周曉紅 常素華 紀(jì)亮

《血站技術(shù)操作規(guī)程》2012年版中把血站使用的一次性采血袋內(nèi)毒素檢測不作為必須檢測項(xiàng)目，但本血站于2006年初采用MB-80E細(xì)菌內(nèi)毒素檢測儀對(duì)購入血站的一次性血袋和注射器進(jìn)行內(nèi)毒素定量檢測，經(jīng)過6年的使用，確認(rèn)應(yīng)用該系統(tǒng)定量檢測血袋、注射器中污染內(nèi)毒素的方法可靠，能提供準(zhǔn)確的結(jié)果?，F(xiàn)將檢測不同規(guī)格血袋、注射器內(nèi)毒素的結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 檢測對(duì)象 一次性采血器材(包括注射器、血袋)。

1.2 主要試劑

1.2.1 EKT-5 mset動(dòng)態(tài)內(nèi)毒素檢測試劑盒(規(guī)格:前處理液0.90 ml，主劑:0.2 ml)(北京金山川科技發(fā)展有限公司提供)每批試劑均在有效期內(nèi)。

1.2.2 內(nèi)毒素工作質(zhì)控品效價(jià):1EU/ml(批號(hào)050801.050802.070618.090525.100709.110507)。

1.3 儀器 MB-80E細(xì)菌內(nèi)毒素檢測儀、混勻器(北京金山川科技發(fā)展有限公司)恒溫培養(yǎng)箱(湖北黃石醫(yī)療器械有限公司)。

1.4 檢測方法 動(dòng)態(tài)濁度法。

1.4.1 樣品檢測 ①血袋檢測:首先打開血袋各通道，將各聯(lián)袋中液體混勻，排入真空袋，吸取真空袋內(nèi)液體100μl加入前處理液0.9 ml用水中混勻后，再取二者混合后液體100μl在加入另一支前處理液0.9 ml用水中(100倍稀釋)，取混勻后的稀釋液0.20 ml加入反應(yīng)主試劑中溶解，轉(zhuǎn)入無熱源平底玻璃管中，用MB-80E細(xì)菌內(nèi)毒素檢測儀進(jìn)行自動(dòng)檢測。②無菌注射器檢測:至少取3支，抽取0.9%Nacl注射液至總刻度容量，液體振洗兩次，封閉在(37±2)℃恒溫箱中，保持2 h取原液200 ul加入反應(yīng)主劑中在混勻器中混勻后移入無熱源平底玻璃管內(nèi)用MB-80E細(xì)菌內(nèi)毒素檢測儀進(jìn)行自動(dòng)檢測。

1.4.2 內(nèi)毒素工作質(zhì)控品檢測 取質(zhì)控品稀釋液1 ml添加到內(nèi)毒素工作質(zhì)控品中，封口后置旋渦混合器上振搖15 min，作為內(nèi)毒素工作質(zhì)控品對(duì)照液，從該液中取0.20 ml加入試劑盒反應(yīng)主劑中溶解，轉(zhuǎn)入無熱源平底玻璃管中，用MB-80E細(xì)菌內(nèi)毒素檢測儀進(jìn)行自動(dòng)檢測。

1.4.3 標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素配制溶液 制成3個(gè)濃度的稀釋液最低濃度高于所用的試劑標(biāo)示的檢測限，每個(gè)濃度做3支平行管，同時(shí)做2支陰性對(duì)照，根據(jù)線性回歸分析，相關(guān)系數(shù)均值r=0.987。

1.4.4 干擾試驗(yàn) 選擇標(biāo)準(zhǔn)線最近中點(diǎn)的內(nèi)毒素濃度作為供試品干擾試驗(yàn)中添加的內(nèi)毒素濃度，計(jì)算內(nèi)毒素回收率。

2 結(jié)果

見表1。

表1 一次性采血器材細(xì)菌內(nèi)毒素檢測結(jié)果

3 討論

從表中可見，內(nèi)毒素質(zhì)控品檢測結(jié)果均在規(guī)定范圍內(nèi)(0.5～2.0EU/ml)表明每批血袋、注射器內(nèi)毒素檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠。干擾試驗(yàn)內(nèi)毒素回收率范圍在50% ～200%，表明在此實(shí)驗(yàn)條件下供試品溶液已無干擾。

細(xì)菌內(nèi)毒素檢測要求條件非常高，對(duì)檢測所使用的試管和一次性吸頭必須做到去熱源，實(shí)驗(yàn)環(huán)境最好在百級(jí)凈化條件下進(jìn)行。如果去熱源的試管和吸頭達(dá)不到標(biāo)準(zhǔn)或環(huán)境條件太差，容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果;另一方面，實(shí)驗(yàn)人員在操作過程中，鱟試劑和細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品加入的量一定要準(zhǔn)確，如果加入的量過多或過少則容易發(fā)生假陽性或假陰性結(jié)果，同時(shí)向測定試管內(nèi)加入液體時(shí)不要出現(xiàn)氣泡，以免影響檢測結(jié)果。

內(nèi)毒素是一個(gè)強(qiáng)力的熱源物質(zhì)，每毫升血液中達(dá)皮克級(jí)的內(nèi)毒素就能使人發(fā)燒。內(nèi)毒素血癥可能是免疫低下患者原因不明發(fā)燒的因素之一。

通過對(duì)血站一次性采血器材中內(nèi)毒素的定量檢測，不僅可以直觀反映一次性采血器材的內(nèi)在安全，而且對(duì)于血站選擇一次性采血器材的供應(yīng)商具有重要的參考價(jià)值。用MB-80E細(xì)菌內(nèi)毒素檢測系統(tǒng)檢測血袋中微量污染內(nèi)毒素，快速、準(zhǔn)確。檢測數(shù)據(jù)均符合國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[1，2](5.56EU/ml)，表明選擇生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品可信賴.因此，保證采集血液安全，嚴(yán)格控制每一批一次性采血器材中的內(nèi)毒素是十分必要的。

[1]國家藥品監(jiān)督管理局.國家藥品標(biāo)準(zhǔn).血液保存液Ⅲ.WS-10001-(HD-0176)-2002.

[2]國家藥品監(jiān)督管理局.國家藥品標(biāo)準(zhǔn).紅細(xì)胞保存液.WS-10001-(HD-0230)-2002.