齊朝陽 高宇琳 黎琳歡 陳艷 曾鴻 羅睿玲

妊娠高血壓疾病是妊娠產(chǎn)科特有的并發(fā)癥，該病嚴(yán)重影響母嬰健康，是孕產(chǎn)婦和圍產(chǎn)兒發(fā)病率和死亡率增高的主要原因之一。國內(nèi)發(fā)病率為9.4%，國外發(fā)病率為7%～12%[1]。近年來有研究發(fā)現(xiàn)滋養(yǎng)層細(xì)胞侵蝕缺陷，尤其是血管重塑障礙是妊娠高血壓疾病的主要發(fā)病機(jī)制[2]。本研究試驗(yàn)通過檢測各組妊娠高血壓疾病胎盤的CD31的表達(dá)情況及微血管密度（MVD）測定，以期探討胎盤血管病變與妊娠高血壓疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2008年-2012年住院孕婦149例，年齡20～31歲，孕周37～41周，均無其他產(chǎn)科并發(fā)癥及其他原發(fā)性內(nèi)科疾病。其中正常妊娠對照組29例，試驗(yàn)組輕度子癇前期、重癥子癇前期、子癇、HELLP綜合征各30例，其診斷標(biāo)準(zhǔn)參照豐有吉主編的統(tǒng)編教材《婦產(chǎn)科學(xué)》第二版[1]，各組病例均經(jīng)剖腹產(chǎn)結(jié)束分娩的初產(chǎn)婦，術(shù)前均未進(jìn)入產(chǎn)程。

1.2 標(biāo)本收集及處理 胎盤娩出后立即從胎盤中央切取全層胎盤組織，分成4個(gè)組織塊，大小約1.5 cm×1.5 cm×0.3cm，再入中性甲醛固定24h，石蠟包埋切片，HE染色，鏡下觀察每例切片，再選取一塊母體面完整、無明顯梗死、無纖維素沉積及出血的組織蠟塊做免疫組化實(shí)驗(yàn)。

1.3 免疫組化染色 鼠抗人單克隆抗體CD31抗體及二抗均購于福建邁新公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明書指導(dǎo)步驟進(jìn)行染色。所有組織蠟塊5μm層厚切片，常規(guī)脫蠟至水，3% H2O215min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，置入預(yù)熱到95℃的EDTA中加熱15min，室溫中冷卻20min后洗滌。滴加一抗CD31后濕盒中孵育，在37℃恒溫箱2h，PBS充分洗滌（含吐溫20，pH7.2），滴加二抗，溫室孵育30min，PBS充分洗滌，滴加增強(qiáng)劑，溫室孵育10min，PBS充分洗滌，DAB顯色。蘇木精復(fù)染，鹽酸乙醇分化，脫水、透明、水溶性樹脂封片，光鏡下觀察。以毛細(xì)胞血管瘤陽性作對照，PBS代替一抗作陰性對照。

1.4 結(jié)果判定 MVD計(jì)數(shù)判斷標(biāo)準(zhǔn)：在100倍光鏡下挑選微血管分布最高密度區(qū)域，再于400倍光鏡下觀察5個(gè)視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野內(nèi)的微血管數(shù)目，取平均值作為MVD值。任何染成棕黃色且與相鄰微血管明顯分離的血管內(nèi)皮細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞簇均視為獨(dú)立的微血管，是否有血管腔都不作為計(jì)數(shù)微血管的必要條件，分支血管結(jié)構(gòu)只要不相連也視為另一個(gè)微血管，但管腔>8個(gè)紅細(xì)胞面積或血管周圍有平滑肌包繞不納入計(jì)數(shù)范圍。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理所有數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用（）表示，各組間比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 組織病理學(xué) 對照組胎盤發(fā)育成熟，終極絨毛體積小、數(shù)量多，間質(zhì)血管多。妊娠期高血壓疾病中：胎盤發(fā)育不良及不成熟，末梢絨毛數(shù)量減少，間質(zhì)纖維化、血管減少，基底膜增厚，合體滋養(yǎng)結(jié)節(jié)明顯增多，伴有梗死，血管內(nèi)可見血栓形成，病變以重度子癇前期、妊娠子癇、HELLP綜合期等更明顯。見圖1、圖2。

