高海艷，李健

（1.榆林學(xué)院，陜西榆林 719000；2.北京工商大學(xué)，北京 100048）

葡萄籽提取物（GSE）是從釀酒葡萄的種子中提取出來(lái)的一種多酚物質(zhì)混合物，其多酚含量多在95%以上。20 世紀(jì)80 年代以來(lái)，人們對(duì)GSE 進(jìn)行了大量生化、藥理活性的研究。結(jié)果表明，GSE 是迄今為止所發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的有效氧自由基清除劑和脂質(zhì)過(guò)氧化抑制劑[1]，在體內(nèi)其抗氧化、清除自由基的能力是VE的50 倍，VC的20 倍。葡萄籽提取物在抗氧化、抗腫瘤、抗炎、抗過(guò)敏以及保護(hù)心血管等方面的作用，以及優(yōu)越的抗氧化活性和無(wú)副作用等受到人們的青睞，被廣泛應(yīng)用于食品、飲料、化妝品及保健品等領(lǐng)域，是一種具有廣泛發(fā)展空間的天然原料資源。

另外，有研究表明，GSE 處理可顯著抑制鏈格孢菌（Alternaria alternata）、青霉菌（Penicillium expansum）這兩種病原菌在鴨梨果實(shí)上的發(fā)病率及病斑直徑擴(kuò)展[2]。1%GSE 負(fù)壓滲透處理可以延緩鴨梨果實(shí)的成熟衰老，保持其貯藏品質(zhì)，控制貯藏期間腐爛、失重及果柄褐變[3]。GSE 在提高鴨梨果實(shí)抗病性及采后貯藏品質(zhì)的應(yīng)用上具有重要意義。

本研究通過(guò)采后應(yīng)用葡萄籽提取物處理桃果實(shí)，研究其對(duì)果實(shí)采后貯藏品質(zhì)的影響，進(jìn)一步發(fā)掘葡萄籽提取物在果實(shí)采后防腐保鮮領(lǐng)域中的應(yīng)用潛力。

1 材料與方法

1.1 材料

供試水果：桃（Prunus persica L.），為北京33 號(hào)（硬度約為80N），采自北京市平谷大華山果園，果實(shí)采收當(dāng)天運(yùn)回，選擇大小均勻一致，無(wú)機(jī)械傷和病蟲(chóng)害的果實(shí)進(jìn)行處理。

葡萄籽提取物（Grape seed extract，GSE）是采用標(biāo)準(zhǔn)工藝按一定比例或活性成分含量（原花青素含量≥95%）提取、烘干并過(guò)100 目篩的橙棕色細(xì)干粉末，購(gòu)于尖峰天然產(chǎn)物研究開(kāi)發(fā)有限公司。

1.2 采后處理方法

將桃果實(shí)用1.0%次氯酸鈉溶液浸泡1 min 進(jìn)行表面殺菌，然后用自來(lái)水沖洗，晾干后分別浸入1.0%的葡萄籽提取物溶液中，室溫下真空（-30 kPa）滲透5 min，取出晾干。處理后的果實(shí)置于（2.0±0.5）℃，90 %～95%RH 條件下貯藏，進(jìn)行觀察測(cè)定。每處理120 個(gè)果實(shí)，重復(fù)3 次。以蒸餾水滲透處理5 min 的桃果實(shí)為對(duì)照。

1.3 腐爛率統(tǒng)計(jì)

桃果實(shí)經(jīng)葡萄籽提取物處理后，在2.0 ℃，90%～95%RH 貯藏。以清水處理作為對(duì)照，每處理30 個(gè)果實(shí)，重復(fù)3 次。在貯藏期間定期統(tǒng)計(jì)果實(shí)自然腐爛情況，計(jì)算腐爛率。

1.4 果實(shí)硬度測(cè)定

用FHM-1 型果實(shí)硬度計(jì)測(cè)定。圍繞果實(shí)中部，削去果皮后均勻取三個(gè)點(diǎn)測(cè)定。每處理測(cè)定6 個(gè)果實(shí)。重復(fù)3 次。

1.5 可溶性固形物（SSC）含量測(cè)定

用PAL-α 迷你數(shù)顯糖度計(jì)（廈門(mén)群創(chuàng)科技有限公司）測(cè)定。圍繞果實(shí)中部，削去果皮后均勻取3 個(gè)點(diǎn)測(cè)定。每處理測(cè)定6 個(gè)果實(shí)，重復(fù)3 次。

1.6 可滴定酸（TA）含量測(cè)定

可滴定酸含量測(cè)定參照曹建康方法（酸堿中和法），并做如下修改：稱取果肉2 g，加4 mL 蒸餾水研磨，研磨勻漿后離心（10，000 r/min，20 min），取上清液4 mL，用0.01 mol/L 的NaOH 滴定。每處理取果6 個(gè)，重復(fù)3 次。果實(shí)可滴定酸含量計(jì)算方法如下：

