李志軍，馬冰宇

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001)

哮喘是一種慢性氣道炎癥，常有肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、和T淋巴細(xì)胞等多種炎性細(xì)胞的參與，發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚。本實(shí)驗(yàn)采用抗支口服液對(duì)模型大鼠進(jìn)行藥物干預(yù)，測(cè)量大鼠血清中IgE和ECP前后含量變化情況，從而對(duì)抗支口服液治療哮喘的機(jī)制進(jìn)行探討。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

成年Wistar大鼠60只，體質(zhì)量180～230g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為空白組、模型組、地塞米松組(以下簡(jiǎn)稱西藥組)、抗支口服液高、中、低劑量組。

1.2 藥品和試劑

抗支口服液(組成:麻黃、石膏、杏仁、黃芩、射干、僵蠶、地龍、炙百部、川貝母、桑白皮、虎杖、蘆根、甘草，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院制劑室生產(chǎn));大鼠IgE試劑盒(北京晶美生物制劑公司);ECP大鼠血清試劑盒(美國Sigma公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 哮喘動(dòng)物模型的建立

實(shí)驗(yàn)大鼠經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后，除空白組外，其余大鼠分別于實(shí)驗(yàn)的第1天和第8天給予腹腔內(nèi)注射10%卵蛋白、氫氧化鋁混合液1ml，與兩側(cè)腰部各取1點(diǎn)，每次每點(diǎn)皮下注射0.5ml，使大鼠致敏。于第15天起，用40ml 3%的卵蛋白霧化吸入激發(fā)大鼠哮喘發(fā)作，其霧化流量為5ml/min，每次20min，隔日1次，共4周。激發(fā)成功標(biāo)志為大鼠出現(xiàn)呼吸加快、口唇發(fā)紺、腹肌痙攣，點(diǎn)頭呼吸及站立不穩(wěn)等表現(xiàn)。以生理鹽水代替卵蛋白對(duì)空白組進(jìn)行腹腔注射及霧化吸入。

2.2 動(dòng)物分組及給藥

適應(yīng)性飼養(yǎng)后，將60只實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、西藥地塞米組(簡(jiǎn)稱0.5mg/kg/d)、抗支口服液高劑量組(40g/kg/d)、抗支口服液中劑量組(20g/kg/d)、抗支口服液低劑量組(100/kg/d)每組10只。對(duì)各組大鼠分別標(biāo)號(hào)，組間平均體重差控制在＜20g，進(jìn)行藥物灌胃干預(yù)實(shí)驗(yàn)。各治療組均從第1次哮喘激發(fā)開始，每日灌胃給藥，直至處死前，連續(xù)4周，空白對(duì)照組用等量生理鹽水灌胃，每5天復(fù)查動(dòng)物體質(zhì)量。

2.3 標(biāo)本采集 于末次給藥2h提取血標(biāo)本，頸靜脈采血，靜置4h，然后以3 000r/min的轉(zhuǎn)速離心10min，取上層血清低溫放置備用。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 17.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)或方差分析，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.4.1 抗支口服液對(duì)IgE的影響 結(jié)果見表1。

表1 給藥4周后各組IgE情況(±s)

表1 給藥4周后各組IgE情況(±s)

注:與模型組相比，＊＊P＜0.01;各劑量組與高劑量組比較，#P＜0.05。

組別 n IgE(Iu/ml)空白組 8 0.0230 ±0.0068＊＊模型組 8 0.0784 ±0.0114西藥組 8 0.0250 ±0.0095＊＊高劑量組 8 0.0256 ±0.0094＊＊中劑量組 8 0.0313 ±0.0113＊＊低劑量組 8 0.0367 ±0.0101＊＊#

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組與空白組相比，IgE含量極顯著增高(P＜0.01);與模型組相比，西藥及抗支口服液高、中、低治療組 IgE含量均極顯著降低(P＜0.01)?？怪Э诜焊摺⒅袆┝拷M與西藥組之間無顯著差異，低劑量組與西藥組有明顯差異。提示抗支口服液能明顯降低哮喘大鼠血清IgE含量，尤其是中、高劑量組。

灌胃劑量不同的各組間比較，高劑量組和低劑量組之間有顯著差異(P＜0.05)，而高劑量組與中劑量組之間無顯著差異(P＞0.05)。提示抗支口服液降低哮喘大鼠血清IgE的作用與劑量相關(guān)，高劑量組和中劑量組作用相當(dāng)，明顯強(qiáng)于低劑量組。

2.4.2 抗支口服液對(duì)ECP的影響 結(jié)果見表2。

表2 給藥4周后各組ECP情況(±s)

表2 給藥4周后各組ECP情況(±s)

