馬合木提·買買提明， 賽力慢·哈得爾， 麥得尼亞提·霍加*

(1.新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，新疆烏魯木齊 830011;2.新疆維吾爾醫(yī)院藥劑科，新疆烏魯木齊 830049)

蕪菁籽為十字花科Cruciferous植物蕪菁Brassica rapa干燥成熟的種籽。蕪菁籽具有清肝明目，利濕退黃，破積通淋的功效［1］。蕪菁籽還是維吾爾族醫(yī)藥中常用的族藥之一，以蕪菁籽油為藥用，與中醫(yī)中藥中蕪菁籽的用法不同，維吾爾族醫(yī)中常以蕪菁籽治療黃疸性肝炎，補(bǔ)腎生精，健胃消食，散風(fēng)利尿，性功能減退，尿路結(jié)石，可去除雀斑和皺紋，固法解毒作用等功效，且具有高效，低毒副作用的優(yōu)勢(shì)［2-3］。本實(shí)驗(yàn)用超聲-微波協(xié)同提取蕪菁籽中總黃酮，為蕪菁籽資源的充分利用和客觀評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)，并探討該法在提取中藥有效成分中的應(yīng)用［4］。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

超聲-微波聯(lián)用萃取儀 (上海新拓微波溶樣測(cè)試有限公司生產(chǎn));UV—1100紫外可見分光光度計(jì) (上海美譜達(dá)儀器有限公司);RE—52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (上海亞榮生化儀器廠);AR1140電子天平 (梅特勒-托利多儀器上海有限公司);FW177型中草藥粉碎機(jī) (天津泰斯特儀器有公司)。

蕪菁籽采自新疆阿克蘇地區(qū)柯坪縣。

蘆丁對(duì)照品 (批號(hào)110080-200707)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;95%乙醇，氫氧化鈉，亞硝酸鈉，硝酸鋁，石油醚等均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制［5］精密稱取在120℃下干燥至恒定質(zhì)量的蘆丁對(duì)照品10.00 mg，置50 mL量瓶中，加20 mL 65%乙醇，超聲波處理溶解，定容至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液 (0.20 mg/mL)，放入冰箱備用。

1.2.2 吸收曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 依據(jù)《中國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定的測(cè)定總黃酮的常規(guī)方法進(jìn)行測(cè)定［1，6］。精確量取蘆丁對(duì)照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL(1號(hào)至7號(hào))分別置于25 mL量瓶中，加入8 mL 65%乙醇和1 mL 5%亞硝酸鈉溶液，混勻，放置6 min;加入1 mL 10%硝酸鋁溶液，混勻，放置6 min;再加10 mL 5%氫氧化鈉溶液，搖勻后用65%的乙醇定容至25 mL，放置15 min后。取以上3號(hào)對(duì)照品溶液 (2.0 mL)，用空白試劑作參比，在250～600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，選擇510 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。在510 nm處測(cè)定各對(duì)照品溶液的吸光度值，以蘆丁質(zhì)量濃度對(duì)吸光度值作圖，得標(biāo)準(zhǔn)曲線和回歸方程A=10.089C－0.001 9，R2=0.999 1。

1.2.3 樣品中總黃酮類化合物的提?。?］將干凈蕪菁籽，放入80℃烘箱中烘干，再用粉碎機(jī)粉碎，取一定量的粉末于1 000 mL燒杯中，以1∶50比例加入石油醚，攪拌30 min后浸泡24 h，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去石油醚脫脂，抽濾，濾渣經(jīng)自然揮干石油醚后，備用。準(zhǔn)確稱取濾渣5 g，置于具塞三角瓶中，加入一定量65%的乙醇，在一定條件下，超聲-微波協(xié)同萃取一定時(shí)間，離心分離，過濾除渣，用65%乙醇定容至250 mL量瓶中，作為待測(cè)溶液。取待測(cè)液10 mL轉(zhuǎn)入100 mL量瓶中乙醇定容，從中取5 mL置于25 mL量瓶中，按1.2.2項(xiàng)上方法操作，測(cè)定吸光度，然后按下式計(jì)算總黃酮得率:

式中:W為蕪菁籽粗粉質(zhì)量 (g)

1.2.4 單因素試驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)［8］以總黃酮得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，分別考察不同提取功率，不同含乙醇量，不同料液比，不同提取時(shí)間在超聲-微波條件下對(duì)萃取蕪菁籽中總黃酮的影響。根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果、對(duì)影響總黃酮提取效果的4個(gè)主要因素3個(gè)水平 (見表1)、用L9(34)進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選擇最佳提取工藝條件。

表1 L9(34)正交試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)

