江朝娜 (海南醫(yī)學院形態(tài)學實驗室，海南 ?？?570102)

乳腺癌發(fā)生發(fā)展與生物學行為密切相關(guān)，由于腫瘤是多因素作用的結(jié)果，因此研究蛋白的表達有重要意義〔1〕。cortactin是一種微絲肌動蛋白結(jié)合蛋白，在細胞足突和板狀偽足的形成，膜胞輸送，細胞內(nèi)吞噬和腫瘤的形成及侵襲等方面有重要的作用〔2，3〕。FASCIN蛋白是一種結(jié)構(gòu)獨特的細胞骨架蛋白，其高表達時能促使活性細胞膜突起，增加細胞運動性，并改變細胞與細胞、細胞與細胞外基質(zhì)的黏附性〔4〕。本實驗應用流式細胞術(shù)檢測老年乳腺癌組織中cortactin和FASCIN的表達情況，探討其臨床價值。

1 材料與方法

1.1 材料 我院2007年11月至2010年11月老年乳腺癌手術(shù)后的凍存新鮮標本作為觀察組95例，均為女性，年齡60～75歲，平均66.7歲。標本均再次行HE染色并由病理醫(yī)師進行判讀，納入均符合2008年(WHO)的診斷標準?；颊咝g(shù)前均未進行放療和化療。同時選取部分老年患者乳腺其他象限的正常乳腺組織55例作為對照組，年齡60～69(平均63.9)歲。

1.2 cortactin和FASCIN蛋白檢測 兔抗人cortactin及FASCIN蛋白的濃縮液均購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。cortactin及FASCIN蛋白的表達均采用流式細胞術(shù)進行檢測，上機前制備好單細胞懸液，取1 ml并嚴格按實驗步驟操作后上機檢測〔5〕，應用美國BC公司的流式細胞儀進行檢測，做好質(zhì)量控制，應用系統(tǒng)自帶的軟件進行數(shù)據(jù)分析。

1.3 cortactin和FASCIN蛋白的判斷標準 以熒光指數(shù)(FI)表示cortactin和FASCIN蛋白的半定量表達。FI=(cortactin或FASCIN蛋白表達的熒光強度-對照樣品平均熒光強度)÷對照樣品平均熒光強度。

1.4 統(tǒng)計學處理 應用SAS6.12軟件，應用t檢驗、相關(guān)分析及生存分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組中cortactin及FASCIN蛋白的半定量表達 觀察組中cortactin和FASCIN的表達量明顯高于對照組(P＜0.000 1)。見表1。

表1 兩組中cortactin及FASCIN蛋白的半定量表達(±s)

表1 兩組中cortactin及FASCIN蛋白的半定量表達(±s)

組別 n cortactin t值 P值 FASCIN t值 P值對照組 95 1.32±0.31 13.87 ＜0.000 1 1.42±0.39 18.27 ＜0.000 1觀察組55 1.00±0.35 1.00±0.29

2.2 觀察組中cortactin及FASCIN蛋白的半定量表達與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系 觀察組中cortactin及FASCIN的表達與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤、雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)的表達密切相關(guān)。見表2。

2.3 觀察組中cortactin及FASCIN表達的相關(guān)性 經(jīng)線性相關(guān)分析顯示，觀察組中cortactin及FASCIN的表達呈正相關(guān)性(r=-0.46，P=0.012 5)。

2.4 觀察組中cortactin及FASCIN的表達及生存的相關(guān)性 隨訪時間為8～60個月，平均29.7個月。經(jīng)生存分析顯示觀察組中cortactin(P=0.021 8)及FASCIN(P=0.013 0)的表達與生存時間相關(guān)，即cortactin和FASCIN高表達的患者預后差。

表2 觀察組中cortactin及FASCIN蛋白的半定量表達與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系(±s)

表2 觀察組中cortactin及FASCIN蛋白的半定量表達與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系(±s)

