徐 博 安 英 沈 楠 趙麗晶 陳 雪 吳畏難 陳建光

阿爾茨海默病病理機制復(fù)雜，更缺乏有效的治療措施已成為老年人致殘最嚴重的疾病之一，并且隨著人口的老齡化，患者日益增多，將給家庭和社會帶來沉重的負擔(dān)[1]。因此對老年性癡呆藥物的尋求和研究是當前醫(yī)學(xué)界的一個緊迫問題。學(xué)習(xí)記憶的“痕跡論”表明，記憶獲得、鞏固、再現(xiàn)組成了記憶的全過程[2]。本文應(yīng)用亞硝酸鈉造成小鼠記憶鞏固障礙，從而觀察北五味子醇提物（Schisandra Chinensis baill extract,SCE）對記憶障礙的改善作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料實驗所用動物為 60只清潔級健康昆明種小白鼠，雌雄兼用，體重（20±2）g，實驗動物許可證號為SCXK-（吉）2003～2004，由長春高新醫(yī)學(xué)動物實驗研究中心提供；實驗所用試劑分別為 SCE（北華大學(xué)林學(xué)院）；亞硝酸鈉，長春市試劑廠，批號：930220；腦復(fù)康，天津金世制藥有限公司，批號：20060661；超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒，南京建成生物工程研究所批號：20080417；丙二醛（MDA）含量測定試劑盒，南京建成生物工程研究所批號：20080417；實驗所用儀器為小鼠避暗測試儀（成都泰盟科技有限公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組、造模及給藥[3-4]將篩選的昆明種小鼠60只，雌雄各半，隨機均分成6組，對照組、模型組、腦復(fù)康組、SCE低劑量組、SCE中劑量組、SCE高劑量組。對照組與模型組給予蒸餾水灌胃，腦復(fù)康組給予腦復(fù)康0.3g/kg·d，SCE低、中、高劑量分別給予SCE 0.15g/kg、0.30g/kg、0.60g/kg連續(xù)灌胃給藥（每只小鼠按0.1ml/10g灌胃）15d。在第15天灌胃給藥1h后，進行避暗實驗。將小鼠面部背向洞口放入明室，適應(yīng)環(huán)境5min，然后立即通以36V交流電，打開隔板，小鼠穿過洞口進入暗室受到電擊，記時自動停止。取出小鼠，記錄小鼠從放入明室至進入暗室遇到電擊所需時間，即潛伏期。實驗完畢除空白對照組外，其余各組立即皮下注射（sc）亞硝酸鈉120mg/kg，即破壞記憶的鞏固，對照組注射同體積的生理鹽水。在第16天重做測試，記錄小鼠從放入明室至進入暗室遇到電擊所需時間即潛伏期和5min內(nèi)受電擊次數(shù)。

1.2.2 樣本取材及測定實驗第18天稱重，快速剝離腦組織，用電子天平稱腦組織濕重后用錫箔紙包好，置-80℃低溫冰箱保存，待測各種生化指標。測定時，按重量:體積=1:9的比例加入預(yù)冷的生理鹽水，用組織勻漿機充分勻漿，制成10%的腦組織勻漿，用微量移液器轉(zhuǎn)移至離心管中，3000r/min離心10min。測定時取上清液進行超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量的測定。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理本文中數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差（±s）表示，經(jīng)SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件單因素方差分析（One-way ANOVA）中的Dunnett's Test處理。

2 結(jié)果

實驗結(jié)果如表1～3所示。

3 討論

實驗表明，在第二次記憶測試中，SCE中、高劑量組較模型組潛伏期延長，錯誤次數(shù)減少，表明SCE可以改善記憶鞏固障礙模型小鼠的記憶能力。SCE可增高抗氧化酶 SOD的活力，抑制脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的增多，從而減少氧自由基的損傷，加速體內(nèi)自由基的清除，并且隨著 SCE劑量的增加，此種變化越明顯，且中藥SCE中、高劑量組抗氧化作用明顯高于低劑量組。提示，SCE具有清除自由基，延緩細胞老化，抑制細胞退化和變性，改善機體的結(jié)構(gòu)和功能，提高機體生命力的作用。

