樊 云 張曉明 吳 淼 陳邦國

（1.湖北中醫(yī)藥大學針灸骨傷學院，湖北 武漢 430061；2.湖北省中醫(yī)院，湖北 武漢 430061）

電針對局灶性腦缺血再灌注大鼠血清白蛋白水平影響的實驗研究*

樊 云1張曉明1吳 淼2陳邦國1

（1.湖北中醫(yī)藥大學針灸骨傷學院，湖北 武漢 430061；2.湖北省中醫(yī)院，湖北 武漢 430061）

目的 觀察腦缺血/再灌注后，電針百會、水溝、足三里穴對局灶性腦缺血再灌注大鼠外周血清白蛋白濃度水平的影響。方法 采用改良線栓大鼠大腦中動脈法制作局灶性腦缺血再灌注模型，運用溴甲酚氯法，觀察腦缺血/再灌注后大鼠外周血清白蛋白水平變化。結果 正常對照組大鼠血清白蛋白水平穩(wěn)定；與正常對照組比較，假手術組大鼠血清白蛋白水平除在缺血/再灌注24 h時間點有輕度下降外，其余時間段無明顯變化，與正常對照組十分接近；模型組和電針組大鼠血清白蛋白水平在整個觀察時間窗內都呈現(xiàn)明顯下降趨勢，特別是模型組大鼠血清白蛋白水平，在各個時間點與正常對照組和假手術組比較，均具有非常顯著差異；電針組大鼠血清白蛋白水平與模型組比較，在各個時間點均具有顯著差異；電針組大鼠血清白蛋白水平在各個時間點與正常對照組、假手術組比較，均有明顯差異。結論 腦缺血再灌注后電針內源性提高實驗動物鼠血清白蛋白水平的能力十分有限，不足以抵消其明顯的下降趨勢。

電針 腦缺血再灌注 血清白蛋白

臨床研究［1-3］顯示缺血性腦損傷發(fā)生后，患者血清白蛋白含量立即明顯下降，而血清白蛋白水平與臨床預后成負性相關。有實驗研究［4］發(fā)現(xiàn)局灶性腦缺血后大鼠血清白蛋白濃度水平的維持能夠明顯改善中動脈缺血大鼠的神經功能評分。電針能激活機體多種內在的保護機制，形成內源性補充。筆者決定采用改良線栓法建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，電針百會、水溝、足三里穴，觀察其對局灶性腦缺血再灌注大鼠血清白蛋白濃度水平的影響，試圖從血清白蛋白角度去探討電針治療大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的機制機理。

1 材料與方法

1.1 動物雄性清潔級健康SD大鼠，2～3月齡，體質量 180～220 g，合格證書編號：SCXK（鄂）2010-0007，購自華中科技大學同濟醫(yī)學院實驗動物中心。

1.2 試劑與儀器日本東芝 （TOSHIBA）TBA-120RF型全自動血生化分析儀；HANS-200A型韓式穴位神經刺激儀 （南京濟生醫(yī)療科技有限公司）；932型電熱燒灼器（上海醫(yī)療電子儀器廠）；BS110S型Sartorius分析天平（北京賽多利斯天平有限公司）；華佗牌針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠，32 號，0.5 寸，13 mm）；2.0～2.5 號單尼龍魚線 （東陽市阿里郎釣具廠）；1000 mL裝白蛋白檢測試劑（日本第一化學藥品株式會社）

