郝鋒

GP73聯(lián)合AFP、VEGF檢測對原發(fā)性肝癌的診斷意義

郝鋒

目的探討高爾基體糖蛋白73(GP73)、甲胎蛋白(AFP)和血管內皮細胞生長因子(VEGF)聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的診斷意義。方法用化學發(fā)光免疫分析法、ELISA法和全自動生化分析儀分別檢測100例原發(fā)性肝癌和50例健康對照患者GP73、AFP和VEGF含量，分析GP73聯(lián)合AFP、VEGF檢測對原發(fā)性肝癌的診斷意義。結果健康對照組GP73、AFP和VEGF含量明顯低于原發(fā)性肝癌組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；單獨檢測GP73、AFP和VEGF對診斷原發(fā)性肝癌的特異性分別為93.2%、95.6%和92.3%，敏感性分別為62.5%、67.2%、72.3%，聯(lián)合檢測GP73、AFP和VEGF可提高診斷原發(fā)性肝癌的特異性和敏感性，分別為100%和98.9%，單項檢測的特異性和敏感性高于聯(lián)合檢測(P<0.05)。結論聯(lián)合檢測GP73、AFP和VEGF作為診斷原發(fā)性肝癌的重要指標，可提高原發(fā)性肝癌的診斷價值。

GP73；AFP；VEGF；原發(fā)性肝癌

原發(fā)性肝癌(HCC)是一種嚴重威脅人類健康與生命的疾病，其發(fā)病的主要危險因素是肝炎病毒感染[1]。近年來，大量文獻報道GP73可能成為肝癌診斷的重要標志物[2]，但聯(lián)合檢測GP73、AFP和VEGF診斷HCC的報道較少。本次研究聯(lián)合檢測HCC患者血清中GP73、AFP和VEGF，同時同步檢測50例健康對照組的GP73、AFP和VEGF，并進行對比分析，從而探討GP73、AFP和VEGF對HCC的診斷價值，總結報道如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取2011年6月至2012年11月收治的100例原發(fā)性肝癌患者為研究對象，其中男65例，女35例，年齡18～70歲，平均(38±9.6)歲；根據(jù)臨床表現(xiàn)、CT、B超、AFP定量等確診，部分病例經MRI和病理切片進一步診斷。對照組50例，男30例，女20例，年齡21～71歲，平均(39±10.6)歲，均為同期健康體檢者。 兩組患者的一般資料(年齡、性別等)差異無統(tǒng)計學意義，P<0.05。

1.2材料

1.2.1儀器 AXSYMPLUS(美國雅培)全自動化學發(fā)光分析儀、奧地利HT2型酶標儀。試劑：GP73 測定試劑盒購自碧云天生物公司；AFP測定試劑盒為AXSYM全自動免疫分析儀配套原裝進口試劑；VEGF測定試劑盒購自晶美生物醫(yī)學技術有限公司。

1.2.2標本采集 原發(fā)性肝癌組：空腹抽取靜脈血2 ml，離心3000rpm/min，分離血清，置-20℃冰箱保存用于檢測GP73、VEGF，其余用于AFP檢測。健康對照組：早晨空腹抽取靜脈血2 ml，3000rpm/min離心分離血清檢測GP73、AFP和VEGF。

1.2.3方法 GP73蛋白含量測定采用Western印跡；AFP檢測采用全自動電化學發(fā)光免疫分析儀；VEGF檢測采用ELISA法。

2 結果

2.1兩組血清GP73、AFP和VEGF水平變化 結果顯示健康對照組GP73、AFP和VEGF含量明顯低于原發(fā)性肝癌組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。具體結果見表1。