臨床病理特征n cortactin t值 P值 FASCIN t值 P值脈管浸潤無 55 1.23±0.24 7.65 0.019 2 1.31±0.37 7.12 0.024 1有 40 1.44±0.31 1.57±0.35淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無 53 1.21±0.23 7.13 0.018 2 1.32±0.29 7.46 0.019 9有 42 1.46±0.19 1.55±0.38 ER+ 50 1.25±0.23 6.57 0.020 1 1.33±0.37 5.43 0.039 2- 45 1.40±0.25 1.50±0.35 PR+ 52 1.23±0.27 6.86 0.023 1 1.21±0.31 9.85 0.009 2- 43 1.43±0.25 1.54±0.34

3 討論

Cortactin的結(jié)構(gòu)有特殊性，cortactin的NTA區(qū)域可與肌動蛋白相關(guān)蛋白(ARP)復合物形成相互作用，中間的序列參與ARP復合物的激活，羥基端SH3區(qū)域在大多數(shù)細胞內(nèi)與細胞膜的微線網(wǎng)絡關(guān)系密切〔6〕。Cortactin可以引起細胞骨架的改變。Cortactin的過表達時，可以有效增加細胞的運動和遷移能力，對腫瘤的侵襲有重要影響。Cortactin突變時，可以引起細胞形態(tài)和運動狀態(tài)的改變，如細胞變圓、細胞發(fā)生堆疊，此時cortactin可以引起微絲組裝活動的改變〔7〕。也有觀點認為cortactin的表達能針對腫瘤細胞的發(fā)展過程，此時主要影響分裂增殖和侵襲轉(zhuǎn)移〔8，9〕。Cortactin及相關(guān)肌動蛋白骨架在卵母細胞分裂過程中發(fā)揮作用，此機制與紡錘體定位有關(guān)。Cortactin在卵母細胞核內(nèi)的紡錘體的突起與肌動蛋白結(jié)合而形成帽狀結(jié)構(gòu)，引起染色質(zhì)向細胞周圍移動，有效地實現(xiàn)細胞的分裂〔10，11〕。FASCIN基因編碼的FASCIN蛋白是一種肌動蛋白結(jié)合蛋白，可以通過增加細胞膜突起、改變細胞與細胞外基質(zhì)的黏附作用以及通過細胞信號轉(zhuǎn)導通路促進腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。FASCIN在正常的乳腺上皮中低表達，在腫瘤進展時表達增強。有研究顯示FASCIN蛋白表達的增加，細胞膜表面突起增多、細胞分化程度降低、細胞增生能力增強、肌動蛋白的骨架重建，細胞的運動功能增強，即FASCIN通過參與細胞突起形成來促進腫瘤細胞的進展〔12〕。也有觀察認為FASCIN是一種潛在的腫瘤轉(zhuǎn)移促進基因，可能與其強效地促進腫瘤細胞的遷移有關(guān)〔1〕。

本實驗提示cortactin和FASCIN對腫瘤的發(fā)生具有明顯的促進作用，F(xiàn)ASCIN對腫瘤的作用與可能與促進增殖有關(guān)〔13〕。cortactin和FASCIN二者可能具有協(xié)同作用。cortactin和FASCIN的協(xié)同作用與二者同為細胞骨架相關(guān)蛋白有關(guān)，也與二者共同促進腫瘤細胞的遷移有關(guān)〔14〕。cortactin和FASCIN均有促進腫瘤細胞外基質(zhì)降解的作用，使限制腫瘤細胞遷移的屏障丟失，為腫瘤細胞轉(zhuǎn)移提供直接的條件。cortactin和FASCIN高表達也可能是通過影響細胞支架結(jié)構(gòu)和整合素介導的信號傳遞，參與的血管發(fā)生的激活階段有關(guān)。cortactin和FASCIN高表達時提示腫瘤進展，尤其是提示腫瘤的活動性增強、轉(zhuǎn)移能力增強。由于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤、ER、PR的表達在常規(guī)病理診斷及臨床觀察中均為與預后相關(guān)的密切指標，因此聯(lián)合檢測cortactin和FASCIN的表達可能和乳腺癌的預后相關(guān)，而生存分析直接證實了此結(jié)論。

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