姜坤，楊勝祥

（淮南聯(lián)合大學(xué)，安徽 淮南 232038）

井欄邊草 (Pteris multifida Poir)是鳳尾蕨科鳳尾蕨屬中的一個種，別名鳳尾草、井口邊草、鐵腳雞等。最早被唐朝陳藏品收錄于《本草拾遺》，井欄邊草分布于我國的貴州、安徽、河北、山東、江西、河南、陜西、廣東、四川、廣西、臺灣、浙江、江蘇、福建、湖南、湖北；日本、越南、菲律賓也有分布①中國植物志編輯委員會：《中國植物志》（第2版），北京:科學(xué)出版社,2006年。。近年有文獻報道山西也有發(fā)現(xiàn)②謝樹蓮：《山西蕨類植物新資料》，《西北植物學(xué)報》2007年第4期，第827頁。。井欄邊草味淡、微苦，性寒；一直在臨床用于痢疾，腸炎，肝炎，咽喉炎，泌尿系炎癥，扁桃體炎，癰瘡癤腫，風(fēng)濕和腫瘤③④余有貴等：《鳳尾草功能成分提取與抗菌效果研究》，《中國飼料》2004年第23期，第23頁。等的治療，但具體活性成分尚不完全明確。本試驗對井欄邊草乙酸乙酯及正丁醇萃取部分的化學(xué)成分進行分離及鑒定，以期為井欄邊草的進一步開發(fā)和研究提供理論依據(jù)。對井欄邊草的化學(xué)成分進行了研究，從中分離得到了9個化合物，其中化合物3，4，9是首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，購自上海亞榮生化儀器廠;Bruker AM-400Hz核磁共振儀，購自瑞士布魯克公司;Vector-22型傅立葉紅外光譜儀、UV-756型紫外可見分光光譜儀、薄層硅膠G，均購自青島海洋化工廠;X-6顯微熔點測定儀，購自北京東方德教育科技有限公司。Sephadex LH-20，購自Merck公司;柱層析硅膠(200～300目)，購自青島海洋化工有限公司;其他試劑為分析純，市售。

井欄邊草于2011年6月上旬采于安徽省淮南市八公山區(qū)丁山山坡，由淮南聯(lián)合大學(xué)化工系楊勝祥博士鑒定為Pteris multifida Poir，自然陰干，粉碎備用。標(biāo)本存于淮南聯(lián)合大學(xué)化工系藥物實驗室。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取與分離

將自然陰干的井欄邊草粉碎過40目篩，稱取10kg，用工業(yè)乙醇（重蒸）在室溫下加熱回流提取3次，每次3h，合并提取溶液，減壓濃縮得到300g墨綠色浸膏，加水懸浮后分別用乙酸乙酯和正丁醇各萃取三次，合并萃取液，減壓濃縮成浸膏，其中乙酸乙酯部分105g，正丁醇部分130g。

乙酸乙酯部分用氯仿-乙醇 (1:1)溶解，粗硅膠拌樣，揮干后用層析硅膠干法裝柱，用氯仿-乙醇（100:0～0:100(v/v)）洗脫，粗分得到 5 個組分(Fr.1～Fr.5)。 Fr.3 經(jīng)過硅膠柱層析（石油醚－丙酮）和凝膠柱層析（乙醇）得到化合物 1（13mg）和 2（15mg）；Fr.3經(jīng)過反復(fù)的硅膠柱層析（石油醚/丙酮）和凝膠柱層析（乙醇）得到化合物 3（10mg）和 4（14mg）；組分I經(jīng)過硅膠柱層析（石油醚/乙酸乙酯）和重結(jié)晶（氯仿）得到化合物 5（20mg）。

正丁醇浸膏溶解后用大孔樹脂粗分（EtOH/H2O,30:1,60:1,90:1,100:0）。 從 90:1部分獲得8g浸膏，用氯仿－乙醇（20:1,15:1,10:1,5:1,1:1(v/v)）洗脫粗分得到 4 個組 分(Fr.6～Fr.9)。 Fr.6經(jīng) RP－18 （EtOH/H2O,65:35）和 Sephadex LH－20（乙醇洗脫）得化合物 6（8 mg）和 7（6 mg）。 Fr.7 經(jīng) RP－18（EtOH/H2O,45:55）和制備 HPLC（EtOH/H2O,50:50）得化合物 8（10 mg）。 Fr.8 經(jīng) RP－18 （EtOH/H2O,40:60）和 Sephadex LH－20（乙醇洗脫）得化合物 9（12 mg）。

