劉金龍，荊小院，楊美紅，宗世祥，駱有慶，范麗華，劉紅霞，張金桐，*

(1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)化學(xué)生態(tài)研究所，太谷 030801;2.北京林業(yè)大學(xué)省部共建森林培育與保護(hù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100083)

六星黑點(diǎn)豹蠹蛾Zeuzera leuconotum Butler是一種重要的園林害蟲［1］，俗稱截桿蟲。主要危害花灌木和喬木的枝梢，可造成林木死亡［2］，嚴(yán)重影響園林綠化效果。許多昆蟲的發(fā)育、行為和代謝均受時(shí)辰節(jié)律的控制［3］，與其內(nèi)分泌系統(tǒng)有關(guān)［4-7］，其中昆蟲性信息素的產(chǎn)生和釋放是昆蟲繁殖過程中產(chǎn)生性行為的重要環(huán)節(jié)，因此研究其時(shí)辰節(jié)律對(duì)于性信息素的提取和鑒定有重要的參考價(jià)值，也是利用其性信息素監(jiān)測(cè)和防治害蟲研究中的重要內(nèi)容。目前，關(guān)于六星黑點(diǎn)豹蠹蛾的性信息素產(chǎn)生與釋放的時(shí)辰節(jié)律尚未見報(bào)道，近年來，作者對(duì)其生殖行為進(jìn)行了全面觀察［8］，并利用腺體提取，瓶?jī)?nèi)收集、觸角電位技術(shù)以及林間處女蛾引誘試驗(yàn)等方法，對(duì)六星黑點(diǎn)豹蠹蛾產(chǎn)生和釋放性信息素的時(shí)辰節(jié)律進(jìn)行了研究，為進(jìn)一步開展性信息素化學(xué)組分的提取、鑒定，以及應(yīng)用研究奠定了基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試?yán)ハx

六星黑點(diǎn)豹蠹蛾的老熟幼蟲和蛹采自山東東營(yíng)市黃河路兩旁綠化帶白蠟樹。剪下白蠟樹受害枝條，保留長(zhǎng)度為30—60cm的有蟲樹枝，帶回養(yǎng)蟲室(2m×2.5m×2m)，綁縛于橫掛的鐵絲上，模擬樹體狀態(tài)飼養(yǎng)，養(yǎng)蟲室光周期L∶D=14∶10，光期5:00開始，19:00結(jié)束，溫度19—32℃，相對(duì)濕度75%—85%，保持自然通風(fēng)，待其羽化，鑒別雌雄后分別置于養(yǎng)蟲籠(50cm×50cm×60cm)，保證雌蛾全部為處女蛾，并且明確蟲齡(成蟲羽化后至第1個(gè)暗期結(jié)束視為1日齡)。

1.2 六星黑點(diǎn)豹蠹蛾求偶行為及其時(shí)辰節(jié)律的觀察

在自然條件下的養(yǎng)蟲室內(nèi)，將10頭同日齡處女雌蛾放養(yǎng)于同一紗罩養(yǎng)蟲籠(80cm×80cm×80cm)中，籠內(nèi)置插在水瓶中的新鮮白蠟樹枝，底部鋪一層白蠟樹葉，供雌蛾飛舞或爬行，觀察雌蛾的求偶行為及其時(shí)辰節(jié)律。據(jù)觀察，六星黑點(diǎn)豹蠹蛾交配均在暗期［8］，故只在暗期觀察和記錄雌蛾求偶情況，以紅色燈為觀察光源。重復(fù)3次。在暗期每隔1h觀察1次，連續(xù)觀察6d，記錄求偶頭數(shù)，按每2h的求偶率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.3 性信息素產(chǎn)生與釋放時(shí)辰節(jié)律的測(cè)定

利用雄蛾的觸角電位反應(yīng)(EAG)檢測(cè)雌蛾性信息素產(chǎn)生和釋放的時(shí)辰節(jié)律。性信息素提取物的制備分為腺體提取和瓶?jī)?nèi)收集兩種方法。以雄蛾對(duì)腺體提取物的EAG值表示性信息素的產(chǎn)生量;對(duì)瓶?jī)?nèi)收集物的EAG值表示性信息素的釋放量。