表1 兩組GP73、AFP和VEGF水平變化

2.2各腫瘤標志物單項和聯(lián)合檢測的特異性及敏感性 單獨檢測GP73、AFP和VEGF對診斷原發(fā)性肝癌的特異性分別為93.2%、95.6%和92.3%，敏感性分別為62.5%、67.2%、72.3%，聯(lián)合檢測GP73、AFP和VEGF可提高診斷原發(fā)性肝癌的特異性和敏感性，分別為100%和98.9%，單項檢測的特異性和敏感性高于聯(lián)合檢測(P<0.05)。具體結果見表2。

表2 GP73、AFP和VEGF對原發(fā)性肝癌的診斷價值(%)

3 討論

近年來，血清腫瘤標志物越來越廣泛的應用于腫瘤患者的檢測，作為一種無創(chuàng)性診斷，同步檢測多項標志物可使陽性診斷率提高，并能早期及時診斷[3]。Kladney等[4]人從巨細胞肝炎患者中篩選出GP73，它是一種跨膜糖蛋白，屬高爾基體Ⅱ型，全長3042 bp，基因位于9號染色體長臂，定位于高爾基體順面，內含1個開放閱讀框，大小為1200 bp，可進行400個氨基酸的編碼，包括胞外、跨膜和胞內3個區(qū)域，胞外段為N-末端，是發(fā)揮作用的主要功能區(qū)。因在WB上相對分子質量顯示為7300而得名，又稱GOLM1或GOLPH2。

AFP是一種糖原蛋白，目前人們公認血清AFP的檢測是診斷HCC的重要手段。在哺乳動物胚胎期AFP由卵黃囊細胞和肝臟實質細胞、胃腸道黏膜細胞合成。AFP是檢測原發(fā)性肝癌的特異性生化指標，可大大提高肝癌的診斷準確率。AFP由HCC患者的肝癌細胞產生和分泌[5]，先滲入癌周圍組織再進入血液循環(huán)，AFP在血液中特異性強且含量極穩(wěn)定。由于胚胎來源AFP與人肝臟和人血清來源的AFP之間存在大量共同的免疫和生化特征，因此，AFP陽性患者極易與其他妊娠、慢性肝病或腫瘤發(fā)生重疊現(xiàn)象，所以尋找具有互補診斷意義且特異性強的檢測指標顯得更為重要。AFP近30%～40%為陰性，陽性檢出率為60%～70%，同時也常發(fā)現(xiàn)假陽性，如肝硬化、慢性肝炎、胚胎癌、胃癌等都伴有AFP一過性增高，從一定程度上使原發(fā)性肝癌的診斷更為困難。

多種血管內皮細胞增生因子由腫瘤細胞產生和分泌，其中作用最強的是VEGF，它是體內重要的血管生成和內皮細胞分裂的促進因子，腫瘤預后及轉移復發(fā)和VEGF的高表達密切相關[6]。Torimura等[7]用原位雜交技術及免疫組化顯示：正常肝組織內VEGF mRNA及蛋白的表達比肝癌組織低很多，腫瘤患者的VEGF與血管的分化程度密切相關。在肝癌形成過程中，多種細胞生長因子和生長因子，可促進VEGF的表達并結合其特異性受體(VEGFR)，從而充分發(fā)揮生物學功能，當發(fā)生肝癌后，會破壞血管生成抑制因子和血管生成因子調控的穩(wěn)定作用，使肝癌細胞的免疫應答受到嚴重影響機體。

有研究表明，GP73蛋白的表達在肝癌患者的肝組織中顯著升高，且與廣泛的纖維化程度和肝臟炎癥一致，它是一個頗具潛力的、新的腫瘤標志物，與腫瘤的產生過程、預后和轉移密切相關。為使肝癌患者診斷的陽性率提高，許多學者認為血清腫瘤標志物聯(lián)合檢測對肝癌患者的診斷有明顯的提高作用[8]。本次對100例原發(fā)性肝癌患者進行GP73、AFP和VEGF等腫瘤標志物檢測發(fā)現(xiàn)，健康對照組GP73、AFP和VEGF含量明顯低于原發(fā)性肝癌組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。單獨檢測GP73、AFP和VEGF對診斷原發(fā)性肝癌的特異性分別為93.2%、95.6%和92.3%，敏感性分別為62.5%、67.2%、72.3%，聯(lián)合檢測GP73、AFP和VEGF可提高診斷原發(fā)性肝癌的特異性和敏感性，分別為100%和98.9%，單項檢測的特異性和敏感性高于聯(lián)合檢測(P<0.05)。