1.3 模型制備實驗大鼠飼養(yǎng)在專門動物室，室溫穩(wěn)定控制在20～25℃，相對濕度40%～60%，12 h明暗循環(huán)，動物食用普通飼料和自由飲水，適應性喂養(yǎng)1周。參照文獻中 Zea longa［5］報道的線栓法，稍作改進，制備大鼠MCAO缺血再灌注模型。動物模型參考Zea longa 5級評分標準評分。0分：無任何神經缺損癥狀；1分：左側前肢不能完全伸展，為輕度神經功能缺損；2分：無法直行，向前行走時身體不斷向左側轉圈，為中度神經功能缺損；3分：不能站立，站立時向左側傾倒，為重度神經功能缺損；4分：不能自發(fā)行走，意識喪失。造模失敗，舍棄實驗動物的標準：無明顯神經功能缺損表現(xiàn)或Zea-longa評分低于1分；手術時出血較多、呼吸困難、癥狀很重不能堅持實驗的動物；傷口大量出血、蛛網膜下腔出血、大腦中動脈起始部或其附近的Willis環(huán)動脈有凝血塊的大鼠；未能存活到規(guī)定時間點而死亡的大鼠。死亡大鼠通過隨機原則補齊動物數(shù)并重新造模。

1.4 動物分組84只SD大鼠按照數(shù)字表隨機分為4組，分別為正常對照組12只（不予處理，正常飼養(yǎng)）；假手術組12只 （僅分離頸總動脈及頸內動脈至翼腭動脈，不插線栓）；模型組30只（改良線栓法制備局灶性腦缺血再灌注模型，按照缺血/再灌注24、48、72 h又分為3個亞組，每亞組10只）；電針組30只（改良線栓法制備局灶性腦缺血再灌注模型，按照缺血/再灌注24、48、72 h又分為3個亞組，每亞組10只，加電針治療）。

1.5 電針治療電針組大鼠穿自制鼠衣固定，使用HANS-200A型韓式穴位神經剌激儀，采用疏密波（頻率2 Hz/15 Hz），電流強度約1 mA，以引起局部肌肉稍稍顫動為度，刺激百會、水溝及足三里穴，每次持續(xù)刺激30 min，缺血再灌注2 h后行第1次電針刺激，每隔12小時再電針刺激1次。取穴標準及針刺深度根據新世紀全國高等中醫(yī)藥院校規(guī)劃教材《實驗針灸學》大鼠針灸穴位定位方法及擬人比照法定位［6］，百會取穴在頂骨正中，平刺2 mm；水溝取穴在唇裂正中、鼻尖下1 mm處，向上斜刺2 mm；足三里取穴在后肢膝關節(jié)外下方當腓骨小頭下約5 mm處，直刺7 mm。假手術組和模型組大鼠不做針刺治療，但以同樣的方式抓取和固定。正常對照組不做任何處理。

1.6 標本采集與檢測在不同時間點 （缺血/再灌注24、48、72 h），剪去大鼠眼眶周圍較長的毛，眼眶及周圍用碘伏消毒后，摘除眼球，直接眶動靜脈取血。將用肝素鈉處理過的毛細玻璃試管管口置于大鼠動靜脈血滴出的正下方2～3 cm處并傾斜45°，接住流出的新鮮血液1～2 mL。把裝有血液標本的試管放入離心機中以4000 r/min轉速離心10 min，小心取出試管后，將位于試管上層的血清用吸管慢慢吸出，裝入ependorf管中密封，保存在-20℃冰箱中。以溴甲酚氯法檢測血清白蛋白。

1.7 統(tǒng)計學處理應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，組內比較采用t檢驗，組間比較采用One-Way ANOVA分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

見表1。結果示正常對照組大鼠血清白蛋白水平穩(wěn)定。與正常對照組比較，假手術組大鼠血清白蛋白水平除在I/R 24 h時間點有輕度下降（P＞0.05）外，其余時間段無明顯變化，與正常對照組十分接近，考慮可能是輕度應激反應所致。模型組和電針組大鼠血清白蛋白水平在整個觀察時間窗內都呈現(xiàn)明顯下降趨勢，可能表明體內白蛋白分解消耗或合成障礙明顯。特別是模型組大鼠血清白蛋白水平，在各個時間點與正常對照組和假手術組比較，均有明顯差異（P＜0.01）。電針組大鼠血清白蛋白水平與模型組比較，在各個時間點差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），表明電針可以一定程度內源性提高缺血再灌注后實驗動物血清白蛋白水平。電針組大鼠血清白蛋白水平在各個時間點與正常對照組、假手術組比較，均有明顯差異（P＜0.05），表示電針內源性提高缺血再灌注后實驗動物血清白蛋白水平作用十分有限，不足以抵消其明顯的下降趨勢。由于受到本實驗設定觀察時間窗的限制，缺血再灌注后更長時間內實驗大鼠血清白蛋白水平變化的情況未能監(jiān)測。

