田海軍 彭新亮

(信陽農(nóng)林學(xué)院水產(chǎn)科學(xué)系，河南信陽 464000)

中草藥是中國醫(yī)藥的瑰寶。它具有毒副作用小、價(jià)格低廉、不易產(chǎn)生抗藥性優(yōu)點(diǎn)，且其中的某些藥物成分不僅有抗菌作用，還具免疫作用，能改善機(jī)體的免疫狀態(tài)，提高機(jī)體自身的抗菌防病能力，所以進(jìn)一步開展中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的應(yīng)用研究成為必然趨勢(shì)［4－5］?？鄥⒎絼┯煽鄥?、苦楝、百部、貫眾、青蒿、黃柏、茯苓幾味藥組成，是信陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校水產(chǎn)系水產(chǎn)病害實(shí)驗(yàn)室研究開發(fā)出來的防治魚類車輪蟲、指環(huán)蟲病等寄生蟲病的新型環(huán)境友好型漁藥，是復(fù)方中草藥漁業(yè)殺蟲劑，其劑型為水乳劑和水分散粒劑。

本研究初步評(píng)價(jià)了苦參方劑對(duì)藍(lán)彩鳉魚、庫蚊幼蟲、劍水蚤和輪蟲(臂尾種)的毒性。

1 材料與方法

1.1 測(cè)試生物

輪蟲在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過純培養(yǎng)獲得(Lubzens，1987年)。劍水蚤在敞開的400 L的金屬容器中通過添加家禽的糞便對(duì)其進(jìn)行產(chǎn)能性刺激而獲得(Wade和Stirling，1999)。庫蚊幼蟲在敞開的金屬容器中通過收集庫蚊的卵，然后讓其在體積為1 L的透明玻璃容器中孵化獲得，待其生長到第2齡期后做生物測(cè)驗(yàn)。藍(lán)彩鳉魚用20 L的球狀塑料容器從廢棄的池塘收集裝載到實(shí)驗(yàn)室，在19℃用脫氯的自來水馴養(yǎng)兩周(溶解氧為8.20 mg/L，pH 值為6.7)，馴養(yǎng)期間每天用蚊子幼蟲喂食，生物活性測(cè)試的8 h和18h之前進(jìn)行暴露處理。

1.2 生物測(cè)定

以苦參方劑在可再生的靜態(tài)系統(tǒng)進(jìn)行48h生物活性急性毒性試驗(yàn)(OECD，1981)。貯存液分別被稀釋配制成以下系列濃度:10.0，5.0，2.5，1.25，0.625，0.312和0.156 mg/L，而對(duì)蚊子幼蟲生物活性測(cè)定配制成以下濃度:40.0，20.0，10.0，5.0，2.5，1.25和0.625 mg/L。

對(duì)輪蟲的生物活性測(cè)定在25 mL 玻璃標(biāo)本瓶中進(jìn)行。從純培養(yǎng)中取含有1 mL 輪蟲的水進(jìn)行接種，每個(gè)處理濃度設(shè)3次重復(fù)。為了測(cè)定每個(gè)重復(fù)的死亡率，對(duì)處理液充分?jǐn)嚢韬?，?個(gè)1 mL胰島素注射器等分收集，然后倒入1 mL的計(jì)數(shù)腔中，把計(jì)數(shù)腔安裝在一個(gè)低功耗顯微鏡下觀察，計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)和記錄死亡率。分析每處理每重復(fù)濃度的平均死亡率之間的顯著性差異。當(dāng)輪蟲纖毛運(yùn)動(dòng)停止認(rèn)為已經(jīng)死亡。

劍水蚤生物活性測(cè)定在100 mL的玻璃杯中進(jìn)行。每個(gè)處理均設(shè)置重復(fù)濃度，而且用1 mL 注射器接種10只劍水蚤。設(shè)定呼吸心跳停止為死亡，通過立體顯微鏡觀察劍水蚤的死亡情況。記錄每個(gè)重復(fù)處理濃度的平均死亡率，對(duì)其進(jìn)行顯著性差異分析。

對(duì)庫蚊幼蟲的生物活性測(cè)定在100 mL 容量的玻璃杯中進(jìn)行，與劍水蚤的操作相同，幼蟲停止跳動(dòng)即認(rèn)為其為死亡。

藍(lán)彩鳉魚的生物活性測(cè)試在10 L 玻璃魚缸中進(jìn)行。每個(gè)魚缸內(nèi)魚的平均長度為(4.5 土1.2)cm，平均體重為(2.7 士0.5)g。每個(gè)處理濃度設(shè)重復(fù)。當(dāng)藍(lán)彩鳉魚運(yùn)動(dòng)停止或尾巴擺動(dòng)停止和不再對(duì)機(jī)械刺激起反應(yīng)時(shí)認(rèn)為其死亡(觸摸)。觀察到有死魚時(shí)即將其移出玻璃缸。對(duì)各處理各重復(fù)死亡率的方差進(jìn)行顯著性差異分析。

