蔣銀屏 王志躍 周春江 楊海明

(揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，揚(yáng)州 225009)

家禽飼糧中氨基酸消化率的測(cè)定方法很多，目前普遍采用體內(nèi)消化率試驗(yàn)法。Sibbald的真代謝能法是目前測(cè)定家禽飼糧氨基酸消化率的主要方法。測(cè)定過(guò)程中家禽是否去盲腸以及內(nèi)源性氨基酸測(cè)定方法的不同會(huì)影響測(cè)定結(jié)果的可靠性。隨著動(dòng)物氨基酸營(yíng)養(yǎng)研究越來(lái)越深入，國(guó)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)內(nèi)源矯正的飼糧可消化氨基酸比總氨基酸和表觀可消化氨基酸具有更好的可加性和重復(fù)性［1－2］。家禽采用可消化氨基酸營(yíng)養(yǎng)體系是必然趨勢(shì)。對(duì)于氨基酸表觀消化率和氨基酸真消化率，內(nèi)源性氨基酸的準(zhǔn)確估計(jì)是測(cè)定飼糧氨基酸消化率的關(guān)鍵。內(nèi)源性氨基酸的損失是動(dòng)物生長(zhǎng)過(guò)程中不可避免的，研究表明，一定條件下，同種動(dòng)物有一相對(duì)穩(wěn)定的內(nèi)源性氨基酸基本排泄量［3－4］。目前測(cè)定鵝內(nèi)源性氨基酸排泄量的方法主要有:無(wú)氮飼糧法、饑餓法、回歸法、肌基蛋白質(zhì)法、同位素示蹤法、一次注射法和無(wú)氮飼糧+假定可100%吸收氮源法等。其中，最常用的方法是無(wú)氮飼糧法和饑餓法。根據(jù)這2種不同的方法，不同學(xué)者在不同的家禽上得出不同的結(jié)論。國(guó)外學(xué)者得出的結(jié)論表明，2種方法測(cè)定的內(nèi)源性氨基酸排泄量差異不顯著［5－6］;而國(guó)內(nèi)的學(xué)者得出用無(wú)氮飼糧法測(cè)定的內(nèi)源性氨基酸排泄量顯著高于饑餓法的結(jié)論［7－8］。另外，對(duì)于是否應(yīng)該將盲腸切除，有些研究者認(rèn)為盲腸切除后，試驗(yàn)禽處于一種非正常生理狀態(tài)，所以主張不切除盲腸。但是由于禽類盲腸內(nèi)棲居著大量微生物，為減少盲腸內(nèi)微生物對(duì)氨基酸消化率的干擾，提出了測(cè)定飼糧氨基酸消化率時(shí)應(yīng)切除盲腸的觀點(diǎn)［9－10］。因此，為了使可消化氨基酸營(yíng)養(yǎng)體系盡早為我國(guó)家禽飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)所采用，本試驗(yàn)旨在通過(guò)無(wú)氮飼糧法和饑餓法測(cè)定正常鵝與去盲腸鵝內(nèi)源性氨基酸排泄量，就2種方法測(cè)定值的差異作一比較，為合理配制鵝飼糧提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼糧

試驗(yàn)飼糧為無(wú)氮飼糧，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the experimental diet(air-dry basis) %

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

選擇體況良好、體重基本一致的成年揚(yáng)州鵝公鵝12只，隨機(jī)分成2組，飼養(yǎng)于不銹鋼代謝籠中，每籠1只。其中1組已施行盲腸切除手術(shù)，術(shù)后恢復(fù)4周，且恢復(fù)良好。試驗(yàn)前2周驅(qū)蟲(chóng)，每2天環(huán)境消毒1次。

試驗(yàn)分2期，分別用無(wú)氮飼糧法與饑餓法測(cè)定內(nèi)源性氨基酸排泄量，第1期試驗(yàn)結(jié)束后，試驗(yàn)鵝休整9 d，試驗(yàn)前與試驗(yàn)結(jié)束后將每只鵝的體重都進(jìn)行稱量并記錄，當(dāng)體重達(dá)到試驗(yàn)前水平即可進(jìn)行第2期試驗(yàn)。

