王 美， 張振秋*， 袁 汀， 李 妍， 梁 朔， 侯學智

(1.遼寧中醫(yī)藥大學藥學院，遼寧大連 116600;2.中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院，遼寧沈陽 110004)

月礬中空栓由兒茶、苦參、青黛、血竭、蛇床子等十味中藥組成，具有清熱解毒、活血止痛、化腐生肌、收斂止血之功效。月礬中空栓劑，其外層為基質(zhì)和藥物制成的殼，空心內(nèi)填充藥材提取液，藥物與基質(zhì)相對分開，可彌補普通栓劑基質(zhì)與藥物混合造成的釋藥困難等不足;填充液態(tài)藥物制成的中空栓劑，藥物分散程度好，具有更高的生物利用度;藥液被栓劑外殼包裹，可避免其與空氣接觸造成的氧化、風化、潮解等，提高制劑的穩(wěn)定性。本實驗運用綜合評分法對月礬中空栓進行質(zhì)量評價，為其質(zhì)量控制提供參考依據(jù)［1-3］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1100高效液相色譜儀，G1314A紫外檢測器;AS3120A超聲提取器;2140型電子分析天平;METTLERAB135—S十萬分之一電子天平 (瑞士);ZF—C型三用紫外分析儀、日立U—3010紫外可見雙光束掃描分光光度計。

1.2 試藥 兒茶素 (批號110877—201102)、表兒茶素 (批號878—200102)、氧化苦參堿 (批號110780—200405)、 苦 參 堿 (批 號 110805—200507)、靛藍 (批號716—9002)、靛玉紅 (批號 110717—200204)、血 竭 高氯酸鹽 (批 號110811—200704)對照品均由中國食品藥品檢定院提供。藥材飲片均經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學李峰教授鑒定。甲醇、乙腈均為色譜純，其他溶劑均為分析純，娃哈哈純凈水。

月礬中空栓為實驗室自制，取月石、兒茶、乳香、沒藥、苦參、蛇床子六味藥材，加10倍量水，煎煮3次，每次2 h，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1.36(55℃)的稠膏，稱定質(zhì)量。按六分之五比例取稠膏，在70℃減壓干燥，粉碎，與冰片、血竭、青黛、枯礬粉末混合，過六號篩。剩余的稠膏作為液態(tài)提取液。將半合成脂肪酸甘油酯加熱熔化，加入藥品粉末，迅速攪拌均勻，注入經(jīng)潤滑劑處理的子彈頭型模具中，待適當凝固后，迅速翻轉(zhuǎn)栓模，使模孔中央未凝的含藥基質(zhì)流出，形成內(nèi)壁光滑的空腔，中空部位注入液態(tài)提取液0.4 mL，尾穴部用同樣含藥基質(zhì)封口即得，刮平模口，啟模，包裝備用。規(guī)格:每粒質(zhì)量1.3 g。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

2.1.1 兒茶素、表兒茶素混合對照品溶液的制備取對照品兒茶素、表兒茶素適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1 mL含兒茶素0.579 mg，表兒茶素0.452 mg的溶液，作為貯備液。精密吸取兒茶素1 mL，表兒茶素1.25 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.2 氧化苦參堿、苦參堿混合對照品溶液的制備 取對照品氧化苦參堿、苦參堿適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1 mL含氧化苦參堿0.845 mg，苦參堿0.450 mg的溶液，作為貯備液。精密吸取氧化苦參堿，苦參堿對照品貯備液各1 mL，3 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.3 靛藍、靛玉紅混合對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒質(zhì)量的對照品靛藍和靛玉紅適量，加甲醇-三氯甲烷 (8∶2)制成每1 mL含靛藍0.781 mg和靛玉紅0.259 mg的貯備液。精密吸取靛藍，靛玉紅對照品貯備液各1 mL，置同一10 mL量瓶中，加三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.4 血竭高氯酸鹽對照品溶液的制備 取對照品血竭高氯酸鹽適量，精密稱定，置50 mL棕色量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1 mL，置5 mL棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含血竭高氯酸鹽0.038 4 mg的貯備液，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的制備

2.2.1 兒茶供試品溶液的制備 取月礬中空栓1粒，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇-水 (1∶1)50 mL，稱定質(zhì)量，超聲 (300 W，25 kHz)提取30 min，放冷，再次稱定質(zhì)量，用甲醇-水 (1∶1)溶液補質(zhì)量［4］。

2.2.2 苦參供試品溶液制備 取月礬中空栓1粒，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液0.5 mL，加入甲醇30 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲 (300 W，25 kHz)提取30 min，放冷，再次稱定質(zhì)量，用甲醇溶液補質(zhì)量［5］。