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

2.2.1 化合物 1： 黃色粉末， 分子式 C15H10O6，m.p.328～330℃。1H－NMR(DMSO－d6,500MHz)δ:7.20(1H,d,J=8.3Hz,H－6′),6.92(1H,d,J=8.3Hz,H－5′),6.85(1H,s,H－3),6.57(1H,s,H－2′),6.37(1H,s,H－6),6.36(1H,s,H－8).13C－NMR(DMSO－d6,125MHz)δ:164.9(s,C－2),104.1(d,C－3),182.8(s,C－4),158.6(s,C－5),100.1(d,C－6),165.9(s,C－7),94.9(d,C－8),163.3(s,C－9),105.1(s,C－10),119.7(s,C－1′),114.8(d,C－2′),147.9(s,C－3′),151.8(s,C－4′),116.9(d,C－5′),123.0(d,C－6′)。上述數(shù)據(jù)與文獻①②龔運淮,丁立生：《天然產(chǎn)物核磁共振13C－NMR碳譜分析》，昆明:云南科技出版社,2006年，第443頁。報道的木犀草素相應(yīng)數(shù)據(jù)基本一致，由此該化合物被確定為木犀草素。

2.2.2 化合物 2： 黃色粉末 （甲醇），mp〉300 ℃，鹽酸－鎂粉反應(yīng)陽性。1H NMR（400 MHz，DMSO－d6）δ：12.97（1H，s，5－OH），10.82（1H，brs，7－OH），7.93（2H，d，J=8.8 Hz，H－2′，6′），6.93 （2H，d，J=8.8 Hz，H－3′，5′），6.80（1H，s，H－3），6.49（1H，d，J=2.0 Hz，H－8），6.19 （1H，d，J=2.0 Hz，H－6）.13C NMR（100 MHz，DMSO－d6）δ:181.6（C－4）， 164.0（C－7），163.6（C－2），161.3 （C－4′），161.1 （C－5），157.2 （C－9），128.4（C－2′，6′）， 121.1（C－1′）， 115.8（C－3′，5′），103.6（C－10），102.7（C－3），98.7（C－6），93.8（C－8）。

以上波譜學(xué)數(shù)據(jù)與芹菜素的數(shù)據(jù)③陳騰飛,蕭偉,李成等：《二至丸處方提取物化學(xué)成分的研究》，《中草藥》2011年第3期，第447頁。一致。由此該化合物被確定為芹菜素。

2.2.3 化 合 物 3： 黃 色 粉 末 ；C21H20O12；1H－NMR（C5D5N，400Hz）：8.42 （1H，d，J=2.1 Hz），8.10（1H，dd，J=8.4 Hz，2.0 Hz），7.22 （1H，d，J=8.4Hz），6.67（1H，d，J=2.0Hz），6.61 （1H，d，J=2.0 Hz）， 6.04（1H，d，J=7.8Hz）， 4.79（1H，t，J=8.9Hz）， 4.58 （1H，d，J=2.2Hz），4.40 （1H，dd，J=10.8，6.2Hz），4.30（2H，m），4.15 （1H，t，J=5.9Hz），3.58 （1H，s）；13CNMR（C5D5N，125MHz）：178.9（C－4），166.0（C－7），162.7（C－5），157.8（C－9），157.6 （C－2），150.8（C－4′），146.8（C－3′），135.8（C－3），122.8（C－1′），122.3（C－6′），117.8 （C－5′）， 116.3 （C－2′），105.5 （C－10），105.2 （C－1〞），99.8 （C－6），94.6 （C－8），77.5（C－5〞）， 75.5 （C－3〞），73.4（C－2〞），69.8（C－4〞），61.9（C－6〞）。 以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致④高秀紅,劉明川,金林紅等：《黔產(chǎn)八角蓮化學(xué)成分的研究》，《時珍國醫(yī)國藥》2011年第4期，第871頁。，確定化合物3為槲皮素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖苷。