1.3.1 腺體提取

通過對(duì)雌蛾腹尖的掃描電鏡與組織切片的觀察，得知其性信息素分泌腺位于第8—9腹節(jié)之間的節(jié)間膜上。根據(jù)其生殖行為特征［8］，六星黑點(diǎn)豹蠹蛾在進(jìn)入暗期5—8 h交配率最高，故選擇在暗期5h提取其腺體。提取時(shí)，用手輕輕擠壓雌蛾腹部，待其第8—9腹節(jié)完全伸出腹尖，用眼科手術(shù)剪快速剪下，放入5mL的具塞尖底試管中，加入0.5mL重蒸正己烷，蓋緊瓶塞，室溫下浸泡1h后，抽取提取液并轉(zhuǎn)移至樣品管中，密封，置于冰箱內(nèi)(-4℃以下)貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 瓶?jī)?nèi)收集

參照張金桐［9］和李連昌［10］報(bào)道的方法收集雌蛾釋放的性信息素。將不同處理下的處女雌蛾放入具磨口玻璃塞的25 mL潔凈干燥的雞心瓶中，1瓶1蟲，瓶塞與磨口之間加一細(xì)銅絲，既可保障瓶?jī)?nèi)雌蛾正常呼吸，又可防止瓶中雌蛾釋放的性信息素向外擴(kuò)散。按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求，在不同的時(shí)辰將雞心瓶從培養(yǎng)條件下取出，立刻放入冰箱(-10℃)，冷凍15min，小心取出雌蛾，向瓶?jī)?nèi)加入2mL重蒸正己烷，加塞后反復(fù)搖動(dòng)，以便將瓶壁上和空氣中的性信息素充分洗脫。每一處理，重復(fù)5頭雌蛾。合并收集液，經(jīng)氮吹濃縮至一定體積后轉(zhuǎn)移到樣品管中，密封，置于冰箱內(nèi)(-4℃以下)貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 觸角電位測(cè)定

觸角電位測(cè)定儀由荷蘭Syntech公司生產(chǎn)。測(cè)定條件:連續(xù)氣體流量為124mL/min，刺激氣體流量為20mL/min，刺激時(shí)間為0.1s，刺激間隔60 s。

參照張金桐報(bào)道的方法［9］，取2日齡未交配雄蛾，將觸角從基部剪下，用刀片去掉觸角兩端的角質(zhì)層后，用Beadle-Ephrussi生理液將其兩端濕潤(rùn)，分別與參比電極和記錄電極相連，使電路導(dǎo)通，微調(diào)觸角與電極之間的連接使基線平穩(wěn)，即可開始測(cè)定。先將濾紙條(2cm×0.5cm)縱折一下，部分插入巴斯德管端口，用微量注射器吸取一定量待測(cè)試液，滴在濾紙條上，待溶劑揮發(fā)后將其完全推入，進(jìn)行觸角電位測(cè)定。

測(cè)定時(shí)，各處理提取液的測(cè)定順序是隨機(jī)的。為消除觸角因適應(yīng)而導(dǎo)致的偏差，在每一樣品測(cè)定前后，均以20μL正己烷為空白對(duì)照，分別測(cè)量空白值，取其平均值為該樣品的平均空白值，以樣品的平均反應(yīng)值減去平均空白值，得觸角對(duì)樣品的絕對(duì)反應(yīng)值。樣品均在同一根觸角上平行測(cè)定3次，計(jì)算測(cè)定的平均值。每只雄蛾只取用1根觸角。共測(cè)試6根觸角為重復(fù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.3.4 雄蛾對(duì)不同性信息素濃度的反應(yīng)曲線的測(cè)定