3 討 論

表1 各組大鼠外周血白蛋白水平比較（g/L，±s）

表1 各組大鼠外周血白蛋白水平比較（g/L，±s）

與模型組同時間段比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與正常對照組比較，▲P＜0.01。

組 別 n I/R 72 h I/R 24 h I/R 48 h正常對照組 4 23.06±0.28假手術組 4 22.45±0.42模型組 10 13.00±0.75▲23.00±0.13 23.14±0.34 21.85±0.31 22.33±0.26 18.62±0.52▲ 16.00±0.17▲電針組 10 17.40±0.12△△▲20.00±0.16△▲ 18.90±0.83△△▲

腦血管?。ㄌ貏e是急性腦血管?。┌l(fā)生后，必然引起炎癥反應。導致低白蛋白血癥［7］。 文獻［8］報道，白蛋白＜40 g/L的患者血清白介素-6濃度顯著高于白蛋＞40 g/L的患者。另外，腦血管病（特別是急性腦血管?。┑陌l(fā)生作為機體的重大應激，也對血清白蛋白水平下降起到了巨大的作用［9］。應激所引起的神經內分泌反應導致交感神經興奮，使得機體代謝率增高，增強了對糖異生和脂肪酸代謝供能的依賴性。缺血性腦卒中患者血清白蛋白降低的原因還可能與腎微小血管慢性病理變化導致的隱匿性蛋白尿和微小蛋白尿有關［10］。

在缺血性腦卒中實際治療中，臨床醫(yī)師習慣性大劑量補充外源性白蛋白。但要注意的是，輸入大量外源性白蛋白，不僅會有進一步加重腦組織水腫的風險［11］，還增加了腦代謝負荷［12］。 近年有文獻報道［13］即便使用常規(guī)劑量白蛋白也可有效減輕腦血腫周圍的水腫，促進中樞神經功能的恢復，這很值得關注。也有證據表明［14］，在急性缺血性腦卒中臨床處置中作為液體治療，HAS和晶體鹽溶液相比并無明顯益處。

有學者［15］發(fā)現(xiàn)中醫(yī)虛證的發(fā)生可能與血清白蛋白降低有關。還有學者［16］研究認為血清白蛋白降低可能相當于中醫(yī)的血虛、肝陰不足，或者廣義正氣虛。而血虛、肝陰不足或正氣虛都是缺血性腦卒中的重要發(fā)病原因。

綜上所述，雖然本實驗的結果顯示，腦缺血再灌注后電針內源性提高機體血清白蛋白水平的能力十分有限，但是，電針是否能與中醫(yī)藥的其他療法配合使用，努力提高腦缺血再灌注后血清白蛋白水平以達到一定的治療作用。以上問題有待進一步深入研究。

［1］Finestone M，Green-Finestone S.Prolonged length of stay and reduced functional improvement rate in malnourished stroke rehabilitation patients［J］.Arch Phys Med Rehabil，1996，77（6）：340-343.

［2］楊朝暉，李潔明，段代鄴.血清白蛋白水平對急性期腦血管意外患者運動功能恢復的影響［J］.中國康復醫(yī)學雜志，1998，13（3）：116-119.

［3］Vincent JL，Dubois MJ，NaVickis RJ，et al.Hypoalbu-minemia in acute illness：is there a rationale for intervention a metaanalysis of cohort studies and Controlled trials［J］.Ann Surg，2003，237（3）：319.