2.2.3 青黛供試品溶液制備 取月礬中空栓1粒，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇-三氯甲烷(8∶2)50 mL，稱定質(zhì)量，超聲 (300 W，25 kHz)提取30 min，放冷，再次稱質(zhì)量，用甲醇-三氯甲烷 (8∶2)溶液補質(zhì)量［6］。

2.2.4 血竭供試品溶液制備 取月礬中空栓1粒，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇30 mL，稱定質(zhì)量，超聲 (300 W，25 kHz)提取30 min，放冷，再次稱質(zhì)量，用甲醇溶液補質(zhì)量。

以上4種溶液補質(zhì)量后，在冰箱內(nèi)常溫層內(nèi)放置15 min，濾過除去基質(zhì)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3 陰性溶液的制備 按處方組成及制法，分別制備缺兒茶、苦參、青黛、血竭藥材的月礬中空栓陰性樣品，按2.2項下方法制備陰性溶液。

2.4 色譜條件

2.4.1 月礬中空栓中兒茶素和表兒茶素的測定采用Phenomenex ODS—C18色譜柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相為 0.1% 磷酸溶液-甲醇(70∶30)，體積流量1.0 mL/min，檢測波長285 nm，柱溫30℃，進樣量10 μL［7-8］。在上述色譜條件下，按兒茶素和表兒茶素的色譜峰計算，理論塔板數(shù)均大于3 000。見圖1。

圖1 對照品 (A)、樣品 (B)、缺兒茶陰性樣品 (C)HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of reference substances(A)，sample(B)，negative sample without Catechu(C)

2.4.2 月礬中空栓中氧化苦參堿和苦參堿的測定采用Phenomenex ODS—C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm)色譜柱，流動相為0.1%磷酸溶液-乙腈(80∶20)，體積流量1.0 mL/min，檢測波長220 nm，柱溫為室溫，進樣量10 μL［9］。在上述色譜條件下，按氧化苦參堿和苦參堿的色譜峰計算，理論塔板數(shù)均大于2 000。見圖2。

2.4.3 月礬中空栓中靛藍和靛玉紅的測定 采用Phenomsil ODS—C18色譜柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm)，甲醇-水 (70∶30)，體積流量1.0 mL/min，檢測波長 285 nm，柱溫 30 ℃，進樣量 10 μL［10］。在上述色譜條件下，按靛藍和靛玉紅的色譜峰計算，理論塔板數(shù)均大于3 000。見圖3。

2.4.4 月礬中空栓中血竭高氯酸鹽的測定 采用Phenomenex ODS—C18色譜柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相為乙腈－0.05 mol/L磷酸二氫鈉(55∶45)，柱溫:40℃，體積流量1 mL/min，進樣量10 μL，檢測波長440 nm。在上述色譜條件下，按血竭高氯酸鹽的色譜峰計算，理論塔板數(shù)均大于4 000。見圖4。

圖2 對照品 (A)、樣品 (B)、缺苦參陰性樣品 (C)HPLC色譜圖Fig.2 HPLC chromatograms of reference substances(A)，sample(B)，negative sample without Sophorae flavescentis Radix(C)

圖3 對照品 (A)、樣品 (B)、缺青黛陰性樣品 (C)HPLC色譜圖Fig.3 HPLC chromatograms of reference substances(A)，sample(B)，negative sample without Indigo Naturalis(C)

圖4 對照品 (A)、樣品 (B)、缺血竭陰性樣品 (C)HPLC色譜圖Fig.4 HPLC chromatograms of reference substances(A)，sample(B)，negative sample without Dracenis Sangus(C)

3 方法學考察

3.1 線性范圍考察 分別精密吸取各對照品溶液2、5、10、15、20 μL，在上述色譜條件下分別進樣進行測定。以進樣量 (X，μg)為橫坐標，峰面積 (Y)為縱坐標，繪制標準曲線，兒茶素、表兒茶素、氧化苦參堿、苦參堿、靛藍、靛玉紅、血竭高氯酸鹽的回歸方程。結(jié)果見表1。

3.2 精密度試驗 精密吸取11916批樣品的供試品溶液10 μL，分別在相應色譜條件下連續(xù)進樣5次，測得兒茶素、表兒茶素、氧化苦參堿、苦參堿、靛藍、靛玉紅、血竭高氯酸鹽的峰面積的RSD 分 別 為 1.5%、2.0%、1.6%、1.2%、1.8%、1.7%、1.9%。結(jié)果表明精密度良好。

