王翠艷 李占山 張錦 王林

(河北聯(lián)合大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科，063000)

米托蒽醌長循環(huán)脂質(zhì)體的制備及特性

王翠艷 李占山 張錦 王林

(河北聯(lián)合大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科，063000)

目的 通過對米托蒽醌長循環(huán)脂質(zhì)體的制備，達(dá)到一種高效的抗癌治療作用。方法 采用逆相蒸發(fā)法以DSPC DSPE-34HCSI膽固醇為原料，制備了米托蒽醌空間穩(wěn)定多相脂質(zhì)體。并對其粒徑、分布、載藥量、包封率及在小鼠體內(nèi)分布進(jìn)行了測定。結(jié)果 米托蒽醌長循環(huán)脂質(zhì)體在體內(nèi)循環(huán)時(shí)間延長，肝、肺臟分布增高。結(jié)論 對增強(qiáng)其抗癌效果和降低毒副作用具有一定意義。

米托蒽醌；逆相蒸發(fā)法；長循環(huán)脂質(zhì)體

訊作者：李占山

米托蒽醌(mitoxantrone，DHAQ)是合成的蒽環(huán)類抗癌藥，臨床及基礎(chǔ)研究證明，米托蒽醌對白血病、乳腺癌、何杰金氏病和原發(fā)性肝癌有較好的療效。但仍有較為嚴(yán)重的骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)和心臟毒性。目前臨床使用為米托蒽醌的粉針劑型。本文通過國內(nèi)外研究較多的長循環(huán)脂質(zhì)體技術(shù)，采用逆相蒸發(fā)法制備了米托蒽醌長循環(huán)脂質(zhì)體，目的是為了研究更好的新劑型，進(jìn)一步提高米托蒽醌的抗癌效果和降低全身毒副作用。

1 儀器與試藥

S-450型電子掃描顯微鏡；日本島津UV-3000型分光光度計(jì)；NICOMP-370型particle sizing system；JP-3305 Sintilation Counter，81-2型恒溫磁力攪拌器；L8-80M超速低溫離心機(jī)；SHZ-88-1型臺式水浴恒溫振蕩器。昆明種小鼠，雌雄各半，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。米托蒽醌質(zhì)量符合部頒標(biāo)準(zhǔn)，水為重蒸餾水，試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 米托蒽醌長循環(huán)脂質(zhì)體的制備 采用逆相蒸發(fā)法制備[1]，用3只小試管分別精密稱取6.6mgDSPC，3.3mgCH和2.0mgDSPE34-HCSI加入振蕩器中，再加入CHCL600μL和600μLdisopropylether進(jìn)行超聲振蕩使藥物充分溶解，然后加入Tris緩沖液(pH8.0)600μL進(jìn)行超聲乳化15min，60℃水浴中氮?dú)饬鲹]干有機(jī)溶媒，獲得乳白色混懸液，再加入緩沖液200μL，用NICOMP-370型particle sizing system經(jīng)過2張重疊的200 nm polycarbonate filters壓濾10次，即得。

2.2 米托蒽醌長循環(huán)脂質(zhì)體的粒徑及分布 采用Volume-weighted Gaussian Distribution Analysis測定米托蒽醌長循環(huán)脂質(zhì)體的粒徑及其分布[2-3]，結(jié)果表明最大粒徑為199nm，最小粒徑為83nm，平均粒徑為167.8nm(CV＝0.320)。

2.3 米托蒽醌長循環(huán)脂質(zhì)體的載藥性能 根據(jù)文獻(xiàn)[4]可知，米托蒽醌在610 nm處有較強(qiáng)的吸收峰，而其他輔料在此波長并無吸收峰存在，所以采用分光光度法測定包封率和載藥量[5]。從而得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A＝0.0073＋0.4246C(C＝mg/100mL)r＝0.999 7。用空白長循環(huán)脂質(zhì)體加入米托蒽醌，再加入乙酸乙酯進(jìn)行溶解，溶解后分別測定高、中、低3個(gè)濃度的回收率，算出平均值為99.32%。樣品測定，精密稱取米托蒽醌長循環(huán)脂質(zhì)體，加入定量生理鹽水溶解后，超速低溫離心，分離出上清液，再同樣洗滌兩次后，合并兩次的上清液，在λ＝610 nm處進(jìn)行其吸收度的測定，根據(jù)測定結(jié)果計(jì)算出包封率，結(jié)果(表1)。

2.4 米托蒽醌長循環(huán)脂質(zhì)體在荷瘤小白鼠體內(nèi)的分布取colon26腫瘤細(xì)胞3次轉(zhuǎn)代培養(yǎng)液(4×105)注入小白鼠背部的皮下組織，等待腫瘤長到直徑約0.5cm左右時(shí)，即可用作組織器官分布及腫瘤靶向性的測定。采用液體閃爍記數(shù)技術(shù)測定米托蒽醌長循環(huán)脂質(zhì)體在動(dòng)物體內(nèi)的含量[6]及組織器官分布[7]。即取3H-inulin33μL，加入到600μL磷酸鹽緩沖溶液中，米托蒽醌長循環(huán)脂質(zhì)體的制備過程同前。取colon26荷瘤小白鼠12只，于試驗(yàn)前12h內(nèi)禁食，每6只分成一組，共分二組，通過頸靜脈注射包封3H-inulin的米托蒽醌長循環(huán)脂質(zhì)體100μL，分別在2h和6h經(jīng)心臟穿刺抽血100μL(肝素抗凝)，然后斷頸處死這些動(dòng)物，剖取它們的組織器官，精取定量，加入Soluble組織溶解液1mL，進(jìn)行研碎、超聲溶解乳化后，再加入30%過氧化氫300μL進(jìn)行脫色。加入Atomlight閃爍測定液10mL，充分振蕩、搖勻。于JP-3305 Sintilation Counter自動(dòng)計(jì)數(shù)，然后計(jì)算單位重量DPM百分率。結(jié)果(圖1)。

表1 米托蒽醌長循環(huán)脂質(zhì)體的包封率

圖1 米托蒽醌長循環(huán)脂質(zhì)體在動(dòng)物體內(nèi)的分布(±s，n＝6)

3 討論

研究證明，表面含有聚乙二醇類脂衍生物(如PEG-DSPE)的第二代脂質(zhì)體能夠顯著延長它在體循環(huán)中的駐留時(shí)間，并且能夠增加在靶部位的吸收，稱為長循環(huán)脂質(zhì)體(long circulating liposome)。此外，它與特異性抗體結(jié)合后能在體內(nèi)特異性地與靶部位相結(jié)合而發(fā)揮更好的治療作用，從而實(shí)現(xiàn)體內(nèi)抗體介導(dǎo)靶向，即所謂的主動(dòng)靶向[8]。本實(shí)驗(yàn)采用逆相蒸發(fā)法，用DSPC、PEG-DSPE、CH制成米托蒽醌長循環(huán)脂質(zhì)體，結(jié)果表明米托蒽醌長循環(huán)脂質(zhì)體具有良好的包封率，在動(dòng)物體內(nèi)循環(huán)時(shí)間長，肝臟、肺臟分布率增高等優(yōu)點(diǎn)，為進(jìn)一步研究米托蒽醌長循環(huán)脂質(zhì)體的抗癌效果奠定基礎(chǔ)。

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1005-619X(2013)04-0363-02

2013-03-23)