代謝試驗(yàn)采用24 h禁食+24 h全收糞法。無(wú)氮飼糧法是在正式試驗(yàn)前，試驗(yàn)鵝禁食24 h，自由飲水。隨后，每只鵝用漏斗與PVC管做成的強(qiáng)飼器強(qiáng)飼無(wú)氮飼糧60 g/只，收集24 h內(nèi)試驗(yàn)鵝的排泄物，期間正常供水。饑餓法是在試驗(yàn)鵝禁食24 h之后，繼續(xù)禁食24 h，收取后24 h的排泄物，期間試驗(yàn)鵝正常飲水。收集好的排泄物置于直徑20 cm玻璃皿中，60℃鼓風(fēng)干燥至恒重，自然狀態(tài)下回潮24 h后稱重，粉碎，裝入樣品袋密封后，于－20℃保存，待測(cè)。

1.3 樣品分析

風(fēng)干糞樣經(jīng)過(guò)酸水解初處理后，采用PITC柱前衍生高效液相色譜法(日本島津LC－15C高效液相色譜儀)測(cè)定氨基酸(不包括色氨酸)含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用 Excel 2007進(jìn)行整理，SPSS 13.0軟件one-way ANOVA程序進(jìn)行方差分析和t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 無(wú)氮飼糧法與饑餓法對(duì)正常鵝與去盲腸鵝24 h內(nèi)源物排泄量的影響

從表2可以看出，無(wú)氮飼糧法測(cè)得的內(nèi)源物排泄量去盲腸組高于正常組(P＞0.05)，饑餓法測(cè)得的內(nèi)源物排泄量去盲腸組略低于正常組(P＞0.05);2種測(cè)定方法測(cè)得的內(nèi)源物排泄量，無(wú)論是在正常組間還是去盲腸組間，差異均不顯著(P＞0.05)。

2.2 無(wú)氮飼糧法與饑餓法測(cè)定正常鵝與去盲腸鵝24 h內(nèi)源性氨基酸排泄量

從表3可以看出，同一測(cè)定方法的組間比較，饑餓法測(cè)定內(nèi)源性氨基酸排泄量時(shí)，除天冬氨酸和纈氨酸在正常組和去盲腸組間差異顯著(P＜0.05)外，其他各氨基酸組間差異均不顯著(P＞0.05)。無(wú)氮飼糧法測(cè)定內(nèi)源性氨基酸排泄量時(shí)，正常組的精氨酸極顯著低于去盲腸組(P＜0.01)，絲氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸顯著高于去盲腸組(P＜0.05)，其他氨基酸組間差異不顯著(P＞0.05)。

饑餓法與無(wú)氮飼糧法之間的比較，在正常組，無(wú)氮飼糧法測(cè)定的內(nèi)源性氨基酸排泄量中，除組氨酸(P＞0.05)外，其他氨基酸均極顯著高于饑餓法(P＜0.01)。在去盲腸組，無(wú)氮飼糧法測(cè)得的內(nèi)源性氨基酸排泄量中，除胱氨酸(P＞0.05)外，其他氨基酸均極顯著高于饑餓法(P＜0.01)。

表2 無(wú)氮飼糧法與饑餓法測(cè)定正常鵝與去盲腸鵝24 h內(nèi)源物排泄量的比較Table 2 Comparison of the amount of endogenous excreta in 24 h in intact and caecectomized geese determined by nitrogen-free diet method and fasting method g/bird

表3 無(wú)氮飼糧法與饑餓法測(cè)定正常鵝與去盲腸鵝24 h內(nèi)源性氨基酸排泄量Table 3 Endogenous amino acid losses in 24 h in intact and caecectomized geese determined by nitrogen-free diet method and fasting method mg/bird

