周正茂 李育霞

反定型微板法在疾病預(yù)防控制中心的應(yīng)用

周正茂 李育霞

保證反定型微板法在實(shí)際工作中順利進(jìn)行，并不斷總結(jié)出血型誤判的原因，以便在血型鑒定中引起重視，保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確判讀，提高輸血安全系數(shù)。

反定型；微板法；血型誤判；血型鑒定

1 材料與方法

1.1 儀器STAR全自動(dòng)加樣處理機(jī)，KUBOTA-4000平板離心機(jī)，上海無(wú)相微型振蕩器，帝肯SUNRISE酶標(biāo)儀，ITWELL實(shí)驗(yàn)室軟件，96孔U型板，手工加樣器。

1.2 試劑國(guó)家批準(zhǔn)使用的反定血型試劑（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司-國(guó)食藥監(jiān)械準(zhǔn)字2011第3400169號(hào)）。

1.3 操作方法

1.3.1 加樣品（STAR加樣）

1.3.1.1 在STAR軟件上添加了XF1-48、XF49-96、O細(xì)胞檢測(cè)加樣程序的編輯，包括板的布局SA、SB位置從上到下重復(fù)一次的液體SAMPLE的加樣，編號(hào)分別為1-48、49-96、1-96，加樣量設(shè)定為40μl（血清和血球試劑），無(wú)預(yù)稀釋液體的加入，無(wú)對(duì)照空加入，質(zhì)控手工加入。

1.3.1.2 進(jìn)行加樣通道1000μl容量的核查，保證A、B、O三種血球凝集實(shí)驗(yàn)所需標(biāo)本量的添加在整個(gè)1000μl允許范圍內(nèi)。

1.3.1.3 定義實(shí)驗(yàn)微板順序，分別將反定型三塊微板定義為XF年月日01、XF年月日02、XF年月日03。

1.3.2 加試劑用手工加樣器在第一、第二（1-48、49-96）塊板上手工加入等量的A、B血球試劑，在第三（1-96）塊板上手工加入等量的O血球試劑。

1.3.3 離心KUBOTA-4000離心機(jī)有試管和微板兩種離心軸，在進(jìn)行此種血型操作時(shí)需要用微板離心軸進(jìn)行血型微板的離心。KUBOTA-4000離心機(jī)設(shè)定1000轉(zhuǎn)/min，離心時(shí)間為2min。血型微板要加蓋后進(jìn)行離心以防止外濺。

1.3.4 振蕩振蕩懸浮溫度37℃，1000r/min，振蕩2min取出靜置5～10min。

1.3.5 判讀借助ITSWELL實(shí)驗(yàn)室軟件進(jìn)行判讀。讀取規(guī)則為主波長(zhǎng)620nm；振動(dòng)強(qiáng)度為弱；振動(dòng)時(shí)間為1秒；4.3.4.5臨界值公式：A球=0.8，B球=0.8；臨界值A(chǔ)球=0.8，B球=0.8；表達(dá)式陽(yáng)性（+），陰性（-），灰區(qū)或無(wú)效。

2 結(jié)果

試驗(yàn)具體結(jié)果見實(shí)驗(yàn)記錄見表1。

表1 血型對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果

此檢測(cè)方法實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化加樣，避免了人為差錯(cuò)的發(fā)生，同時(shí)實(shí)現(xiàn)了儀器判讀結(jié)果，保存了原始質(zhì)料；此方法尤其適合批量標(biāo)本處理，節(jié)省了操作時(shí)間；滿足實(shí)驗(yàn)室要求，符合確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)；在此方法實(shí)際應(yīng)用過程中0090913005199的標(biāo)本一例正反定型不符，正定型結(jié)果為O型，經(jīng)肉眼觀察AB兩側(cè)均無(wú)凝集。反定型判讀結(jié)果為AB型，經(jīng)肉眼觀察AB兩側(cè)均無(wú)凝集。

3 處理

疑為該標(biāo)本正反定型不符，于是同時(shí)進(jìn)行微板及紙片和試管三種方式同時(shí)手工復(fù)核，結(jié)果反定型仍為AB型，報(bào)省血液中心血型參比實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，反定型結(jié)果判定為O型。

4 討論

根據(jù)衛(wèi)生部關(guān)于印發(fā)《血站技術(shù)操作規(guī)程（2012版）》的通知中明確規(guī)定衛(wèi)醫(yī)政發(fā)〔2012〕1號(hào)4.11.2血型檢測(cè)方法：血型篩查常用方法有平板法和微板法、血型鑒定常用試管法和微板法。按照試劑說(shuō)明書和《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）的規(guī)定進(jìn)行具體操作和質(zhì)量控制。附錄E提供了建立微板法，可供實(shí)驗(yàn)室自行建立微板法時(shí)參考。

若出現(xiàn)2.4情況可從以下方面進(jìn)行原因的排查。首先是操作者，是否有操作不當(dāng)?shù)沫h(huán)節(jié)造成結(jié)果的偏差。其次是機(jī)器，運(yùn)行是否正常，是否在有效的校準(zhǔn)期內(nèi)。第三是物料，試劑是否在有效期內(nèi)，試劑的保存是否符合要求，微板是否刷洗干凈，在微孔板內(nèi)是否有少量殘留的水蒸氣，提供用于判讀的微板廠家是否具有相應(yīng)的資質(zhì)，其產(chǎn)品是否合格。第四是操作方法，是否存在缺陷。最后是實(shí)驗(yàn)環(huán)境，溫度、濕度是否達(dá)到相應(yīng)的要求。從上述的人、機(jī)、法、環(huán)都滿足實(shí)驗(yàn)要求的情況下，最有可能導(dǎo)致問題出現(xiàn)的原因則是物料。而在物料中，微板廠家具有相應(yīng)資質(zhì)，微板涮洗潔凈并進(jìn)行了干燥處理，最有可能導(dǎo)致問題出現(xiàn)的原因則是反定型試劑在有效期末（購(gòu)置的反定型試劑有效期為2個(gè)月），造成部分反定型試劑的血球出現(xiàn)離心后溶血現(xiàn)象。

由此可得到結(jié)論，本室使用的反定型鑒定方法是標(biāo)準(zhǔn)方法，可以常規(guī)用于血液檢測(cè)。出現(xiàn)血型正反定型不符時(shí)，從上述方面找出原因，尤其在試劑使用有效期末，可手工配制血球試劑或有新批號(hào)血球試劑進(jìn)行比對(duì)實(shí)驗(yàn)，以減免類似差錯(cuò)的發(fā)生。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.血站技術(shù)操作規(guī)程·衛(wèi)醫(yī)政發(fā)(2012)1號(hào)[S].北京,2012.

[2]王培華.輸血技術(shù)學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,2002：113.

R817.1

A

1673-5846(2013)08-0305-02

吉林省遼源市疾病預(yù)防控制中心，吉林遼源 136200