可滴定酸含量/%=C×N×0.07/2×100

式中：C 為消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)液毫升數(shù)，mL；N 為氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)液摩爾濃度，（mol/L）；折算系數(shù)為（檸檬酸）0.070。

1.7 抗壞血酸（AsA）含量測(cè)定

抗壞血酸的測(cè)定采用固蘭鹽比色法。稱取果肉6.0 g，加6 mL 0.1 mol/L 的乙酸溶液研磨，研磨勻漿后離心（10，000×g，20 min），取上清液0.5 mL 進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定方法同標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作過(guò)程。抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：配制0.1 mg/mL 的抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)母液，分別稀釋母液的濃度為0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/mL。吸取各濃度的標(biāo)準(zhǔn)液0.5 mL，加入EDTA-Na2250 μL，0.5 mol/L 的乙酸250 μL，固蘭鹽B 溶液2.5 mL?；靹蚱魃匣靹?，靜置5 min 后在420 nm 處測(cè)定其吸光值，以抗壞血酸的濃度值為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線如下：y=0.137 3x-0.000 2（R2=0.994 3）。

1.8 果實(shí)褐變指數(shù)

根據(jù)果實(shí)褐變的不同程度，分級(jí)統(tǒng)計(jì)。將果實(shí)沿果心部位橫切，以其切面上果肉組織褐變面積劃分褐變級(jí)別：0 級(jí)，果肉無(wú)褐變；1 級(jí)，果肉褐變面積少于1/4；2 級(jí)，果肉褐變面積為1/4～1/2；3 級(jí)，果肉褐變面積為1/2～3/4；4 級(jí)，果肉褐變面積大于3/4。

1.9 多酚氧化酶（PPO）活性測(cè)定

稱取5.0 g 果肉，加入5.0 mL 100 mmol/L、pH 5.5的乙酸緩沖液（含4%PVP，1 mmol/L 聚乙二醇和1%Triton X-100），冰浴研磨勻漿，然后于4 ℃、10，000×g離心20 min，上清液即為粗酶提取液。參考Chen 等方法并改進(jìn)。反應(yīng)體系由5 mL 50 mmol/L、pH 5.5 的乙酸緩沖液，1.0 mL 50 mmol/L 鄰苯二酚溶液和100 μL 酶液組成。從加入酶液1 min 開(kāi)始，記錄每分鐘反應(yīng)體系在420 nm 下的吸光值，連續(xù)測(cè)定10 min。以每分鐘每克果肉吸光值增加1 為一個(gè)活性單位（U），酶活單位為U/（g·FW）。重復(fù)3 次。

1.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

應(yīng)用SPSS 11.5 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析（ANOVA），并利用鄧肯式比較分析差異顯著性，P＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄籽提取物處理對(duì)桃果實(shí)貯藏期間自然發(fā)病率的影響

葡萄籽提取物處理對(duì)桃果實(shí)貯藏期間自然發(fā)病率的影響見(jiàn)圖1。

圖1 葡萄籽提取物處理對(duì)桃果實(shí)貯藏期間自然發(fā)病率的影響Fig.1 Effect of grape seed extract on decay incidence of peach fruit during storage

如圖1 所示，在桃果實(shí)貯藏期間，濃度為1.0%和0.5%的葡萄籽提取物處理均有效地抑制了果實(shí)的發(fā)病率；貯藏16 d 后，1%葡萄籽提取物處理的果實(shí)還沒(méi)有出現(xiàn)發(fā)病果；貯藏36 d 后，對(duì)照果實(shí)發(fā)病率達(dá)到29.3%，而這兩個(gè)濃度葡萄籽提取物處理的果實(shí)表現(xiàn)了較低的發(fā)病率，分別比對(duì)照低54.0%和43.6%。

2.2 葡萄籽提取物處理對(duì)貯藏期間桃果實(shí)硬度的影響

葡萄籽提取物處理對(duì)貯藏期間桃果實(shí)硬度的影響見(jiàn)圖2。

圖2 葡萄籽提取物處理對(duì)貯藏期間桃果實(shí)硬度的影響Fig.2 Effect of grape seed extract treatment on firmness of peach fruit during storage

如圖2 所示，在低溫貯藏過(guò)程中，桃果實(shí)硬度逐漸下降；葡萄籽提取物處理明顯延緩了桃果實(shí)低溫貯藏期間硬度的下降（P＜0.05）；在貯藏28 d 時(shí)，對(duì)照果實(shí)的硬度下降到40.6 N，而葡萄籽提取物處理果實(shí)比對(duì)照高出25.3%。

2.3 葡萄籽提取物處理對(duì)貯藏期間桃果實(shí)可溶性固形物含量的影響

葡萄籽提取物處理對(duì)貯藏期間桃果實(shí)可溶性固形物含量的影響見(jiàn)圖3。

圖3 葡萄籽提取物對(duì)貯藏期間桃果實(shí)可溶性固形物含量的影響Fig.3 Effect of grape seed extract on SSC of peach fruit during storage