3 討論

3.1 無(wú)氮飼糧法與饑餓法測(cè)定正常鵝與去盲腸鵝內(nèi)源性氨基酸排泄量的比較

無(wú)氮飼糧法與饑餓法較其他測(cè)定家禽內(nèi)源性氨基酸排泄量的方法有明顯的優(yōu)勢(shì):操作簡(jiǎn)單、成本較低，目前仍是測(cè)定家禽內(nèi)源性氨基酸排泄量的經(jīng)典和常用方法。但是關(guān)于這2種方法的報(bào)道并不一致。Likuski等［5］報(bào)道，采食玉米淀粉的無(wú)氮飼糧法和饑餓法，公雞內(nèi)源性氨基酸排泄量無(wú)顯著差異;Sibbald［11］也得出相似結(jié)論，認(rèn)為2種方法都可用于飼糧真氨基酸消化率的測(cè)定;Green等［6］研究了公雞對(duì)玉米、小麥、大麥中氨基酸的消化率，無(wú)氮飼糧法測(cè)得的原料中氨基酸的表觀利用率和真利用率在去盲腸組和正常組之間差異不顯著。李峰娟等［12］發(fā)現(xiàn)，無(wú)氮飼糧法和饑餓法測(cè)定的多種內(nèi)源性氨基酸排泄量存在顯著或極顯著差異，無(wú)氮飼糧法測(cè)定的內(nèi)源性氨基酸排泄量顯著高于饑餓法，試驗(yàn)結(jié)果與望丕縣等［13］、Parsons［14］、秦學(xué)忠等［15］研究結(jié)果相似。

Ravindran等［16］研究表明，無(wú)氮飼糧法測(cè)定內(nèi)源性氨基酸排泄量具有一定優(yōu)勢(shì)。首先，饑餓法測(cè)定時(shí)，由于試驗(yàn)動(dòng)物缺乏食物，加重了消化道及胃黏膜表層的脫落，加上試驗(yàn)動(dòng)物在饑餓過(guò)程中內(nèi)分泌重吸收增加，低估了內(nèi)源性氨基酸的損失量。其次，無(wú)氮飼糧提供一定采食量并含有纖維素，纖維素具有很強(qiáng)的持水能力，強(qiáng)飼后試驗(yàn)動(dòng)物飲水就會(huì)增加，這可以加快飼糧通過(guò)腸道，從而降低養(yǎng)分的消化、吸收;另一方面纖維素能包裹住氨基酸及肽，進(jìn)而阻止了氨基酸的重吸收［17］。纖維素還有一定的摩擦作用，增加腸壁細(xì)胞的脫落和消化酶的分泌，從而使試驗(yàn)動(dòng)物的內(nèi)源性氨基酸排泄量增加。另外，纖維素和無(wú)氮飼糧提供的碳水化合物能一起促進(jìn)細(xì)菌氨基酸的合成［18］。因此，試驗(yàn)動(dòng)物采食無(wú)氮飼糧后，內(nèi)源性氨基酸排泄量加大。

在本試驗(yàn)中，無(wú)論去盲腸與否，饑餓法得到的所有內(nèi)源性氨基酸排泄量都小于無(wú)氮飼糧法。本試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)于鵝來(lái)說(shuō)，饑餓法比較好，這是由于以下3點(diǎn)原因:1)本試驗(yàn)中無(wú)氮飼糧法測(cè)定的內(nèi)源性氨基酸排泄量測(cè)值標(biāo)準(zhǔn)差較大，這說(shuō)明使用無(wú)氮飼糧法時(shí)，試驗(yàn)鵝個(gè)體間內(nèi)源性氨基酸排泄量測(cè)值變異較大。2)無(wú)氮飼糧法測(cè)得的內(nèi)源性氨基酸的排泄量受飼糧中纖維類型、纖維結(jié)構(gòu)、纖維水平等諸多因素的影響。3)無(wú)氮飼糧配方使用的原料因?yàn)楹繕O低，被認(rèn)為“無(wú)氮”，并非絕對(duì)不含氮，檢測(cè)無(wú)氮飼糧會(huì)發(fā)現(xiàn)其中有不到0.01%的粗蛋白質(zhì)，但這些微量蛋白質(zhì)很可能并未被機(jī)體吸收而全部進(jìn)入排泄物中成為測(cè)定的內(nèi)源性氨基酸的組成。所以，采食無(wú)氮飼糧后，機(jī)體內(nèi)源性氨基酸損失加大，測(cè)定結(jié)果較高。