總之，血清腫瘤標志物均具有廣譜性，診斷HCC時缺乏高度的特異性，進行單項檢測時，易棄漏陽性患者，陽性率不高，而聯(lián)合檢測三項腫瘤標志物時，陽性率達98.9%。聯(lián)合檢測GP73、AFP和VEGF作為診斷原發(fā)性肝癌的重要指標，可互為印證，互為補充，從而提高原發(fā)性肝癌的診斷率。

[1] 馬桂英，劉 娟，姚紅昌，等.多種腫瘤標志物對原發(fā)性肝癌的診斷價值.臨床內科雜志，2001，18(2)：147-149.

[2] 王 洋，余 憲，張 旭，等.AFP、AFU、GGT、ALP聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的診斷價值.實用腫瘤學雜志，2003，10(1)： 23-24.

[3] Wright LM， Huster D， Lutsenko S， et al. Hepatocyte GP73 expression in Wilson disease. J Hepatol，2009，51：557-564.

[4] Kladney KD， Bulla GA， Guo L， et al. GP73，a novel Golgilocalized protein upregulated by viral infegtion.Gene，2000，249：53-65.

[5] Marrero JA， Romano PR， Nikolaeva O， et al. GP73，a resident Golgi glycoprotein，is a novel serum marker for hepatocellular carcinoma. J Hepatol，2005，43：1007-1012.

[6] 毛一雷，楊華瑜，徐海峰，等.新的肝癌血清標記物GP73在肝癌診斷中的初步研究.中華醫(yī)學雜志，2008，88(14)：948-951.

[7] Cabibbo G， Craxi A. Epidemiology,risk factors and surveillance of hepatocellular carcinoma. Eur Rev Med Pharmacol Sci，2010，14(4)：352-355.

[8] 趙發(fā)林，候艷，李康.臨床試驗評價的ROC分析方法.中國衛(wèi)生統(tǒng)計，2007，24(4)：349-35 1.

GP73jointAFP,VEGFdiagnosticsignificanceofthedetectionofprimarylivercancer

HAOFeng.

DepartmentofBloodTransfusion,FirstPeople’sHospitalofShangqiuCity,Shangqiu, 476000,China

ObjectiveTo explore the Golgi glycoprotein 73 (of GP73), alpha-fetoprotein (AFP) and vascular endothelial growth factor (VEGF) and diagnostic significance of combined detection of primary liver cancer.MethodsChemiluminescence immunoassay, ELISA and automatic biochemical analyzer were used to detecte 100 cases of primary liver cancer and 50 healthy control patients of GP73, AFP and VEGF content GP73 joint AFP, VEGF detection of primary liver cancer the diagnostic significance.ResultsThe healthy control group of GP73, AFP and VEGF content was significantly lower than primary liver cancer group, the difference was statistically significant (P<0.05),separate detection of GP73 specificity of AFP and VEGF in the diagnosis of primary liver cancer 93.2%, 95.6% and 92.3%, sensitivity of 62.5%, 67.2%, 72.3%, the joint detection GP73, AFP and VEGF may improve the specificity and sensitivity for the diagnosis of primary liver cancer, respectively, 100% and 98.9 %, the specificity and sensitivity of the individual tests is higher than the joint detection (P<0.05).ConclusionThe combined detection of GP73, AFP and VEGF as an important indicator for the diagnosis of primary liver cancer, can improve the diagnostic value of primary liver cancer.

GP73；AFP；VEGF；Primary liver cancer

476000 河南省商丘市第一人民醫(yī)院輸血科