按1.3.1方法，選取20頭處女雌蛾，將腺體依次剪下，置于5mL具塞尖底試管中，加入1mL重蒸正己烷浸泡1h后，抽取750μL提取液于另一試管，氮吹濃縮至300μL，得濃度為1 FE/20μL(FE:female equivalent，雌當(dāng)量)正己烷溶液。以此為母液分別配制10，1，10-1，10-2，10-3，10-4，10-5FE/20μL的樣品溶液，其中10 FE/20μL是將200μL母液氮吹濃縮至20μL制成。以20μL正己烷為對(duì)照，按照濃度由低到高的順序進(jìn)行觸角電位測(cè)定。

1.3.5 性信息素產(chǎn)生與釋放的日動(dòng)態(tài)規(guī)律

通過檢測(cè)不同日齡處女雌蛾進(jìn)入暗期后5h所產(chǎn)生和釋放的性信息素量來確定日動(dòng)態(tài)節(jié)律。腺體提取時(shí)，以100μL正己烷提取5頭同一日齡雌蛾的腺體，得濃度為1FE/20 μL的性信息素提取液。同時(shí)取5頭處女雌蛾分別進(jìn)行單蟲瓶?jī)?nèi)收集，亦制備成1FE/20 μL的性信息素收集液。每個(gè)處理重復(fù)3次。以正己烷為對(duì)照。

1.3.6 性信息素產(chǎn)生與釋放的時(shí)辰節(jié)律

通過檢測(cè)2日齡處女雌蛾在不同時(shí)辰所產(chǎn)生和釋放的性信息素量來確定時(shí)辰節(jié)律。分別于光期2，6，10，14h 和暗期1，2，3，4，5，6，7，8，9h 選取 5 頭 2 日齡處女雌蛾進(jìn)行腺體提取，同上制備成 1FE/20 μL 的性信息素提取液。同時(shí)在各個(gè)時(shí)辰選取5頭雌蛾分別進(jìn)行單蟲瓶?jī)?nèi)收集，同上制備成1FE/20 μL的性信息素收集液。每個(gè)處理重復(fù)3次。以正己烷為對(duì)照。

1.4 林間處女蛾誘蛾試驗(yàn)

在山東東營(yíng)市黃河路綠化帶進(jìn)行林間誘蛾試驗(yàn)。采用三角形誘捕器(黑色塑料瓦楞板制成，截面30cm×30cm×30cm，棱長(zhǎng)40cm)，將涂有粘蟲膠的蠟紙板插入誘捕器內(nèi)。將1頭2日齡處女雌蛾裝入自制小紗籠(5cm×5cm×5cm)內(nèi)，由細(xì)鐵絲從誘捕器上棱中間垂下，距粘膠面約2cm。誘捕器懸掛在白蠟樹枝上，距地面3—4m，以僅有粘蟲膠板的誘捕器為對(duì)照，設(shè)3個(gè)重復(fù)，誘捕器間距20m以上，隨機(jī)順序布置。每2h記錄1次所誘捕的雄蛾數(shù)量，計(jì)算占全天誘蛾總量的百分率，并統(tǒng)計(jì)分析。

1.5 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件中單因素方差分析(One-Way ANOVA)進(jìn)行分析處理，用Duncan法檢驗(yàn)差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 六星黑點(diǎn)豹蠹蛾求偶行為及其時(shí)辰節(jié)律

2.1.1 雌蛾的求偶行為

經(jīng)過林間及觀測(cè)籠內(nèi)的觀察，六星黑點(diǎn)豹蠹蛾于暗期進(jìn)行求偶和交配活動(dòng)，其余時(shí)間在樹干或樹枝隱蔽處靜伏。靜伏時(shí)，雌蛾翅呈屋脊?fàn)罡采w于腹部，腹尖偶爾套縮于第7腹節(jié)內(nèi)，而大部分時(shí)間腹尖暴露于體外。在暗期5—7h，雌蛾出現(xiàn)求偶行為，求偶過程表現(xiàn)為:雌蛾由靜伏變?yōu)樵谥Ω缮纤奶幣绖?dòng)，兩翅微向兩側(cè)外伸且伴隨輕微振動(dòng);爬行片刻后，兩翅振動(dòng)速度明顯加快，但不起飛，爬行范圍也逐漸減小，腹部末端翹起，第8腹節(jié)和產(chǎn)卵器伸直;原地劇烈振翅，第8—9腹節(jié)繼續(xù)伸直，最終向上翹起或左右擺動(dòng)，第8—9腹節(jié)節(jié)間膜已完全伸展，若無干擾或交配，可保持30min左右。在此期間，被隔離的雄蛾表現(xiàn)為:觸角豎立，腹部擺動(dòng)，或迅速爬行，或定向飛往雌蛾，在雌蛾周圍振翅、爬行，腹部側(cè)向左右彎曲，不時(shí)伸出抱握器，作出企圖交配的姿態(tài)。表明求偶是雌性成蟲的一種自發(fā)性行為，也是完成其生殖交配的必需過程，同時(shí)求偶也具有一定的時(shí)間性。因此本研究以腹部上翹、產(chǎn)卵器伸直并伴隨著振翅作為標(biāo)準(zhǔn)，判斷雌蛾是否求偶。

