白玉香,蘇 興
(1.天津達(dá)仁堂京萬(wàn)紅藥業(yè)有限公司,天津 300112;2.天津和澤干細(xì)胞科技有限公司,天津 300308)
京萬(wàn)紅軟膏由地榆、地黃、冰片、血竭、乳香、沒(méi)藥等30余味中藥制成,具有消腫活血,解毒止痛,去腐生肌的功效。用于治療輕度水、火燙傷,瘡瘍腫痛,創(chuàng)面潰爛等。該藥原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載在衛(wèi)生部《藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十六冊(cè)》中,原標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)為填充柱法測(cè)定冰片含量,使用三氯甲烷作溶劑提取測(cè)定,該溶劑有毒性。為提高該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可控性,本試驗(yàn)采用氣相色譜法測(cè)定方中龍腦的含量,現(xiàn)報(bào)道如下。
儀器:Agilent 6890N氣相色譜儀,ChemStation工作站,檢測(cè)器為FID,載氣為氮?dú)狻IV柱:HP-INNOWAX(30 m ×0.53 mm,1 μm)。乙酸乙酯(色譜純,天津市康科德科技有限公司)。龍腦對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)110881-200706,供含量測(cè)定用),京萬(wàn)紅軟膏(天津達(dá)仁堂京萬(wàn)紅藥業(yè)有限公司,批號(hào) 211761、211762、211763)。
2.1 色譜條件 聚乙二醇20000(PEG-20M)為固定相的毛細(xì)管柱(30 m ×0.53 mm,1 μm),柱溫為 155℃。理論板數(shù)按正十八烷峰計(jì)算不低于10 000。
2.2 提取條件的考查 原標(biāo)準(zhǔn)中使用三氯甲烷作溶劑提取測(cè)定。三氯甲烷是一種神經(jīng)毒、肝毒和腎毒物。主要引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)麻醉,肝和腎細(xì)胞壞死,對(duì)皮膚黏膜有刺激作用,可誘發(fā)細(xì)胞突變,具有高度的胚胎毒性和潛在的致畸性[1]。另外,樣品中基質(zhì)——蜂蠟等易溶于其中,污染色譜柱,故改用乙酸乙酯作為提取溶劑,兩種溶劑提取結(jié)果比較,三氯甲烷溶解度高,乙酸乙酯提取液渾濁。因此,實(shí)驗(yàn)中采用兩種溶劑進(jìn)行了對(duì)比。
取本品約1 g,精密稱(chēng)定,置具塞錐形瓶中,分別精密加入每1 ml含正十八烷0.25 mg的內(nèi)標(biāo)溶液20 ml(溶劑分別為三氯甲烷、乙酸乙酯),密塞,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液測(cè)定,對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果表明,二者對(duì)含量測(cè)定的結(jié)果無(wú)影響(RSD為0.05%),故選用乙酸乙酯作為提取溶劑,見(jiàn)表1。
表1 提取溶劑考查(n=2)
2.3 溶液的制備
2.3.1 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取正十八烷適量,精密稱(chēng)定,加乙酸乙酯制成每1 ml含0.25 mg的溶液,即得。
2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 取龍腦對(duì)照品適量,精密稱(chēng)定,加內(nèi)標(biāo)溶液制成每1 ml含0.3 mg的溶液,即得。
2.3.3 供試品溶液的制備 取本品適量(相當(dāng)于含龍腦約6 mg),精密稱(chēng)定,置具塞錐形瓶中,精密加入內(nèi)標(biāo)溶液20 ml,密塞,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液即得。
2.3.4 陰性樣品溶液的制備 取缺龍腦的陰性供試品,再按“2.3.3”供試品溶液制備方法,制成陰性樣品溶液。結(jié)果顯示,陰性樣品無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。
2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取龍腦對(duì)照品適量,精密稱(chēng)定,加內(nèi)標(biāo)溶液(0.253 06 mg/ml)制成每 1 ml含1.0052 mg的溶液,分別精密吸取1、2、3、5 和 10 ml至10 ml量瓶中,加內(nèi)標(biāo)溶液(0.253 06 mg/ml)至刻度,搖勻,精密量取1 μl,注入氣相色譜儀,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析,測(cè)定各自峰面積,以龍腦對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),龍腦與正十八烷峰面積的比值為縱坐標(biāo),求得回歸方程:Y=3.522 X+0.0189(r=0.999 9)。結(jié)果表明龍腦進(jìn)樣量在0.100 52~1.0052 μg范圍內(nèi)線性良好。
圖1 對(duì)照品(A)樣品(B)陰性樣品(C)氣相色譜圖
