王寅

角叉菜膠誘導(dǎo)的血栓形成模型的動(dòng)物差異性比較

王寅

目的比較不同品系小鼠采用角叉菜膠制備血栓形成模型的差異。方法分別選用昆明(KM) 和ICR兩種小鼠進(jìn)行比較。其中模型組小鼠皮下注射0.2%角叉菜膠40 mg/kg，記錄小鼠注射角叉菜膠24 h、48 h和72 h后小鼠黑尾發(fā)生率。對(duì)照組給予同體積生理鹽水。結(jié)果造模在2種小鼠均可誘導(dǎo)血栓形成模型,在部分動(dòng)物的尾部均可見(jiàn)清晰的血栓，但I(xiàn)CR小鼠成模率顯著高于KM種小鼠。結(jié)論皮下注射角叉菜膠在 2 種動(dòng)物上均可成功地制備出血栓形成模型,但不同種屬的動(dòng)物成模率可能有所不同，其及機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

血栓形成; 動(dòng)物模型; 動(dòng)物差異

目前不同品系的大鼠如Wistar和SD 及不同品系的小鼠如KM和ICR用于制備角叉菜膠誘導(dǎo)的尾部血栓模型均有報(bào)道，其中用小鼠制備血栓模型,方法更為簡(jiǎn)便、成本更低廉。搞清不同種屬小鼠對(duì)角叉菜膠制備血栓模型不同反應(yīng)性的差異，對(duì)于血栓模型研究中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇具有重要意義。本研究選取了國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)采用的昆明種KM小鼠和ICR小鼠進(jìn)行比較研究。由于血栓的主要客觀指標(biāo)如血液流變學(xué)和凝血功能的檢測(cè)需要大量的血液,而小鼠的血液量較少,難以檢測(cè)這些指標(biāo),故本研究將不比較反映血栓指標(biāo)的血液流變學(xué)和凝血指標(biāo)，重點(diǎn)研究血栓形成率是否有一定的差異。

1 資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明小鼠和ICR小鼠各40只，雄性，體重18-22 g。動(dòng)物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施均由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK-(軍)-2007-004。

1.2藥品與試劑 κ-型角叉菜膠(上海北連食品科技有限公司惠贈(zèng)，批號(hào)201045：純度95.00%)

1.3儀器與器材1 ml注射器

2 方法

2.1造模方法 動(dòng)物購(gòu)回給以基礎(chǔ)飼料適應(yīng)7 d，根據(jù)體重隨機(jī)分組，每組20只，分為對(duì)照組和模型組。造模前一天晚上適當(dāng)禁食。各組小鼠皮下注射0.2%角叉菜膠40 mg/kg，對(duì)照組小鼠灌皮下予等體積的注射用生理鹽水。記錄小鼠注射角叉菜膠24 h、48 h和72 h后小鼠黑尾發(fā)生率[1～6]。

3 結(jié)果

3.1一般情況觀察 KM和ICR小鼠造模后狀態(tài)良好，無(wú)行為異常。

3.2不同動(dòng)物的血栓形成情況 于試驗(yàn)的24 h、48 h、72 h時(shí)間點(diǎn)測(cè)量造模動(dòng)物尾部的血栓長(zhǎng)度。2 種動(dòng)物均可形成明顯的尾部血栓。ICR小鼠形成的血栓均較長(zhǎng),KM小鼠形成的血栓相對(duì)較短,ICR小鼠成膜數(shù)量均多于KM小鼠。各種動(dòng)物模型組與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果表明2 種動(dòng)物均能成功地形成血栓模型。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同動(dòng)物血栓形成情況(%)

注：***P<0.001 VS control group,**P<0.01 VS control group,*P<0.05 VS control group

4 討論

角叉菜膠是從海藻中提取的硫酸多糖，可用于制備多種組織炎癥模型，是一種簡(jiǎn)便易行的血栓造模試劑。其機(jī)制為炎癥損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，在IL-1β作用下，導(dǎo)致炎細(xì)胞趨化、浸潤(rùn)，激活外源性凝血系統(tǒng)，造成血栓形成，并在血栓形成后抑制纖溶系統(tǒng)[7]。

角叉菜膠制備尾部血栓形成模型作為一種非手術(shù)方法制備的體內(nèi)血栓模型,可排除手術(shù)暴漏血管形成血栓可能造成的人為干擾[8]，其方法簡(jiǎn)便易學(xué)、操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好，無(wú)需大型儀器和復(fù)雜檢測(cè)手段，目前已經(jīng)成為抗血栓藥物篩選的常用方法。此外，角叉菜膠誘導(dǎo)尾部血栓模型的優(yōu)點(diǎn)是其形成的血栓不需剖殺動(dòng)物通過(guò)肉眼觀察和定量測(cè)定,故該模型適用于各類實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展抗血栓藥物研究。

本研究中所選用KM小鼠、ICR 小鼠小鼠品種。結(jié)果顯示KM 小鼠和ICR小鼠均能成功地造成血栓形成模型,比較而言ICR小鼠成模率顯著高于KM小鼠。梁愛(ài)華等[9]的研究也顯示在角叉菜膠誘導(dǎo)的尾部血栓模型中，ICR小鼠的成模率高于KM小鼠。限于試驗(yàn)條件，本研究沒(méi)有對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模后的血液流變學(xué)和凝血指標(biāo)等進(jìn)行考察， 推測(cè)2種動(dòng)物造模成功率的差異可能是動(dòng)物品種差異引起的。其具體機(jī)制有待后續(xù)進(jìn)一步研究和觀察。

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ComparativestudyofCarrageenaninducedthrombosisanimalmodelinmice

WANGYin.

DepartmentofPharmacy,TheFifthAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China

ObjectiveTo compare the difference between KunMing mice and ICR miced on carrageenan induced tail thrombosis model.MethodsKunMing mice and ICR mice were choosed to compare.Subcutaneous injection of 0.2% carrageenan 40 mg/kg, record black tail incidence of the mouse after injection24 h,48 h and 72 h. The control group was given the same volume of normal saline.ResultsThrombosis model could be induced in the 2 kinds mice, in part, in ICR mice clearly visible thrombus were seen. In addition, in ICR mice model incidence of tail thrombosis was significantly higher than that in KM mice.ConclusionThrombosis model can be successfully induced, by subcutaneous injection of carrageenan in 2 kinds of animal. To discover the mechanism of differ, further research are needed.

Thrombosis; Animal model; Animal differences

450052 鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院藥劑科