圖1 不同日齡雌蛾的求偶百分率Fig.1 The percentages of calling female Z.leuconotum of different ages

2.1.2 六星黑點(diǎn)豹蠹蛾日齡與求偶率的關(guān)系

在自然條件下的養(yǎng)蟲室內(nèi)，不同日齡雌蛾求偶率的統(tǒng)計(jì)結(jié)果如圖1所示。

可以看出，雌蛾在羽化當(dāng)天即可發(fā)生求偶行為，求偶率為43.3%;2—3日齡雌蛾求偶率最高，分別為86.7%和73.3%，與其它日齡求偶率相比差異顯著(P＜0.05);4日齡求偶率明顯下降，到6日齡僅有6.7%的雌蛾出現(xiàn)求偶行為。表明雌蛾在羽化1d后達(dá)性成熟，求偶行為在羽化后1—3d表現(xiàn)強(qiáng)烈，雌蛾日齡對(duì)求偶率有影響。六星黑點(diǎn)豹蠹蛾雌蛾成蟲期平均為6d，由此可推測(cè)求偶行為與雌蛾的生理活力相關(guān)，雌蛾的發(fā)育狀況是求偶行為的內(nèi)在制約因子［11］。

2.1.3 求偶行為的時(shí)辰節(jié)律

六星黑點(diǎn)豹蠹蛾的求偶率不僅受到日齡的影響，而且在同一天內(nèi)不同時(shí)辰求偶率也不一致。經(jīng)觀察其求偶行為僅在暗期，而且有時(shí)辰規(guī)律，因此在暗期觀察和記錄各日齡處女雌蛾的求偶行為，按每2h的求偶率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，分析結(jié)果列于表1。

表1 六星黑點(diǎn)豹蠹蛾雌蛾求偶行為的時(shí)辰節(jié)律Table 1 The calling rhythm of female Z.leuconotum

可以看出，雌蛾求偶行為最早發(fā)生在進(jìn)入暗期3h內(nèi)，主要是3—6日齡雌蛾;最晚發(fā)生在暗期7—9h，主要是1—2日齡雌蛾;最大求偶率出現(xiàn)在第2和3日齡的暗期5—7h之間;各日齡雌蛾求偶率隨時(shí)辰有所變化，從暗期開始到結(jié)束均表現(xiàn)為求偶率先低后高再逐漸減少的趨勢(shì)，其中1—3日齡均在進(jìn)入暗期5—7h期間求偶率最大，與其它時(shí)辰差異達(dá)到顯著水平(P＜0.05)，說明六星黑點(diǎn)豹蠹蛾求偶行為有一定的時(shí)辰節(jié)律。由表1還可以看出，求偶時(shí)間隨日齡的增加逐漸提前，為進(jìn)一步了解各日齡求偶時(shí)間的差異，經(jīng)加權(quán)平均法計(jì)算出求偶高峰期，以進(jìn)入暗期的時(shí)間(加權(quán)平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)表示:1—6日齡雌蛾求偶高峰期依次為(5.92±1.21)h，(5.68±2.22)h，(5.04±1.37)h，(4.79±0.68)h，(4.57±0.83)h，(4.50±0.58)h。表明，六星黑點(diǎn)豹蠹蛾的求偶行為存在時(shí)辰節(jié)律，而且與雌蛾日齡有關(guān)，這一點(diǎn)與其交配行為的時(shí)辰節(jié)律［8］具有一致性。