2.5 進(jìn)樣精密度試驗(yàn) 取同一批號(hào)(批號(hào)211761)樣品適量(折合成龍腦約6 mg),取1份,精密稱(chēng)定,按照“2.3.3”項(xiàng)下供試品溶液制備操作,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析,連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)得樣品中龍腦含量為6.1282 mg/g,RSD 為 0.21%,符合要求。
2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(批號(hào)211761)樣品適量(折合成龍腦約6 mg),取6份,精密稱(chēng)定,按照“2.3.3”項(xiàng)下供試品溶液制備操作,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析,測(cè)定樣品中龍腦含量。結(jié)果樣品中龍腦平均含量為6.1041 mg/g,RSD 為1.14%,重復(fù)性良好。
2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 此項(xiàng)試驗(yàn)采用每隔2 h測(cè)定一次的方式進(jìn)行試驗(yàn)。取同一批號(hào)(批號(hào)211761)樣品適量(折合成龍腦約6 mg),取1份,精密稱(chēng)定,按照“2.3.3”項(xiàng)下供試品溶液制備操作,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析,分別在0、2、4、6、8 及10 h測(cè)定樣品中龍腦含量,結(jié)果分別為 6.1365、6.1084、6.1365、6.1212、6.1225及6.1442 mg/g,RSD 為 0.21%,表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.8 回收率試驗(yàn) 取同一批號(hào)(批號(hào)211761)樣品適量(折合成龍腦約3 mg),精密稱(chēng)定,置具塞錐形瓶中,精密加入每1 ml含龍腦0.149 64 mg的內(nèi)標(biāo)溶液(0.253 06 mg/ml)20 ml,再按“2.3.3”項(xiàng)下供試品溶液制備操作,制得供回收用供試品溶液,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析,計(jì)算回收率。結(jié)果龍腦平均回收率為100.12%,RSD 為2.01%,結(jié)果見(jiàn)表2,醫(yī)生能及時(shí)知道病人所用的是何種藥物以便進(jìn)行搶救,雙盲試驗(yàn)應(yīng)為每一個(gè)編盲號(hào)設(shè)置一份應(yīng)急信件。其信封上印有藥物臨床試驗(yàn)的名稱(chēng)、藥品編號(hào)和遇緊急情況下揭盲的規(guī)定,信件內(nèi)容包括該編號(hào)的受試者所分入的組別及所放置的具體的藥物名稱(chēng),不良事件發(fā)生后拆閱時(shí)應(yīng)記錄的處理方法、采用藥品的名稱(chēng)、搶救科室、主要負(fù)責(zé)人及應(yīng)立即報(bào)告的單位、地址和聯(lián)系電話等。應(yīng)急信封應(yīng)密封,隨相應(yīng)編號(hào)的臨床研究用藥物發(fā)往各臨床試驗(yàn)中心,由該中心負(fù)責(zé)保存,非必要時(shí)不得拆閱,如果拆閱,需注明拆閱者、中心負(fù)責(zé)人或臨床藥理基地負(fù)責(zé)人、拆閱日期、原因等,并在病例報(bào)告表中記錄。試驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)急信件應(yīng)退還申辦單位[6]。
采用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)藥品的管理,通常采用硬質(zhì)泡沫塑料襯墊包裝,外面采用條形碼標(biāo)簽,臨床試驗(yàn)藥品所含有盲法試驗(yàn)的特殊信息,打印到每一個(gè)試驗(yàn)藥品的標(biāo)簽上并儲(chǔ)存在計(jì)算機(jī)里,以達(dá)到真正的盲法試驗(yàn)?zāi)康模?]。
中藥安慰劑的制作是臨床試驗(yàn)用藥品的難點(diǎn),對(duì)于兒童臨床試驗(yàn),安慰劑對(duì)照的設(shè)計(jì)不但要從科學(xué)性、倫理性方面考慮,還應(yīng)從安慰劑制作水準(zhǔn)方面加以考慮,以保證試驗(yàn)結(jié)果的可信性。隨著國(guó)家加大對(duì)中藥安慰劑研制的力度及計(jì)算機(jī)系統(tǒng)的應(yīng)用,將為兒科藥物研發(fā)逐步與國(guó)際接軌提供有力的支持。
1 張慧芝.安慰劑在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J].藥物研究,2006,3(5):58
2 王雪峰,董丹,劉芳,等.中藥臨床試驗(yàn)研究安慰劑制作初探[J].遼寧中醫(yī)雜志,2003,30(12):966
3 唐旭東,卞立群,高蕊,等.中藥臨床試驗(yàn)安慰劑制作探討[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,2009,29(7):656
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5 關(guān)德祺,丁安偉.中藥臨床試驗(yàn)對(duì)照使用的安慰劑生產(chǎn)工藝質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[D].南京:南京中醫(yī)藥大學(xué).2006:43-46
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