［4］馮虹.白蛋白治療對腦缺血海馬和皮層VEGF、flt-1的影響［D］.天津：天津醫(yī)科大學，2009.

［5］Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats［J］.Stroke，1989，20：84-91.

［6］李忠仁.實驗針灸學［M］.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2003：327-329.

［7］鄧次妮，沈潞華.急性心肌梗死患者白蛋白水平的變化及其意義的臨床研究［J］.北京醫(yī)學，2006，28（6）：331-333.

［8］姚英，劉惠蘭.血液透析患者血清白蛋白水平與系統(tǒng)炎癥反應的相互關系［J］.中國血液凈化，2004，3（1）：18.

［9］陳浩，田恒力，胡錦，等.腦外傷急性期血清前白蛋白與視黃醇結合蛋白的測定及臨床意義［J］.上海醫(yī)學，2008，31（7）：481-482.

［10］劉慧華，王軍.腦梗塞患者頸動脈粥樣硬化與尿微量白蛋白關系的研究［J］.中國現(xiàn)代藥物應用，2009，3（18）：19-21.

［11］Quinlan GJ，Martin GS，Evans TW.Albumin：biochemical properties and therapeutic potential［J］.Hepatology，2005，41（6）：1211-1219.

［12］曹偉新.白蛋白與營養(yǎng)支持的關系［J］.外科理論與實踐，2008， 13（5）：399-401.

［13］禹愛梅.白蛋白治療急性腦出血的療效分析［J］.河北北方學院學報：醫(yī)學版，2006，23（5）：262-271.

［14］劉芳，翟所迪，田榮萍.臨床應用人血白蛋白的循證醫(yī)學評價［J］.中國藥學雜志，2007，42（6）：478-480.

［15］梁騰霄，劉清泉，江其敏.血清白蛋白水平與危重病患者預后及中醫(yī)虛實證候相關性的研究［J］.中國中醫(yī)急癥，2006，15（7）：747-748.

［16］何家衛(wèi)，何家紅.白蛋白、球蛋白比例倒置的中醫(yī)辨證治療［J］.中國鄉(xiāng)村醫(yī)藥雜志，2002，9（3）：11.

chemia-reperfusion

FAN Yun1，ZHANG Xiao-ming1，WU Miao2，et al. 1 Acupuncture and Bone Injury College，Hubei University of Chinese Medicine，Hubei，Wuhan 430061，China；2 Hubei Provincial Hopsital of TCM，Hubei，Wuhan 430061，China

Objective：To observe the change of serum albumin level in MCAO rat′s bloods by electro-acupuncture the points including Baihui（DU20），Shuigou（DU26），Zusanli（ST36） after cerebral ischemia/reperfusion（I/R）.Methods:The MCAO rat′s model was modified suture the brain artery.These changes were determined in serum albumin through BCG by Electro-acupuncture the pionts.Results：The level of serum albumin of normal control group were stability.Compared with the normal control group，the level of serum albumin of sham group rat was almost unchanged except the slight decrease in I/R24 h which was no significant difference.The level of serum albumin of model group and EA group showed a clear downward trend with particularly significant difference，in particular the model group compared with normal control group and sham group during the entire observation period.The level of serum albumin of EA group rat compared with model group showed remarakble differences.But the level of serum albumin of of EA group rat compared with normal control group and sham-operation group showed no differences.Conclusion：It is limited and insufficient to offset the declining trend that cerebral ischemia reperfusion and electro-acupuncture of endogenous improve the ability of serum albumin level of animal experiment.

Electro-acupuncture；Cerebral ischemia/reperfusion；Serum albumin

R245.9+7

A

1004-745X（2013）06-0872-03

教育部高等學校博士學科點專項科研基金（200805070002）

Experiment on Effects of Electroacupuncture on Serum Albumin Level in Rats with Focal Cerebral Is-

2013-03-01）