近年自由基學(xué)說與AD的關(guān)系越來越引起學(xué)者的關(guān)注，被認為是AD的一個重要致病因素，而且大量實驗也證明抗氧化劑對AD的發(fā)病有保護和延緩進程的作用[5]。SOD對機體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用，此酶能清除超氧陰離子自由基，保護細胞免受損傷。MDA是氧自由基與生物膜多聚不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，其產(chǎn)生量與氧自由基的量相平行，因而測定MDA能反映氧自由基的水平，間接反映出細胞損傷的程度。MDA的測定常常與SOD的測定相互配合，SOD活力的高低間接反應(yīng)了機體清楚氧自由基的能力，而MDA的高低又間接反應(yīng)了機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度。

本實驗為臨床前期研究 SCE藥物治療老年癡呆癥、改善學(xué)習(xí)和記憶功能提供了有價值的實驗數(shù)據(jù)，但要獲得更有價值的治療藥物，還需要做大量艱苦工作。相信隨著時間的推移和對SCE改善學(xué)習(xí)記憶、防治衰老和老年癡呆癥的研究進一步深入，SCE相關(guān)藥物及其保健產(chǎn)品的研發(fā)將會取得突破。

表1 SCE對亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙模型小鼠記憶能力的影響(避暗法)[(±s),n=10]

表1 SCE對亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙模型小鼠記憶能力的影響(避暗法)[(±s),n=10]

注：與對照組比較#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01

分組 動物數(shù) 潛伏期(s) 錯誤次數(shù)(n)對照組 10 125.68±30.08 3.50±1.29模型組 10 49.35±32.88## 7.83±1.72##腦復(fù)康組 10 99.71±21.95** 3.43±1.40**SCE低劑量組 10 75.59±33.55 6.00±1.51 SCE中劑量組 10 88.38±28.83* 5.00±1.41**SCE高劑量組 10 104.31±30.09** 3.57±2.37**

表2 SCE對亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙模型小鼠腦組織SOD活性的影響[(±s),n=10]

表2 SCE對亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙模型小鼠腦組織SOD活性的影響[(±s),n=10]

注：與對照組比較#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01

分組 動物數(shù) SOD(U/mgprot)對照組 10 78.97±10.50模型組 10 44.08±13.72##腦復(fù)康組 10 63.90±9.00**SCE低劑量組 10 49.70±7.56 SCE中劑量組 10 58.79±10.07*SCE高劑量組 10 78.24±15.55**

表3 SCE對亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙模型小鼠腦組織MDA含量的影響[(±s),n=10]

表3 SCE對亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙模型小鼠腦組織MDA含量的影響[(±s),n=10]

注：與對照組比較#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01

分組 動物數(shù) MDA(nmol/mgprot)對照組 10 29.93±10.91模型組 10 74.24±29.89##腦復(fù)康組 10 32.60±26.38*SCE低劑量組 10 49.21±24.97 SCE中劑量組 10 36.77±25.16*SCE高劑量組 10 30.82±12.52**

[1]趙麗波,付宏娟,張健莉.阿爾茨海默病發(fā)生機制的研究進展[J].中國老年學(xué)雜志,2011,31(24):4997-4998.

[2]林途春,閏也.阿爾茨海默病發(fā)病機制研究的現(xiàn)狀與進展[J].遼寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2009,30(6):558-560.

[3]鄒宇曉,廖森泰,吳娛明,等.金針菇多糖提取物對記憶障礙模型大鼠、小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響[J].中國食品學(xué)報,2010,10(1):26-29.

[4]羅建,王曄,程薇波.磷脂酰膽堿對小鼠記憶障礙模型的影響[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2011,38(3):446-448.

[5]林玉坤,曾園山,屈澤強,等.氧化應(yīng)激與阿爾茨海默病[J].解剖學(xué)研究,2009,31(1):67-70.