圖1 妊娠高血壓胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞結(jié)節(jié)增多(HE,40×10)

圖2 妊娠高血壓胎盤絨毛纖維化，血管減少(HE,10×10)

2.2 CD31表達(dá)情況 在胎盤絨毛及底蛻膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞均有表達(dá)。

2.3 MVD值比較 各試驗(yàn)組胎盤MVD值見表1。除輕度子癇前期組與對照組比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外，其它各組明顯低于對照組（P<0.01）；重度子癇組與輕度子癇組比（P<0.01），妊娠子癇組與重度子癇組（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見圖3、圖4及表1。

圖3 正常胎盤絨毛CD31表達(dá)及MVD (SP,40×10)

圖4 妊娠高血壓胎盤絨毛CD31表達(dá)及MVD(SP,40×10)

表1 各組胎盤絨毛微血管密度測定值（n）

3 討論

妊娠高血壓疾病的病因目前尚不清楚。但近年來實(shí)驗(yàn)表明：妊娠早期足夠的胚胎侵入、血管重塑對于正常妊娠的維系起著關(guān)鍵性作用；妊娠高血壓疾病滋養(yǎng)細(xì)胞侵入子宮內(nèi)膜過淺；尤其是血管重塑障礙是其主要發(fā)病機(jī)制[2]。本試驗(yàn)引入了胎盤MVD值，它是評價(jià)血管生成的指標(biāo)，通過計(jì)算各組妊娠高血壓疾病患者及正常對照組孕婦胎盤中MVD的數(shù)值來反映胎盤微血管的發(fā)育情況。CD31是血小板-內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子-1（plataeletendochelial cell adhesion molecule.PECAM-1）,屬于免疫球蛋白超家族成員，主要表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、單核細(xì)胞、中性白細(xì)胞、幼稚的CD8+T細(xì)胞及NK細(xì)胞表面[3]。近年研究發(fā)現(xiàn)CD31一種新型的微血管標(biāo)記物，在顯示血管內(nèi)皮細(xì)胞的特異性優(yōu)于其它內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物[4]。故本試驗(yàn)選用CD31標(biāo)記胎盤微血管的內(nèi)皮細(xì)胞，測出MVD值。試驗(yàn)結(jié)果：雖然輕度子癇前期MVD為（219.33±35.52）與正常組織（233.75±39.56）比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但重度子癇組為（154.25±49.9）；妊娠子癇組為（126.67±43.57）；HLEEP綜合征組為（158.32±40.12）與正常組織比較明顯減少，具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而且重度子癇組與輕度子癇組比（P＜0.01），妊娠子癇組與重度子癇組（P＜0.05），均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。本試驗(yàn)結(jié)果表明妊娠子癇隨著輕度子癇前期、重度子癇前期、妊娠子癇疾病的發(fā)展，其MVD值也逐漸降低。與Coelho[5]等研究發(fā)現(xiàn)的子癇前期胎盤血管內(nèi)皮損傷及血管減少，及國內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)告的重度子癇前期胎盤MVD值降低相符[6-7]。亦直接證實(shí)了妊娠高血壓疾病患者胎盤血管形成障礙和生長受限，造成了胎盤血管網(wǎng)絡(luò)生長發(fā)育受限，影響胎盤床血管重塑[7]。對照組胎盤組織病理學(xué)：胎盤發(fā)育成熟，終極絨毛體積小數(shù)量多，間質(zhì)血管多；妊娠高血壓疾病胎盤發(fā)育不良和/或發(fā)育不成熟，終極絨毛數(shù)量及血管減少，間質(zhì)纖維化，基底膜增厚，合體滋養(yǎng)結(jié)節(jié)明顯增多伴有梗死，血管內(nèi)可見血栓形成，病變以重度子癇前期、妊娠子癇、HELLP綜合期等更明顯。說明胎盤病變與胎盤缺血缺氧互為因果[6]，為妊娠高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。

總之，筆者認(rèn)為胎盤血管形成減少與妊娠期高血壓疾病密切相關(guān)，并隨著疾病的進(jìn)展，胎盤血管形成減少更明顯，為妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展提供了理論依據(jù)。

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