袁 鷹 ，張庭瑞 ，董明芝 ，趙 波 ，黃 婷

(1.西安正大制藥有限公司，陜西 西安 710043;2.寧夏回族自治區(qū)固原市原州區(qū)藥材公司，寧夏 固原 756000)

可待敏緩釋膠囊的主要成分為磷酸可待因和馬來酸氯苯那敏，臨床上主要用于暫時緩解一般性感冒或吸入刺激物引發(fā)的咳嗽，以及由于干熱、其他上呼吸道過敏或過敏性鼻炎導致的鼻塞、噴嚏、鼻或喉嚨搔癢、眼睛不適等癥狀。對緩釋制劑進行釋放度測定是控制其質量的重要指標之一。筆者參考文獻[1－2]，建立了反相高效液相色譜法測定可待敏緩釋膠囊的釋放度，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀，包括Shimadzu LC－10 ATVP泵，Shimadzu SPD－10AVP紫外檢測器;AL－204型電子天平(梅特勒公司);RC－806型智能溶出儀。磷酸可待因對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為041112，含量100%);馬來酸氯苯那敏對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為030415，含量100%);可待敏緩釋膠囊(自制，批號為 20040601，20040602，20040603);水為純凈水，甲醇為色譜純，離子對試劑己烷磺酸鈉(IPR－B6，天津市化學試劑二廠)，色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Diamonsil C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:0.05 mol/L磷酸二氫鉀，加入0.01%的己烷磺酸鈉溶液(IPRB6)和0.5%三乙胺，用磷酸調 pH至6.0，與甲醇以(50∶55)的比例配成流動相并調節(jié) pH 至 7.0～7.5;流速:1.0 mL/min;進樣量:20 μL;檢測波長 220 nm;柱溫:室溫。

2.2 溶液制備

取磷酸可待因和馬來酸氯苯那敏對照品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1 mL約含磷酸可待因20 μg、馬來酸氯苯那敏4 μg的溶液，搖勻，即得對照品溶液。取供試品20粒，精密稱定，取內(nèi)容物混合均勻，研細，精密稱取適量(約相當于磷酸可待因20 mg)，置100 mL容量瓶中，加水適量，超聲處理20 min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用水稀釋制成每1 mL約含磷酸可待因20 μg的溶液，搖勻，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

干擾試驗:將空白微丸(以成品的生產(chǎn)工藝制成不含藥物成分的包衣微丸)按處方量裝入3號膠囊中，分別取空白膠囊和可待敏緩釋膠囊各1粒，分別置溶出杯內(nèi)，按照樣品釋放度試驗條件進行試驗，于12 h取樣，按照釋放度檢測方法進行檢驗。結果空白微丸在磷酸可待因和馬來酸氯苯那敏主峰保留時間處無色譜峰，不影響主藥成分釋放度的測定，表明在此條件下無背景干擾。高效液相色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:根據(jù)處方比例，將兩種主藥成分配制成一系列不同質量濃度的混合對照品溶液，依次進行液相色譜分析，以峰面積 A為縱坐標、質量濃度 C(μg/mL)為橫坐標進行線性回歸。磷酸可待因回歸方程為 A=44 139 C，r=0.999 9;馬來酸氯苯那敏的回歸方程為 A=32 978 C－16 017，r=0.999 8。結果表明，磷酸可待因質量濃度在0～30.0 μg/mL范圍內(nèi)，馬來酸氯苯那敏質量濃度在2.814～5.226 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:取供試品水溶液(配制成每毫升約含磷酸可待因20 μg、馬來酸氯苯那敏4 μg的溶液)，于室溫下自然放置，分別于 0，1，2，4，6，8 h 時進樣測定(n=6)。結果可待因峰面積的RSD為0.2%，馬來酸氯苯那敏峰面積的 RSD為0.3%。

重復性試驗:取批號為20040601樣品6份，在擬訂的色譜條件下進行測定。結果磷酸可待因、馬來酸氯苯那敏含量的 RSD分別為0.26%和0.39%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性好。

回收率試驗:按處方比例，取兩種主藥成分及各種輔料配制成樣品后，測兩種組分的回收率。結果磷酸可待因和馬來酸氯苯那敏兩種成分的回收率分別為99.7%和100.6%，RSD分別為0.17%和0.28%(n=9)，表明分析方法準確可靠。

重現(xiàn)性與均一性試驗:考察至少3批(每批6粒產(chǎn)品)樣品的批與批之間體外藥物釋放度的重現(xiàn)性，并考察同批產(chǎn)品(即1批6粒)的體外藥物釋放度取樣時間點的均一性。結果見圖2。可見，3批中試樣品的溶出曲線重現(xiàn)性很好，表明方法的重現(xiàn)性與均一性很好。

圖2 3批中試樣品體外藥物釋放曲線

2.4 樣品釋放度檢測

取本品，照2010年版《中國藥典(二部)》附錄ⅩD第一法中釋放度測定法，采用2010年版《中國藥典(二部)》附錄ⅩC第二法中溶出度測定法的裝置，以水900 mL為釋放介質，轉速為100 r/min，依法操作，經(jīng) 1，4，8 h，分別取溶液 5 mL 濾過，并即時在操作容器中補充釋放介質5 mL。分別精密量取續(xù)濾液20 μL，注入液相色譜儀，按照上述色譜條件測定，記錄色譜圖;另取磷酸可待因、馬來酸氯苯那敏對照品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含磷酸可待因20 μg、馬來酸氯苯那敏4 μg的溶液，同法測定。按外標法以峰面積分別計算每粒在不同時間的釋放量。磷酸可待因的限度為本品每粒在1，4，8 h的釋放量，分別為標示量的10% ～35%，55% ～80%，75%;馬來酸氯苯那敏的限度為本品每粒在1 h的釋放量為標示量的80%，符合規(guī)定。結果見表2。

表2 樣品體外釋放度測定結果(n=6)

3 討論

分別取兩組分對照品溶液，用紫外分光光度計于190～280 nm波長范圍內(nèi)進行紫外掃描，兩者在220 nm波長處均有較大的吸收，因此確定檢測波長為220 nm。

2010年版《中國藥典(二部)》規(guī)定，以去空氣的新鮮水為最佳的釋放溶劑，釋放溶劑的體積應符合漏槽條件。參照2010年版《中國藥典(二部)》磷酸可待因及馬來酸氯苯那敏的質量標準，采用可待敏緩釋膠囊體外藥物釋放度試驗的釋放介質為水900 mL。

[1]南 楠，陳 華，朱霽虹.HPLC法測定萬輝化痰止咳露中磷酸磷酸可待因、鹽酸麻黃堿和馬來酸馬來酸氯苯那敏的含量[J].藥物分析雜志，2000，20(1):7 －9.

[2]李小清.高效液相色譜法測定復方磷酸可待因溶液中的撲爾敏含量[J].中國藥業(yè)，2001，10(1):29 －30.