2.2 性信息素產(chǎn)生與釋放的時(shí)辰節(jié)律

2.2.1 雄蛾對(duì)性信息素提取物的EAG反應(yīng)

以2日齡處女雌蛾和雄蛾為測(cè)試對(duì)象，進(jìn)行觸角電位測(cè)定。測(cè)得雄蛾對(duì)不同濃度性信息素分泌腺提取物的觸角電位反應(yīng)如圖2。

可以看出，六星黑點(diǎn)豹蠹蛾雄蛾對(duì)性信息素提取物有較強(qiáng)的觸角電位反應(yīng)，其中對(duì)樣品溶液能產(chǎn)生觸角電位的起始濃度為 10-4FE/20μL，反應(yīng)閾值在 10-4—10-2FE/20μL之間，而在 10-1—101FE/20μL之間觸角電位反應(yīng)較強(qiáng)，可見雄蛾觸角對(duì)此濃度范圍的提取物反應(yīng)敏感。因此本研究選用1FE/20μL的腺體提取物作為標(biāo)準(zhǔn)刺激濃度，觸角電位高于閾值，但也不太強(qiáng)，不會(huì)因多個(gè)樣品的重復(fù)測(cè)試而引起觸角敏感性降低。

2.2.2 性信息素產(chǎn)生與釋放的日動(dòng)態(tài)規(guī)律

由圖3的觸角電位測(cè)定結(jié)果可以看出，雄蛾對(duì)1日齡處女雌蛾的腺體提取物和瓶?jī)?nèi)收集物均有電生理反應(yīng);對(duì)2日齡處女雌蛾的反應(yīng)最為強(qiáng)烈(5.1 mV，3.9 mV)，與其它日齡達(dá)差異顯著水平(P＜0.05);對(duì)3日齡的反應(yīng)也較高，但隨后明顯降低。結(jié)果表明:羽化當(dāng)晚雌蛾體內(nèi)即可產(chǎn)生性信息素，并向體外釋放，但性信息素量較少;羽化第2天產(chǎn)生和釋放的性信息素量最多，以后逐日下降。這個(gè)結(jié)果與求偶率隨日齡的變化規(guī)律是一致的，推測(cè)六星黑點(diǎn)豹蠹蛾羽化后即性成熟，在其召喚求偶時(shí)，通過釋放體內(nèi)產(chǎn)生的性信息素引誘雄蛾來完成交配行為。

圖2 雄蛾對(duì)不同濃度性信息素粗提物的EAG反應(yīng)曲線Fig.2 EAG response(mean ±SD)of male to female sex pheromone content

2.2.3 性信息素產(chǎn)生與釋放的時(shí)辰節(jié)律

雄蛾對(duì)不同時(shí)辰處女雌蛾的觸角電位反應(yīng)測(cè)試結(jié)果見圖4，可以看出，雄蛾對(duì)暗期3h之前的腺體提取物反應(yīng)逐漸增強(qiáng)，但是對(duì)瓶?jī)?nèi)收集物的反應(yīng)很弱;雄蛾對(duì)暗期4h的腺體提取物反應(yīng)明顯增強(qiáng)，且對(duì)暗期5h時(shí)提取物的反應(yīng)最為強(qiáng)烈，之后逐漸減弱。對(duì)暗期4h時(shí)瓶?jī)?nèi)收集物有反應(yīng)，隨后逐漸增強(qiáng)，而且對(duì)暗期6h時(shí)收集物的反應(yīng)最為強(qiáng)烈，之后逐漸減弱。結(jié)果表明，雌蛾腺體中的性信息素含量從進(jìn)入暗期后逐漸增加，在暗期5h時(shí)含量最大，隨后逐漸減少，而雌蛾釋放性信息素從暗期4h開始，至暗期6h時(shí)達(dá)到高峰，這也就說明了雌蛾腺體性信息素含量變化曲線(圖4)在暗期4h時(shí)出現(xiàn)拐點(diǎn)以及從5h到9h逐漸減少的原因。由此可見，六星黑點(diǎn)豹蠹蛾雌蛾存在有性信息素產(chǎn)生和釋放的時(shí)辰節(jié)律:產(chǎn)生量的峰值在暗期5h，而釋放量的峰值在暗期6h，與求偶行為的時(shí)辰節(jié)律存在一致性。