2 結(jié)果

2.1 提取功率對(duì)總黃酮得率的影響 含乙醇量為65%，液料比為1∶20，提取時(shí)間15 min的條件下，改變提取功率進(jìn)行提取，計(jì)算總黃酮得率。由圖1可知，當(dāng)提取功率逐漸增大時(shí)，總黃酮的得率也逐漸增大，當(dāng)功率達(dá)到400 W時(shí)，得率最高，再增加功率，黃酮的量逐漸降低?？赡茈S著功率的增大，受熱加劇使部分黃酮類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)遭到破壞，同時(shí)溶解的雜質(zhì)增多降低了得率，故選擇提取功率在400 W為宜。

圖1 提取功率對(duì)得率的影響

2.2 提取液含醇量對(duì)總黃酮得率的影響 提取功率為400 W，提取時(shí)間15 min，料液比為1∶20的條件下，用不同含醇量的乙醇進(jìn)行提取，計(jì)算總黃酮得率。由圖2可知，含乙醇量在65%～70%時(shí)，總黃酮類化合物得率最高，之后逐漸下降。因?yàn)辄S酮類化合物的溶解度因結(jié)構(gòu)及存在狀態(tài)不同而有很大差異，一般易溶于中等極性的溶劑中，所以，當(dāng)含乙醇量低時(shí)，黃酮的溶解度也低;當(dāng)含乙醇量偏高時(shí)，極性又相對(duì)偏高，所以黃酮苷溶解度又有所降低。

圖2 含乙醇量對(duì)得率的影響

2.3 料液比對(duì)總黃酮得率的影響 提取功率為400 W，含乙醇量為65%，提取時(shí)間為15 min的條件下，分別考察不同料液比對(duì)總黃酮得率的影響。結(jié)果如圖3所示，可見，采用超聲和微波雙輔助技術(shù)萃取蕪菁籽總黃酮的料液比為1∶20比較適合。

圖3 料液比對(duì)得率的影響

2.4 提取時(shí)間對(duì)總黃酮得率的影響 在提取功率為400 W，含乙醇量為65%，料液比為1∶20的條件下，考察不同時(shí)間對(duì)總黃酮得率的影響。結(jié)果如圖4所示，從圖中可以看出，隨超聲提取時(shí)間增加，總黃酮類物質(zhì)得率提高。當(dāng)提取時(shí)間為15 min時(shí)，黃酮得率達(dá)到最高，為2.34%，隨后得率逐漸降低。故以提取15 min為宜。

圖4 提取時(shí)間對(duì)得率的影響

2.5 正交試驗(yàn)結(jié)果［9］由正交試驗(yàn)結(jié)果 (見表2)可知，各考察因素對(duì)提取效果的影響大小順序?yàn)?B＞C＞A＞D。最佳的提取工藝為B2C3A3D1，即含乙醇量為65%，料液比為1∶20(g/mL)，提取功率為400 W，提取時(shí)間為15 min。

表2 蕪菁籽總黃酮提取L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果

2.6 最佳條件的驗(yàn)證 準(zhǔn)確稱取脫脂后的蕪菁籽濾渣3份，每份5 g，根據(jù)最佳提取條件 B2C3A3D1提取，按2.1.2項(xiàng)方法測(cè)定得率。結(jié)果 (見表3)可知，總黃酮得率比正交設(shè)計(jì)中總黃酮的得率大，因此該工藝條件合理，穩(wěn)定，可行。見表3。

表3 最佳條件的驗(yàn)證

2.7 不同提取方法的比較［10］結(jié)果見表4。

3 討論

3.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，超聲-微波協(xié)同萃取法提取蕪菁籽中總黃酮的最佳提取條件為:超聲-微波提取功率為400 W，提取溶液為65%的乙醇，料液比為1∶20(mg/mL)，提取時(shí)間為15 min，在此工藝條件下蕪菁籽總黃酮得率可達(dá)3.03%。此法提取效率高，為今后用蕪菁籽提取黃酮類化合物提供質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)［11］。

表4 不同提取方法對(duì)比實(shí)驗(yàn)及結(jié)果

3.2 與回流提取和微波萃取相比，超聲-微波協(xié)同萃取可以顯著提高蕪菁籽中總黃酮的得率，比微波萃取提高了1.06倍;比乙醇回流提取法提高了1.84倍，并顯著縮短了提取時(shí)間。該法具有節(jié)約、簡(jiǎn)單、省時(shí)等特點(diǎn)，有極好的發(fā)展前途［12］。

［1］衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn):維吾爾藥分冊(cè)［S］.烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社，1998:36.

［2］尼米吐拉，買買提江，木塔力甫.維吾爾醫(yī)常用藥材［M］.烏魯木齊:新疆人民衛(wèi)生出版社，2005:362.

［3］新疆維吾爾自治區(qū)衛(wèi)生廳.維吾爾藥材標(biāo)準(zhǔn)［M］.上冊(cè).烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社，1993:123.

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