免了抗菌藥物的不必要使用而造成的細菌耐藥等副作用，具有簡便廉驗的特點，值得推廣并進一步深入研究。

［1］李競.中國瘍科大全［M］.天津：天津科學技術出版社，1992，（37）165－185.

［2］越洪武，金枝.如意金黃散黑膏藥制備工藝改進及臨床療效觀察［J］.中成藥，1995，17（8）：46.

［3］王占科，胡新勇，許霖水，等.燙傷增加大鼠TNF－α基因表達對內毒素刺激的敏感性［J］.現(xiàn)代診斷與治療，2012，13（4）：207－209.

［4］安成，周育平，李春生.復方馬勃沖劑對肺炎球菌感染家兔TNF－α、IL－6的影響［J］.醫(yī)學理論與實踐，2001，14（8）：708－709.

［5］申英姬，金正勇，金政，等.中樞神經系統(tǒng)感染患兒腦脊液的TNF與IL－1β的含量變化及其臨床意義［J］.中國婦幼保健，2003，18（1）：42－43，45.