圖3 雄蛾對(duì)不同日齡處女雌蛾的腺體提取物和瓶?jī)?nèi)收集物的觸角電位反應(yīng)(暗期5h)Fig.3 The EAG response(mean ± SD)of male to the gland extract and collection sex pheromone of 1—6 old virgin females at the 5th hour into scotophase

圖4 六星黑點(diǎn)豹蠹蛾性信息素產(chǎn)生與釋放的時(shí)辰節(jié)律(2日齡)Fig.4 Circadian rhythm of the sex pheromone production and release(2-d-old)

2.3 林間誘捕試驗(yàn)結(jié)果

利用處女蛾不同時(shí)辰的誘蛾量也可以反映雌蛾釋放性信息素的時(shí)辰節(jié)律。由2日齡處女雌蛾在林間不同時(shí)間的誘蛾百分率(表2)可以看出，在光期雌蛾不能誘到雄蛾，進(jìn)入暗期誘蛾量逐漸增加，誘蛾高峰出現(xiàn)在0:00—2:00(暗期5—7h)期間。進(jìn)一步證明六星黑點(diǎn)豹蠹蛾雌蛾產(chǎn)生和釋放性信息素存在時(shí)辰節(jié)律，而且具有一致性。

3 結(jié)論與討論

求偶是昆蟲完成其生殖交配的必需過程，是一種自發(fā)行為，通常呈現(xiàn)出一定的晝夜節(jié)律性，并且這種節(jié)律受到外界因子的調(diào)節(jié)［18］。對(duì)六星黑點(diǎn)豹蠹蛾求偶行為的研究表明，處女雌蛾求偶率受日齡的影響，其中2日齡雌蛾求偶率最高，平均為86.7%。同日齡雌蛾的求偶行為存在明顯的時(shí)辰節(jié)律，求偶高峰期出現(xiàn)在進(jìn)入暗期5—7 h。從不同日齡求偶行為時(shí)辰節(jié)律的比較分析可知，雌蛾的求偶行為具有一定的時(shí)序性:隨著蟲齡的增加，其求偶時(shí)間逐漸提前，求偶高峰期前移，但求偶率逐漸減小。這一現(xiàn)象與其它鱗翅目昆蟲，如小地老虎Agrotis ypsilon［12］、豆野螟 Maruca vitrata［13］、榆木蠹蛾 Holcocerus vicarius［14］、Lonomia oblique［15］等的求偶行為相似，Swier認(rèn)為老齡處女雌蛾通過提前求偶的時(shí)間來提高與幼齡處女蛾的競(jìng)爭(zhēng)能力，以增加對(duì)雄蛾的引誘幾率［16］，六星黑點(diǎn)豹蠹蛾求偶行為也符合這種適應(yīng)性的生殖策略。

表2 2日齡處女雌蛾在林間不同時(shí)間的誘蛾試驗(yàn)(山東東營(yíng)，2011年6月)Table 2 Percentage of the male trapped by 2-day-old virgin female moth during different time of the day in the field(Dongying，Shandong;June，2011)

