邢占芬，成洪達(dá)，張平平

山東萬(wàn)杰醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，淄博 255213

腸炎寧片由地錦草、金毛耳草、香薷、楓香樹(shù)葉、樟樹(shù)根五味中藥材組成，具有清熱利濕、行氣的功效，用于急、慢性胃腸炎，腹瀉，細(xì)菌性痢疾，小兒消化不良等癥［1］。經(jīng)文獻(xiàn)查閱，目前腸炎寧片的質(zhì)量控制僅采用高效液相色譜法測(cè)定單一有效成分如沒(méi)食子酸、雞屎藤苷甲酯含量［2，3］，由于中藥復(fù)方化學(xué)成份繁多，藥效復(fù)雜，僅以某種有效成份含量作為質(zhì)量控制指標(biāo)是不全面的。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC對(duì)腸炎寧片指紋圖譜進(jìn)行了研究，以達(dá)到全面控制其質(zhì)量的目的。

1 儀器與試劑

大連依利特P1201型高效液相色譜儀(UV檢測(cè)器1臺(tái)，高壓恒流泵2臺(tái)，柱溫箱，EC2006工作站);上海精密科學(xué)儀器有限公司FA1004N型電子天平;天津奧特賽恩斯儀器有限公司AS3120型超聲清洗機(jī)。甲醇為色譜純，水為超純水，槲皮素對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品鑒定所，11批腸炎寧片購(gòu)自江西天施康弋陽(yáng)制藥有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備

取槲皮素對(duì)照品適量，精密稱(chēng)取9.7 mg于10 mL容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度。

2.2 供試液的制備

取腸炎寧片6片，研細(xì)混勻，取約2 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加甲醇50 mL，稱(chēng)重，超聲提取30 min，放冷，加入甲醇補(bǔ)足失重。搖勻，過(guò)濾，濾液用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.3 色譜條件

Hypersil BDS色譜柱(4.6 mm × 250 mm，5 μm)，流動(dòng)相以甲醇(A)-水(B)進(jìn)行梯度洗脫，0～55 min，A:2% ～100%，55 ～62，A:100%，流速 1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣體積20 μL。

2.4 精密度試驗(yàn)

取同一供試品(批號(hào)110746)溶液，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，考察各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積的一致性，結(jié)果表明，各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于2.0%，相對(duì)峰面積的RSD均小于3.0%，進(jìn)樣精密度良好，符合指紋圖譜技術(shù)要求。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品(批號(hào)110746)溶液，分別于0、2、4、6、24、48 h進(jìn)樣，在相同色譜條件下記錄色譜圖，結(jié)果表明，各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD均小于3.0%，供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批次的供試品(批號(hào)110746)溶液5份，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于3.0%，相對(duì)峰面積的RSD均小于3.0%，重復(fù)性良好。

3 腸炎寧片指紋圖譜的建立及分析

3.1 腸炎寧片指紋圖譜的建立

按上述方法檢測(cè)11批腸炎寧片的指紋圖譜，見(jiàn)圖1，11批樣品共獲得21個(gè)共有峰。

以槲皮素(18號(hào)峰)為參照，將其保留時(shí)間定為1，計(jì)算各峰的相對(duì)保留時(shí)間，數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

表1 11批腸炎寧片共有峰相對(duì)保留時(shí)間Table 1 Relative retention time of common-peak of 11 batches Changyanning tablets

3.2 指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)

應(yīng)用國(guó)家藥典委員會(huì)頒布的“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2004 A)”對(duì)11批腸炎寧片進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。將11批樣品色譜圖導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2004 A)”，以批號(hào)110746的腸炎寧片圖譜為參照譜，生成腸炎寧片共有模式的對(duì)照指紋圖譜(見(jiàn)圖2)，得出11批樣品譜圖與對(duì)照譜圖的相似度數(shù)據(jù)(見(jiàn)表2)，以均值法計(jì)算相似度均在0.95以上，符合指紋圖譜技術(shù)要求，結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 11批次的腸炎寧片相似度計(jì)算Table 2 The calculation of similarity of 11 batches Changyanning tablets

表3 11批腸炎寧片相似度數(shù)據(jù)Table 3 Similarity of 11 batches Changyanning tablets

4 討論

4.1 提取方法的考察

本實(shí)驗(yàn)分別采用甲醇、50%甲醇-水作溶劑進(jìn)行超聲提取，結(jié)果表明，用甲醇做提取溶劑，色譜圖包含的色譜峰較多，色譜峰分離較好，故選用甲醇作為提取溶劑。

4.2 色譜柱的考察

考察了供試液在同規(guī)格Hypersil ODS C18色譜柱和Hypersil BDS C18色譜柱上的分離情況，兩種色譜柱分離結(jié)果差異較大，Hypersil ODS C18色譜柱分離情況較差，Hypersil BDS C18色譜柱色譜圖基線平穩(wěn)，出峰較多且分離度好，故選用Hypersil BDS C18色譜柱，色譜柱規(guī)格4.6 mm ×250 mm，粒徑5 μm。

4.3 流動(dòng)相的考察

比較了乙腈-水、甲醇-水、甲醇-0.1%冰醋酸溶液流動(dòng)相系統(tǒng)，結(jié)果表明，甲醇-水體系分離的效果較好。經(jīng)比較洗脫條件，最終確定采用甲醇(A)-水(B)體系梯度洗脫。

4.4 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

結(jié)合文獻(xiàn)對(duì)地錦草、香薷研究所使用的檢測(cè)波長(zhǎng)(分別 269、345 nm)［4-7］，在200 ～ 360 nm 波段內(nèi)依次對(duì)樣品進(jìn)行 230、254、269、300、345、365 nm 六個(gè)波長(zhǎng)的特征譜圖分析，綜合考察色譜峰數(shù)及響應(yīng)值，樣品在254 nm下指紋圖譜色譜峰數(shù)較多，色譜峰分布均勻，各指紋峰均有較大吸收，能全面反映樣品成分的信息特征，因此，確定試驗(yàn)檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm。

中藥復(fù)方由多味藥材組成，化學(xué)成分繁多，其多樣性與復(fù)雜性是其發(fā)揮療效的物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)也是質(zhì)量評(píng)價(jià)的難點(diǎn)與重點(diǎn)。目前，大量中藥僅以某種或幾種有效成份含量作為質(zhì)量控制指標(biāo)，方法簡(jiǎn)單、單一，無(wú)法真正體現(xiàn)中藥的整體特征及內(nèi)在質(zhì)量。

本實(shí)驗(yàn)建立了腸炎寧片HPLC指紋圖譜，確定了21個(gè)共有峰，共有峰的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積的RSD值均在3%以?xún)?nèi)，利用國(guó)家藥典委員會(huì)頒布的“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2004A)”計(jì)算指紋圖譜的相似度，結(jié)果均在0.95以上，所建立的方法穩(wěn)定、可靠，可用于腸炎寧片的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

1 Chinese Pharmacopoeia Commission(國(guó)家藥典委員會(huì)).Pharmacopoeia of the People’s Republic of China(中華人民共和國(guó)藥典).Beijing:China Medical Science Press，2010.Vol I，71.

2 Li J(李晶)，Li CT(李才堂)，Zhou GP(周?chē)?guó)平)，et al.Quality standard of Changyanning tablet.Chin J New Drugs(中國(guó)新藥雜志)，2010，19:68.

3 Yu DF(余德發(fā))，Wang ZQ(王志琴)，Cao JG(曹建國(guó))，et al.Determination of kaempferide in Changyanning tablets by HPLC.J Jiangxi Univ Tradit Chin Med(江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào))，2003，15(2):56.

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