本試驗(yàn)結(jié)果與史永軍［19］試驗(yàn)結(jié)果不完全相同，除了試驗(yàn)鵝年齡、環(huán)境等因素外，最重要的一點(diǎn)在于無(wú)氮飼糧配方中，史永軍［19］使用的纖維源為纖維素粉，本試驗(yàn)使用了羧甲基纖維素鈉，纖維的結(jié)構(gòu)不完全相同，所以導(dǎo)致了試驗(yàn)結(jié)果的差異。

3.2 鵝盲腸的作用及盲腸切除對(duì)內(nèi)源性氨基酸排泄量的影響

禽盲腸在物質(zhì)代謝中有一定的作用。每克禽類盲腸食糜中大約有1011個(gè)專性厭氧菌［20］，這些微生物能夠?qū)M(jìn)入盲腸或大腸中的氨基酸或非蛋白氮等含氮類物質(zhì)進(jìn)行分解和合成作用［21］，改變食糜中氨基酸的組成［22］。進(jìn)入后段腸道中的食糜有相當(dāng)數(shù)量的未被消化的氨基酸被盲腸中的微生物利用［23］，影響了氨基酸消化率測(cè)定值［6，24］。這也是在本試驗(yàn)中有部分氨基酸在正常組和去盲腸組間表現(xiàn)出了顯著性差異的原因之一。

4 結(jié)論

① 采用饑餓法時(shí)，除絲氨酸、精氨酸、胱氨酸、脯氨酸外，其他內(nèi)源性氨基酸排泄量去盲腸組低于正常組;采用無(wú)氮飼糧法時(shí)，除天冬氨酸、組氨酸、精氨酸、脯氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、蛋氨酸和異亮氨酸外，正常組內(nèi)源性氨基酸排泄量高于去盲腸組。

②采用饑餓法和無(wú)氮飼糧法測(cè)定鵝內(nèi)源性氨基酸排泄量時(shí)，除了組氨酸與胱氨酸，其余氨基酸的內(nèi)源性排泄量在2種方法間差異極顯著，饑餓法測(cè)定的多數(shù)內(nèi)源性氨基酸排泄量低于無(wú)氮飼糧法。

［1］ JONDREVILLE C，VAN DEN B，HODGKINSON S M，et al.The effect of dietary peptide concentration on endogenous ileal amino acids loss in the growing pigs［J］.British Journal of Nutrition，2000，83:421 －461.

［2］ LEMME A，RAVINDRAN V，BRYDEN W L.Ileal digestibility of amino acids in feed ingredient for broilers［J］.World Poultry Science Journal，2004，60:421－435.

［3］ 姚軍虎，王康寧，楊鳳，等.肉仔雞內(nèi)源氨基酸基本損失量測(cè)定方法的比較研究［J］.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2000，12(4):23 －27.

［4］ PEDERSEN C，BOISEN S.Estabolishment of tabulated values for standardized ileal digestibility of crude protein and essential amino acid in common feedstuffs for pigs［J］.Acta Agriculturae Scandinavica Section，2002，52:121 －140.

［5］ LIKUSKI H J，DORRELL H G.A bioassay for rapid determination of amino acids availability values［J］.Poultry Science，1978，57:1658 －1660.