昆蟲求偶時(shí)，通過向體外釋放性信息素以引誘同種異性前去交配。許多鱗翅目昆蟲性信息素的產(chǎn)生和釋放存在時(shí)辰節(jié)律，如大袋蛾 Clania variegate［19］、棗粘蟲 Ancylis sativa［10］、小線角木蠹蛾 Holcocerus insularis［9］、甜菜夜蛾Spodoptera exigua［21］、沙棘木蠢蛾Holcocerus hippophaecolus［20］等，這些蛾類的性信息素產(chǎn)生和釋放僅在一天的某一個(gè)時(shí)間段。本文試驗(yàn)結(jié)果表明，六星黑點(diǎn)豹蠹蛾羽化當(dāng)晚雌蛾體內(nèi)即可產(chǎn)生性信息素，并且向體外釋放，羽化第2d產(chǎn)生和釋放的性信息素量最多，以后逐日下降;在一天中，雌蛾腺體中的性信息素從進(jìn)入暗期后逐漸增加，在暗期5h時(shí)量最大，隨后逐漸減少，而釋放性信息素從暗期4h開始，至6h時(shí)達(dá)到高峰。處女雌蛾林間誘蛾試驗(yàn)表明:誘蛾高峰出現(xiàn)在暗期5—7h期間，而且2日齡處女雌蛾的誘蛾效果最好［8］，這些結(jié)果都驗(yàn)證了六星黑點(diǎn)豹蠹蛾性信息素的釋放也存在著一定的時(shí)辰節(jié)律。

Haynes等［6］和Pope等［22］通過對(duì)于Platyptilia carduidoctyla和 Heliothis zea的生殖行為生理學(xué)的研究證實(shí)，許多昆蟲的羽化、交配和性信息素的產(chǎn)生與釋放均存在協(xié)同性。Mazor＆Dunkelblum總結(jié)了許多鱗翅目昆蟲的求偶交配行為與性信息素的產(chǎn)生和釋放的關(guān)系［17］，都表現(xiàn)出這些方面節(jié)律上的一致性。六星黑點(diǎn)豹蠹蛾雄蛾對(duì)性腺體提取和瓶?jī)?nèi)收集性信息素所產(chǎn)生的EAG反應(yīng)曲線(圖4)表明，2日齡雌蛾性信息素產(chǎn)生量的峰值在暗期5 h，釋放量的峰值在暗期6h，而求偶高峰期在進(jìn)入暗期5.68h，三者之間存在著一定的一致性。性信息素的產(chǎn)生略提前于釋放，這個(gè)結(jié)果與Delisle等對(duì)Pseudaletia unipuncta以及Snir等對(duì)Chrisodeixis chalcites的研究結(jié)果相似［23-24］，推測(cè)形成這種差異的可能原因是，雌蛾求偶行為需要體內(nèi)性信息素達(dá)到一定數(shù)量才可以啟動(dòng)，也反映出體內(nèi)合成性信息素早于求偶交配行為。

不少學(xué)者認(rèn)為昆蟲生殖行為的時(shí)辰節(jié)律是通過內(nèi)分泌系統(tǒng)進(jìn)行控制的［4-7］。本研究表明，雌蛾日齡對(duì)其時(shí)辰節(jié)律均有明顯的影響。由于各日齡雌蛾個(gè)體發(fā)育狀況和性成熟程度不一致，可見六星黑點(diǎn)豹蠹蛾的時(shí)辰節(jié)律首先是由其內(nèi)在的生理因素決定的。值得注意的是昆蟲的行為節(jié)律也受到環(huán)境溫度、光周期、濕度等生態(tài)因子的影響［25］。一天內(nèi)雌蛾求偶和性信息素產(chǎn)生與釋放的高峰期是由時(shí)間決定，還是由光周期或溫度決定，或者是由這些生態(tài)因子協(xié)同作用決定的，尚需做進(jìn)一步的研究。

了解性信息素產(chǎn)生和釋放的時(shí)辰節(jié)律，有利于把握提取性信息素的最佳時(shí)機(jī)，為性信息素的化學(xué)鑒定提供可靠依據(jù)。六星黑點(diǎn)豹蠹蛾求偶行為及其性信息素的產(chǎn)生和釋放的時(shí)辰節(jié)律是其生殖行為的重要環(huán)節(jié)，也是將來利用其性信息素進(jìn)行防治實(shí)踐所涉及的理論基礎(chǔ)和依據(jù)。

致謝:在采集試驗(yàn)用蟲和林間試驗(yàn)期間，山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植保學(xué)院周成剛教授和山東東營(yíng)勝利油田管理局公共事業(yè)部楊玉武先生提供幫助，特此致謝。

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