如圖3 所示，在低溫貯藏過(guò)程中，桃果實(shí)可溶性固形物含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)；與對(duì)照果實(shí)相比，葡萄籽提取物處理顯著保持了桃果實(shí)可溶性固形物的含量；在貯藏7 d 后，對(duì)照果實(shí)可溶性固形物含量達(dá)到高峰，而葡萄籽提取物處理果實(shí)則在貯藏21 d 后達(dá)到高峰；貯藏28 d 時(shí)，對(duì)照果實(shí)可溶性固形物含量?jī)H為8.6%，而葡萄籽提取物果實(shí)為11.2%，較之高出28.5%。

2.4 葡萄籽提取物處理對(duì)貯藏期間桃果實(shí)可滴定酸含量的影響

葡萄籽提取物處理對(duì)貯藏期間桃果實(shí)可滴定酸含量的影響見(jiàn)圖4。

圖4 葡萄籽提取物處理對(duì)貯藏期間桃果實(shí)可滴定酸含量的影響Fig.4 Effect of grape seed extract on TA content of peach fruit during storage

如圖4 所示，桃果實(shí)可滴定酸（TA）含量在低溫貯藏過(guò)程中呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)；與對(duì)照果實(shí)相比，經(jīng)葡萄籽提取物處理的桃果實(shí)TA 含量始終保持相對(duì)較高的水平；在貯藏28 d 時(shí)，葡萄籽提取物處理果實(shí)TA含量為0.12%，較對(duì)照高出9.2%。

2.5 葡萄籽提取物處理對(duì)貯藏期間桃果實(shí)抗壞血酸含量的影響

葡萄籽提取物處理對(duì)貯藏期間桃果實(shí)抗壞血酸含量的影響見(jiàn)圖5。

圖5 葡萄籽提取物處理對(duì)貯藏期間桃果實(shí)抗壞血酸含量的影響Fig.5 Effect of grape seed extract on AsA content of peach fruit during storage

如圖5 所示，在桃果實(shí)低溫貯藏過(guò)程中，抗壞血酸含量在貯藏前期迅速上升，在21 d 上升至最高后開(kāi)始下降；經(jīng)葡萄籽提取物處理的果實(shí)在貯藏期間較對(duì)照果實(shí)保持較高的抗壞血酸含量，在低溫貯藏28 d時(shí)，葡萄籽提取物處理果實(shí)中抗壞血酸含量達(dá)到53.9 mg/kgFW，比對(duì)照果實(shí)高出23.1%。

2.6 葡萄籽提取物處理對(duì)貯藏期間桃果實(shí)果肉褐變的影響

葡萄籽提取物處理對(duì)貯藏期間桃果實(shí)果肉褐變的影響見(jiàn)圖6。

圖6 葡萄籽提取物處理對(duì)貯藏期間桃果實(shí)褐變指數(shù)的影響Fig.6 Effect of grape seed extract on browning index of peach fruit during storage

如圖6 所示，采后葡萄籽提取物處理顯著抑制了冷藏期間桃果實(shí)果肉的褐變（P＜0.05），對(duì)照與1.0%葡萄籽提取物處理的桃果實(shí)在冷藏28 d 時(shí)出現(xiàn)果肉褐變，此時(shí)，對(duì)照果實(shí)褐變指數(shù)為0.17，而葡萄籽處理果實(shí)僅為0.03，比對(duì)照降低了82.4%。

2.7 葡萄籽提取物處理對(duì)貯藏期間桃果實(shí)多酚氧化酶（PPO）活性的影響

葡萄籽提取物處理對(duì)貯藏期間桃果實(shí)多酚氧化酶活性的影響見(jiàn)圖7。

如圖7 所示，葡萄籽提取物處理桃果實(shí)與對(duì)照果實(shí)的多酚氧化酶（PPO）活性在貯藏期間呈現(xiàn)先增加后降低的過(guò)程，二者均在貯藏7 d 達(dá)到高峰。葡萄籽提取物處理顯著降低了桃果實(shí)PPO 活性（P＜0.05），在貯藏7 d 和21 d 時(shí)，分別較對(duì)照降低了21.6 %和29.9%。

圖7 葡萄籽提取物處理對(duì)貯藏期間桃果實(shí)PPO 活性的影響Fig.7 Effects of grape seed extract on PPO activity of Peach fruit during storage

3 結(jié)論

采后應(yīng)用1.0%的葡萄籽提取物不僅沒(méi)有對(duì)果實(shí)品質(zhì)產(chǎn)生不良影響，而且能在一定程度上降低果實(shí)自然發(fā)病率，顯著延緩果實(shí)的后熟衰老，改善果實(shí)的貯藏品質(zhì)，增強(qiáng)果實(shí)的采后抗病性。葡萄籽提取物對(duì)減少化學(xué)殺菌劑的使用量和降低環(huán)境污染具有重要的實(shí)踐意義，有望開(kāi)發(fā)成為相對(duì)安全、無(wú)公害的果實(shí)防腐保鮮劑。

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