2.2.4 化合物 4：白色粉末，mp 219～221℃，(c 0.12，MeOH)。IR(KBr)v 3334(OH)，2912，1680(O=C)，1599，1440，1385，1105，1078，1034，893；1HNMR(400 MHz，DMSO－d6)：7.50(1H，s，H－4)，5.16(1H，d，J=13.0Hz，H－12b)，4.96(1H，d，J=13.0Hz，H－12a)，4.29(1H，d，J=7.7 Hz，H－1′)，3.70(1H，d，J=6.0 Hz，H－6′a)，3.50(1H，d，J=6.0 Hz，H－6′b)，3.46(2H，t，J=7.6 Hz，H－14)，3.26(1H，m，H－3a)，3.12(1H，m，H－5′)，3.11(1H，m，H－3′)，3.10(1H，m，H－4′)，3.09(1H，m，H－2′)，2.85(2H，t，J=7.5 Hz，CH2－13)，2.60(1H，m，H－2)，2.59(3H，s，Me－15)，2.58(1H，m，H－ 3b)，1.16(3H，d，J=7.1 Hz，Me－11)；13C NMR(400 MHz，DMSO－d6)：209.7(s，C－1)，152.1(s，C－9)，143.5(s，C－5)，136.7(s，C－7)，135.1(s，C－6)，132.4(s，C－8)，123.8(d，C－4)，102.3(d，C－1′)，77.0(d，C－5′)，76.7(d，C－3′)，73.6(d，C－2′)，70.1(d，C－4′)，68.1(t，C－12)，61.1(t，C－5′)，60.3(t，C－14)，42.1(d，C－2)，33.4(t，C－3)，31.2(t，C－13)，16.2(q，C－11)，13.0(q，C－15)。 以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致⑤Qin Bo,Zhu Da Yuan,Jiang Shan Hao,et al.Chemical Constituents of Pteris multifda and Their Inhibitory Effectson Growth of Rat Prostatic Epithelila Cellsinvitr,Chin J Nat Med,2006,4(6):428.，確定化合物4為Pteroside P′(1)。

2.2.5 化合物 5：黃色針晶，mp 226～228 ℃。1H NMR(400MHz,DM SO－d6)δ:6.83(1H,s,H－3)，6.44(1H,s,H－6)，6.87(1H,s,H－8)，7.96 (2H,d,J=8.8 Hz,H－2,6′)，6.94(2H,d,J=8.8 Hz,H－3,5′)，12.99(1H,s,OH－5)，5.07(1H,d,J=7.2 Hz,H－1′)，3.24－3.73(5 H,m,糖上質(zhì)子)；13C NMR(100 MHz,DM－SO－d6)δ:164.3(C－2)，103.1(C－3)，182.0(C－4)，161.2(C－5)，99.6(C－6)，162.9(C－7)，94.8(C －8)，157.0(C－9)，105.4(C－10)，121.0(C－1′)，129.8(C－2,6′)，116.0(C－3,5′)，161.4(C－4′)，99.9(C－1′)，73.1(C－2′)，76.4(C－3′)，69.6(C－4′)，77.1(C－5′)，60.6(C－ 6′)。 其數(shù)據(jù)與文獻①苗延青,陳剛,湯穎等：《甜苣的化學(xué)成分研究》，《時珍國醫(yī)國藥》2010年第9期，第2254頁。報道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物被確定為芹菜素－7－O－β－葡萄糖苷。

2.2.6 化合物 6：黃色粉末。 ESI－MS(m/z)：447[M－H]－；1H NMR(400MHz,DM SO－d6)δ:6.74(1H,s,H－3)，6.44(1H,s,H－6)，6.78(1H,s,H－8)，7.44(1H,brd,H－2′)，6.87(1H,d,J=8.4Hz,H－5′)，7.48(1H,dd,J=2,8.4 Hz,H－6′)，12.99(1H,s,O H－5)，5.08(1H,d,J=8 Hz,H－1′)，3.17－ 3.73(5H,m,糖上質(zhì)子)13C NMR(100MHz,DM SO－d6)δ:164.5(C－2)，103.0 (C－3)，181.8(C－4)，161.1(C－5)，99.5(C－6)，162.9(C－7)， 94.7(C－ 8)，156.9(－9)，105.3(C－10)，121.0(C－1′)，113.3(C－2′)，145.7(C－3′)，150.4(C－4′)， 115.9(C－5′)，119.2(C－6′)，99.9(C －1′)，73.1(C－2′)，76.4(C－3′)，69.6(C－4′)，77.1(C－5′)，60.6(C－6′)。 上述數(shù)據(jù)與文獻②馬俊利,李春鋼,張博男等：《甜蕎麥花葉化學(xué)成分研究》，《中國實驗方劑學(xué)雜志》2010年第13期，第94頁。報道一致，由此該化合物結(jié)構(gòu)被確定木犀草素－7－O－β－葡萄糖苷。