水質(zhì)參數(shù)由生物測(cè)定試驗(yàn)的初末決定(見表1)。水的溶解氧、總堿度和總硬度由APHA 法確定(1985年)。pH 值由菲利普斯PW9418 型pH計(jì)測(cè)定。使用水銀溫度計(jì)測(cè)定水溫。48h的LC50回歸分析和相關(guān)系數(shù)使用Microsoft Excel Office 2003 進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

由所有測(cè)試生物的概率曲線確定山毛豆水提物對(duì)測(cè)試生物體的48h的LC50值。死亡率的概率值與Sprague(1970，1971)描述生物測(cè)試的濃度對(duì)數(shù)值相反。

輪蟲的線性回歸方程Y=18.29－3.84X，是由生物活性測(cè)定死亡率概率回歸分析得出的。48h的LC50為2.89 mg/L，相關(guān)系數(shù)為－0.833(P=0.0199)?？ǚ綑z驗(yàn)表明，觀察值和預(yù)測(cè)值沒有顯著性差異(P＞0.05)。各個(gè)處理重復(fù)之間也無顯著性差異，方差遠(yuǎn)小于F0.05。

對(duì)庫蚊幼蟲活性的死亡率線性回歸方程為Y=3.58 +2.35X。由方程得出48h的LC50為4.48 mg/L。相關(guān)系數(shù)為0.844(P=0.016 9)?？ǚ綑z驗(yàn)表明，觀察和預(yù)測(cè)的概率值間(P＞0.05)無顯著性差異。與方差變異率一樣，方差分析表明各處理重復(fù)濃度間也無顯著性差異，且值遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于F0.05。

苦參方劑對(duì)藍(lán)彩鳉魚的死亡率模型，其線性回歸方程為Y=1.45 +1.50X。觀察和預(yù)測(cè)值的相關(guān)系數(shù)為0.724(P=0.0659)。48h的LC50為9.232 mg/L。卡方檢驗(yàn)表明(P＞0.05)觀察和預(yù)測(cè)的概率值無顯著性差異，在各處理濃度重復(fù)間死亡率無顯著性差異，與方差率類似，均小于F0.05。

3 討論

池塘通常會(huì)有生物體，如昆蟲、兩棲類和爬行類，以及雜魚和肉食性魚類。本文中苦參方劑對(duì)魚急性毒性試驗(yàn)48h的LC50為9.232mg/L，這表明它的毒性很低。庫蚊幼蟲對(duì)苦參方劑不敏感，48h半致死濃度為4.48 mg/L，該值相對(duì)較高。這可能是由于庫蚊幼蟲呼吸的是大氣(Ukoli，1984;Segun，1989)，這減少機(jī)體吸收水提物概率的緣故。該研究中苦參方劑對(duì)水生生物的毒性比其他已研究的漁用中草藥對(duì)水生生物的毒性低。Chen等(1996年)報(bào)道了皂甙對(duì)日本小對(duì)蝦48h的LC50為2.82 mg/L。Saha和Kaviraj(1996)報(bào)道了花金雞納樹皮中單寧酸對(duì)庫蚊96h的LC50為5.5 mg/L。Onusiriuka和Ufodike(1994)報(bào)道了Blighia Sapida和Kigelia africana 樹皮提取物對(duì)非洲鯰魚96h的LC50分別為8.32 mg/L和6.92 mg/L。Beal和Anderson (1993)報(bào)道了使用魚藤酮消除池塘水體中的所有浮游動(dòng)物后，需要l～8個(gè)月的時(shí)間浮游動(dòng)物群落才恢復(fù)到應(yīng)用魚藤酮前的水平。30 d 后劍水蚤出現(xiàn)，而45 d 后輪蟲也開始重新出現(xiàn)。Calow(1992)認(rèn)為，實(shí)驗(yàn)室的條件與自然條件是有誤差的，通過引入安全系數(shù)可以修補(bǔ)該誤差，從而估計(jì)LC50將達(dá)到10。

該研究表明，苦參方劑與其他水生生物相比對(duì)魚毒性很低。應(yīng)該推廣其在天然水體中的應(yīng)用。

表1 48h暴露期測(cè)定的平均水質(zhì)參數(shù)

略)