表1 月礬中空栓中7種成分的線性方程和線性范圍Tab.1 Linear equations and linear ranges of seven components in Yuefan Hollow Type Suppository

3.3 穩(wěn)定性試驗 取11916批樣品的供試品溶液，分別在相應色譜條件下0、2、4、8、12 h進樣10 μL，測得兒茶素、表兒茶素、氧化苦參堿、苦參堿、靛藍、靛玉紅、血竭高氯酸鹽峰面積的RSD分別為 1.6%、2.0%、1.2%、1.9%、1.0%、1.9%、1.9%。結(jié)果表明供試品溶液中上述7個成分在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.4 重復性試驗 取11916批樣品5粒，精密稱定，按2.2項下方法平行制備成供試品溶液，分別在相應色譜條件下進樣10 μL進行測定。計算兒茶素，表兒茶素，氧化苦參堿，苦參堿，靛藍，靛玉紅，血竭高氯酸鹽，其RSD分別為0.8%、2.0%、1.8%、1.1%、1.7%、1.4%、1.8%說明方法重復性良好。

3.5 加樣回收率試驗 取已知量 (兒茶素2.157 mg/g、表兒茶素2.138 mg/g、氧化苦參堿1.948 mg/g、苦參堿2.843 mg/g、靛藍2.792 mg/g、靛玉紅0.971 9 mg/g、血竭高氯酸鹽0.827 8 mg/g)11916批栓劑，5份，每份1粒，精密稱定。分別準確加入兒茶素、表兒茶素、氧化苦參堿、苦參堿、靛藍、靛玉紅、血竭高氯酸鹽對照品貯備液4.5、6.0、2.5、8、5、4、25 mL按2.2項下方法分別制備供試溶液，在相應色譜條件下進行測定，計算回收率。結(jié)果上述7個化合物的平均回收率 (n=5)分 別 為 100.9%、99.9%、100.5%、100.8%、100.9%、99.8%、98.2%。結(jié)果見表2。

3.6 樣品測定 取月礬中空栓樣品，精密稱定，分別按2.2項下方法制備供試品溶液，在各自色譜條件下分別進樣10 μL，記錄兒茶素、表兒茶素、氧化苦參堿、苦參堿、靛藍、靛玉紅峰面積，由線性方程計算各自質(zhì)量分數(shù)，并進行綜合評分(Comprehensive Score)。先將各指標進行規(guī)格化，Y=(X－Xmin/Xmax－Xmin) ×10(X為某物質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)，Y為計算分值)，7種物質(zhì)權(quán)重系數(shù)均定為0.2，最終綜合評分結(jié)果公式為W=∑Y×0.2(W為綜合評分值)［11］。結(jié)果見表3。

表2 月礬中空栓中7種成分的回收率實驗結(jié)果 (n=5)Tab.2 Results of recovery of seven components in Yuefan Hollow Type Suppository(n=5)

表3 月礬中空栓樣品測定結(jié)果 (n=3)和綜合評分表Tab.3 Determination results of samples and comprehensive scores in Yuefan Hollow Type Suppository

4 討論

4.1 本實驗所制月礬中空栓系利用普通栓模采用一定工藝制備而成，不適于大量生產(chǎn)。但適宜實驗室和醫(yī)院制劑室規(guī)模，也適于醫(yī)療條件差的小衛(wèi)生單位推廣應用。月礬中空栓作為一種具有先進劑型的純中藥栓劑用于治療婦科常見病宮頸糜爛，可充分彌補目前西醫(yī)治療該病療效不夠持久、毒副作用大，易產(chǎn)生并發(fā)癥等缺點，同時較普通中藥栓劑具有更高的穩(wěn)定性與生物利用度，將來投放臨床可填補目前空白，創(chuàng)造可觀的經(jīng)濟效益和社會效益［12］。

4.2 中藥的藥效是多種物質(zhì)共同作用的結(jié)果，以單一物質(zhì)的含量來評價其質(zhì)量的優(yōu)劣不能夠反映藥物發(fā)揮作用的整體性。本實驗同時測10批月礬中空栓中7種物質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)，故同時選擇處方中所含主要成分作為評價指標。為使各因素水平的貢獻具有均等的機會，采用綜合評分法對結(jié)果進行量化，從而可以方便地將不同性質(zhì)的指標轉(zhuǎn)變成類型相同的數(shù)值，再將這些數(shù)值加權(quán)計算，得到綜合評分，使數(shù)據(jù)計算和結(jié)果分析更加簡便客觀［13］。

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