［6］ GREEN S，BERTRAND S L，DURON M J C，et al.Digestibilities of amino acids in maize，wheat and barey meals，determined with intact and caecectomised cockerels［J］.British Poultry Science，1987，28:631 －641.

［7］ 翟少偉，曹平華.兩種常用方法測(cè)定雞內(nèi)源氨基酸損失量的比較研究［J］.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2003(2):10－13.

［8］ 黎觀紅，翟明仁，朱年華，等.泰和雞內(nèi)源氨基酸排泄量的研究［J］.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2002，14(1):42－44.

［9］ PARSONS C M.Effects of dietary carbohydrates and of intestinal mincroflora on excretion of endogenous amino acids by poultry［J］.Poultry Science，1983，62:483－498.

［10］ 任鵬，杜榮，張宏福.正常及去盲腸雞對(duì)四種蛋白質(zhì)飼料氨基酸利用率的研究［J］.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，1997，9(l):27 －34.

［11］ SIBBALD I R.Bioavailable amino acids and true metabolizable energy of cereal grains［J］.Poultry Science，1979，58:934 －939.

［12］ 李峰娟，田冬冬，高樹(shù)華，等.無(wú)氮日糧法與饑餓法測(cè)定肉仔雞內(nèi)源氨基酸損失量的研究［J］.中國(guó)家禽，2011，33(11):22 －25.

［13］ 望丕縣，熊軍，楊濛，等.測(cè)定雞代謝氨基酸加內(nèi)源氨基酸排出量方法的比較［J］.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1991，10(1):77 －80.

［14］ PARSONS C M.Effects of dietary carbohydrates and of intestinal mincroflora on excretion of endogenous amino acids by poultry［J］.Poultry Science，1983，62:483－498.

［15］ 秦學(xué)忠，王和民.營(yíng)養(yǎng)因素對(duì)真代謝能法測(cè)定氨基酸利用率的影響［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，1988，19(3):155－160.

［16］ RAVINDRAN V，HEW L I，RAVINDRAN G，et al.Endogenous amino acid flow in the avine ileum:quantification using three techniques［J］.British Journal of Nutrition，2004，92:217 －223.

［17］ 岳良泉，王康寧.雞飼料氨基酸消化率的測(cè)定及無(wú)氮日糧纖維水平對(duì)內(nèi)源氨基酸排泄的影響［J］.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1996，14:62 －74.

［18］ PARSONS C M.Effects of dietary carbohydrates and of intestinal mincroflora on excretion of endogenous amino acids by poultry［J］.Poultry Science，1983，62:483－498.

［19］ 史永軍.去盲腸及兩種內(nèi)源氨基酸校正方法對(duì)鵝飼料氨基酸消化率測(cè)定影響的研究［D］.碩士學(xué)位論文.揚(yáng)州:揚(yáng)州大學(xué)，2008.

［20］ 田河山，丁麗敏，計(jì)成，等.去盲腸雞和未去盲腸雞測(cè)定飼料氨基酸消化率的研究［J］.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，5(l):123 －128.

［21］ KHIEU B，BRAIN O，JAN E L，et al.Methods and techniques for the determination of amino acid digestibility:a review［J/OL］.Livestock Research for Rural Development，2002，14(6):［2012 － 11 － 05］.http://www.lrrd.org/lrrd14/6/bori146.htm.

［22］ SALTER D N，F(xiàn)ULFORD R J.The influence of gut microflora on the digestion of dietary and endogenous protein:studies of amino acid composition of germfree and conventional chicks［J］.British Journal of Nutrition，1974，32:625 －637.

［23］ PARSONS C M.Determination of digestible and available amino acids in meat meal using conventional and caecetomized cockerels of chick growthassays［J］.British Journal of Nutrition，1986，56:227 －240.

［24］ JOHNS D C，LOW C K，SEDCOLE J R，et al.Detemrination of amino acid digestibiliy using caecectomised and intact adult cockerels［J］.British Poultry Science，1986，27:451 －461.