2.2.7 化合物 7：白色針晶(MeOH)，分子式 C29H50O，mp.122～124℃，：3402(－OH)，2921，2821，1451(cyclopentane)，1368，1630，948；1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ：0.62(3H，s，Me－18)，0.79(6H，d，J=7.2 Hz，Me－26&27)，0.80(3H，d，J=7.0 Hz，Me－21)，0.95(3H，d，J=6.1 Hz，Me－29)，1.06(3H，m，Me－19)，1.25(1H， m，J=8.2 Hz，H－25)，1.25(1H，q，J=7.2 Hz，H－20)，3.55(H，m，H－3)，5.30(1H，b rs，H－4)，2.95(1H，s，HO－3)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ：37.4(C－1，d)，31.8(C－2，d)，70.8(C－3)，121.9(C－4，d)，138.8(C－5，t)，42.9(C－6，t)，30.8(C－7，t)，31.6(C－8，q)， 50.1(C－9，t)，36.2(C－10，t)，21.6(C－11，d)，28.1(C－12，q)，42.7(C－13， q，)，56.1(C－14，t)，23.9(C－15，t)，39.2(C－16，t)，56.0(C－17，q)，11.4(C－18，s)，19.2(C－19，s)，36.9(C－20，d)，18.6(C－21，s)，33.5(C －22，t)，25.8(C －23，t)，45.2(C －24，t)，29.5(C－25，d)，19.0(C－26， s)，18.6(C－27，s)，22.9(C－28，t)，12.0(C－29，s)。上述數(shù)據(jù)與文獻報道一致③于東防,胡邦豪,沙懷等：《扶?；ㄖ蟹錾３龃嫉姆蛛x和結(jié)構(gòu)測定》，《中草藥》1991年第1期，第3頁。，確定化合物 7為扶桑甾醇(β－rosaterol)。

2.2.8 化合物 8：白色針晶，M.P：140～142℃。 由于該化合物從極性較小的部分分離得來，因此，有可能為甾醇類化合物，對該化合物的鑒定首先將其與實驗室β－谷甾醇的標(biāo)準(zhǔn)品進行TLC檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)二者完全一樣，經(jīng)過進一步的熔點測定，熔點與文獻④左文健,陳惠琴,李曉東等：《苦丁茶葉的化學(xué)成分研究》，《中草藥》2011年第1期，第18－20頁。值基本一致，故化合物8鑒定為β－谷甾醇。

2.2.9 化合物 9：無色針晶(CHCl3)，0.15，CHCl3)，mp.199～201℃ ；(cm－1)：3420(－OH)，3236，2831，1650 (〉C=O)，1608，1516，1470，1349；1HNMR(CD3COCD3，400 MHz) δ：5.73(1H，dd，J=13.0，3.0 Hz，H－2)，3.08(2H，dd，J=l1.2，3.0 Hz，H－3)，6.15(1H，d，J=2.3 Hz，H－6)，6.04(1H，d，J=2.3 Hz，H－8)，8.64(1H，s，HO－2′)，7.01(1H，dd， J=7.5，2.0 Hz，H－3′)，7.14(1H，ddd，J=7.5，7.5，2.0 Hz，H－4′)，6.91(1H，ddd，J=7.5， 7.5，2.0 Hz，H－5′)，7.64(1H，dd，J=7.5，2.0 Hz，H－6′)，12.10(1H，s，HO－5)， 3.65(3H，s，MeO－7).l3C NMR(CD3COCD3，100 MHz)δ：75.9(C－2，CH)，42.1(C－3，CH2)，196.1(C－4，C)，164.7(C－5，C)，92.5(C－6，CH)，164.2(C－7，C)，92.1(C－8，CH)，164.1(C－9，C)，104.4(C－10，C)，l24.2(C－l′，C)，l54.6(C－2′，C)，ll5.8(C－3′，CH)，129.8(C－4′，CH)，120.3(C－5′，CH)，128.9(C－6′，CH)，56.5(MeO－7，CH3)。上述數(shù)據(jù)與文獻報道一致⑤黎路,秦民堅：《華夏鳶尾的化學(xué)成分研究》，《中國藥科大學(xué)學(xué)報》2005年第2期，第111頁。，確定化合物 9為Dihydroechioidinin(4)。

3 討論

井欄邊草醇提物化學(xué)成分復(fù)雜，種類繁多，主要以黃酮類極性化合物為主。試驗從井欄邊草醇提物中分離得到9個單體化合物：木犀草素（1）、芹菜素（2）、 槲皮素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖苷（3）、Pteroside P′（4）、芹菜素－7－O－β－葡萄糖苷（5）、木犀草素－7－O－β－葡萄糖苷（6）、扶桑甾醇（7）、β－谷甾醇（8）、Dihydroechioidinin（9）。 其中，化合物 3，4，9 是首次從該植物中分離得到，為井欄邊草資源的開發(fā)利用提供了一定的理論參考。