何其通，余晉林，郭如華，羅益紅

（廣東省佛山市中心血站 528000）

輸血相關(guān)移植物抗宿主?。═A-GVHD）是輸血反應(yīng)中最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，因其臨床表現(xiàn)缺乏特異性，易漏診和誤診并且病死率高達(dá)80%～90%，目前該病主要以預(yù)防為主［1］。TA-GVHD的主要原因是與輸入血液（成分）中含有活性的T淋巴細(xì)胞有關(guān)。國(guó)外從20世紀(jì)70年代就發(fā)現(xiàn)γ、X射線可以有效破壞淋巴細(xì)胞活性，從而射線輻照血液被認(rèn)為是一種預(yù)防TA-GVHD的惟一有效、可靠的方法。怎樣的輻照劑量可以最大限度的滅活淋巴細(xì)胞而又可以最大限度的保持血小板的功能是一個(gè)值得探討的課題。本文就不同劑量的γ射線輻照單采血小板，對(duì)血小板的功能及臨床應(yīng)用效果進(jìn)行了觀察，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 儀器 血液輻照儀Gammacell GC-3000Elan-I加拿大諾迪安公司，放射源為137Cs，活度為50.7E＋12Bq。流式細(xì)胞儀FACS Cabibur美國(guó)BD公司。顯微鏡Olympus CX32RTSF日本Olympus公司。

1.2 試劑 植物血凝素（PHA）、淋巴細(xì)胞分離液、瑞氏染液、CD41a、CD62p。

1.3 血液標(biāo)本的制備輻照 將單采血小板分裝于5個(gè)血袋中，分別作為未輻照組（對(duì)照組）和25、30、35、40Gy不同劑量輻照組。輻照組樣本分不同劑量置于血液輻照儀中輻照。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 將上述經(jīng)輻照前后的血小板標(biāo)本經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液分離出淋巴細(xì)胞后，用植物血凝素（PHA）刺激T淋巴細(xì)胞，使其轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，經(jīng)瑞氏染色后用顯微鏡分別計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)化為母細(xì)胞的百分率，選取轉(zhuǎn)化率為零的起始輻照劑量為實(shí)驗(yàn)劑量。取80份用實(shí)驗(yàn)劑量輻照前后的血小板按文獻(xiàn)［2］的方法用CD41a、CD62p標(biāo)記后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其陽(yáng)性率。

1.5 臨床分組 選取40例接受化療的急性白血病患者隨機(jī)分為對(duì)照組和治療組，其中對(duì)照組20例，男13例，女7例，年齡17～49歲，中位數(shù)年齡32.5歲，其中急性淋巴細(xì)胞性白血病12例，急性粒細(xì)胞性白血病5例，急性單核細(xì)胞性白血病3例；治療組20例，男15例，女5例，年齡16～51歲，中位數(shù)年齡29.8歲，其中急性淋巴細(xì)胞性白血病8例，急性粒細(xì)胞性白血病5例，急性單核細(xì)胞性白血病7例。輸注前血小板計(jì)數(shù)均小于20×109／L，并伴有不同程度的出血表現(xiàn)。治療組病例輸注1個(gè)治療量經(jīng)γ射線輻照單采血小板，對(duì)照組病例輸血1個(gè)治療量單采血小板。記錄患者輸前的血小板計(jì)數(shù)和輸血后1h血小板計(jì)數(shù)。

1.6 臨床療效判斷 血小板糾正增加指數(shù)（CCI）＝（輸后血小板計(jì)數(shù)－輸前血小板計(jì)數(shù)）×體表面積（m2）／輸入血小板總數(shù)（1011），CCI＞10為輸注有效［3］。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，兩計(jì)量資料的比較用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料率的比較用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

表1 不同劑量照射前后淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化結(jié)果 （n＝12）

由表1可知，經(jīng)過(guò)4種不同的劑量輻照后，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率均有顯著性變化，劑量為35Gy時(shí)，淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率開(kāi)始為0，說(shuō)明35Gy能使淋巴細(xì)胞全部滅活。

表2 35Gyγ射線輻照前后血小板CD41a、CD62p陽(yáng)性率的比較（n＝80）

表3 觀察組和對(duì)照組血小板輸注有效率的比較

3 討 論

TA-GVHD是因?yàn)檩斎氲难褐蠧D4輔助T淋巴細(xì)胞識(shí)別宿主表達(dá)的異源性主要和次要組織相容性抗原（MHC）而激活，進(jìn)而分泌可溶性細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素-2（IL-2），促使宿主抗原特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞活化增殖，從而形成效應(yīng)細(xì)胞，誘導(dǎo)TA-GVHD的發(fā)生［4－5］。大量的實(shí)驗(yàn)報(bào)道證實(shí)了輻照可以有效地誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的凋亡［6－7］。

CD41a、CD62p是血小板功能的檢測(cè)指標(biāo)，檢測(cè)CD41a可反映血小板的聚集功能，檢測(cè)CD62p可知血小板是否處于激活狀態(tài)，也反映血小板的釋放功能［8］。CD62p在活化和非活化血小板間差別最顯著，而且不被血漿蛋白所掩蓋，不隨時(shí)間的推移而在活化血小板表面消失，是目前所知反映血小板活化與釋放最特異性的標(biāo)志物［9］。

血液制品的最佳輻照劑量以既能滅活淋巴細(xì)胞又能維持其他血液成分的功能與活力和最小的損傷為選擇。早期國(guó)外推薦劑量為15Gy，后來(lái)分別報(bào)道了接受15～20Gy輻照血液后仍產(chǎn)生TA-GVHD的報(bào)道［10］。FDA把輻照中心靶劑量定為25Gy，其他部位不得低于15Gy，歐洲學(xué)術(shù)委員會(huì)制定的輻照劑量為25～40Gy。本研究探討了不同劑量輻照后淋巴細(xì)胞的滅活和對(duì)血小板功能的影響，結(jié)果表明劑量達(dá)到35Gy時(shí)，對(duì)血小板功能沒(méi)有明顯的損傷，可以有效地誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的凋亡，減少活性淋巴細(xì)胞的數(shù)量，起到預(yù)防TA-GVHD的發(fā)生的效果，是一個(gè)比較適合的輻照劑量。

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