注:與模型組相比，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;各劑量組與低劑組比較，#P＜0.05。

組別 n ECP(ng/ml)空白組 8 34.13 ±6.85＊＊模型組 8 44.63 ±8.88西藥組 8 35.13 ±6.40＊＊高劑量組 8 35.63 ±7.33＊＊#中劑量組 8 36.00 ±8.86＊＊#低劑量組 8 42.00 ±7.50*

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組與空白組相比，ECP含量極顯著增高(P＜0.01);與模型組相比，除低劑量組外，西藥及抗支口服液高、中劑量組ECP含量均顯極顯著降低(P＜0.01)?？怪Э诜焊摺⒅袆┝拷M與西藥組之間無顯著差異。提示抗支口服ECP液能明顯降低哮喘大鼠血清ECP含量，尤其是中、高劑量組。

灌胃劑量不同的各組間比較，低劑量組無統(tǒng)計(jì)學(xué)治療意義。提示抗支口服液降低哮喘大鼠血清ECP作用與劑量相關(guān)，高劑量組和中劑量組作用相當(dāng)，低劑量組無治療意義。

3 討論

哮喘是一種常見病、多發(fā)病，已成為全球性的社會(huì)衛(wèi)生問題，對(duì)人類的健康構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。哮喘病的病理學(xué)改變以氣道內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞浸潤為主，肥大細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤為輔的慢性氣道炎癥為基本特征，臨床上以氣道炎癥誘發(fā)的氣道高反應(yīng)性和氣道通氣障礙為主要臨床特征。發(fā)病機(jī)制目前尚不完全明確，主要血清學(xué)特征是總IgE水平和特異性IgE水平增高。近年來，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)本病的病因、病機(jī)已深入到分子水平，免疫遺傳學(xué)認(rèn)為，哮喘患者的氣道高反應(yīng)性和氣道炎癥與受基因調(diào)控的血清總IgE和特異性IgE陽性率密切相關(guān)。

氣道的嗜酸性粒細(xì)胞浸潤是哮喘病的特征之一。越來越多的研究表明，嗜酸性粒細(xì)胞是一種特異性的抗原遞呈細(xì)胞，一切速發(fā)型變應(yīng)性疾病的組織和器官的局部以及滲出液中均有大量的嗜酸性粒細(xì)胞出現(xiàn)，成為變應(yīng)性疾病發(fā)作的一個(gè)重要指標(biāo)，在已知嗜酸性粒細(xì)胞胞內(nèi)有許多蛋白顆粒，其中最重要的為嗜酸性陽離子蛋白(ECP)，對(duì)支氣管哮喘的發(fā)作預(yù)后的判斷和藥物療效的評(píng)價(jià)有重要作用，它是嗜酸性粒細(xì)胞活化的一個(gè)指標(biāo)［1］。歷代醫(yī)家對(duì)哮喘病因病機(jī)的認(rèn)識(shí)多以痰論，痰液是津液代謝失常的病理產(chǎn)物，人體津液代謝主要涉及肺的輸布、脾的運(yùn)化、腎的氣化功能的協(xié)調(diào);外感六淫，飲食不當(dāng)皆可導(dǎo)致臟腑功能失調(diào)，肺不能布散津液，脾不能運(yùn)輸水谷精微，腎不能蒸化水液，都能導(dǎo)致津液凝聚成痰;痰既是病理產(chǎn)物又是內(nèi)源性致病因素，痰飲伏肺病程纏綿，外邪引動(dòng)伏痰則引起哮喘急性發(fā)作［2］?？怪Э诜河陕辄S、石膏、杏仁、黃芩、射干、僵蠶、地龍、炙百部、川貝母、桑白皮、虎杖、蘆根、甘草共13味組成。麻黃、石膏、蘆根清熱宣肺;杏仁、炙百部、川貝母化痰止咳;黃芩、射干、虎杖清熱解毒;僵蠶、地龍解熱平喘。諸藥合用，使肺熱邪毒以祛除，咳、喘、痰諸癥得以改善，是標(biāo)本兼治之劑。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，抗支口服液能明顯降低哮喘大鼠血清中IgE和ECP含量，中、高劑量組較低劑量組效果更明顯。由此可見，抗支口服液對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠哮喘病具有較好的治療作用，為闡明抗支口服液治療哮喘病的機(jī)理提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］Venge P.Serum measurements of eosinophil cationic protein(ECP)in bronchia lasthma［J］.Clin Exp Allergy，1993，23(Supp12):3 －7.

［2］謝鳴.中醫(yī)方劑現(xiàn)代研究［M］.北京:學(xué)苑出版社，1997:63.