黃晶

β2微球蛋白和調(diào)節(jié)T細(xì)胞在非霍奇金淋巴瘤中的應(yīng)用

黃晶

目的探討血清β2微球蛋白(β2-MG)和CD4+CD25+CD127low/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells,Treg)在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的臨床意義。方法對(duì)67例非霍奇金淋巴瘤患者按骨髓涂片檢查結(jié)果分為淋巴瘤白血病組，有骨髓侵潤(rùn)組和無(wú)骨髓侵潤(rùn)組。40例健康體檢者為對(duì)照組。用AU2700全自動(dòng)生化分析儀分別對(duì)其血清進(jìn)行β2-MG進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血CD4+CD25+CD127low/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)百分率。結(jié)果①非霍奇金淋巴瘤患者的血清β2-MG水平明顯高于對(duì)照組(P<0.01)，其中淋巴瘤白血病組和有骨髓侵潤(rùn)組β2-MG水平高于無(wú)骨髓侵潤(rùn)組(P<0.01);淋巴瘤白血病組高于骨髓侵潤(rùn)組(P<0.01).3組非霍奇金淋巴瘤患者化療后β2-MG水平均低于化療前的水平(P<0.05)。②非霍奇金淋巴瘤患者、健康對(duì)照組外周血CD4+CD25+CD127low/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占CD4+淋巴細(xì)胞的比例分別為6.73±1.79%、4.15±1.43%。非霍奇金淋巴瘤患者Treg細(xì)胞表達(dá)高于健康對(duì)照組，差異有顯著性(P<0.05)；淋巴瘤白血病組和有骨髓侵潤(rùn)組Treg細(xì)胞表達(dá)比例明顯高于無(wú)骨髓侵潤(rùn)組(P<0.05)，疾病越嚴(yán)重，Treg細(xì)胞表達(dá)水平越高;非霍奇金淋巴瘤患者化療前外周血CD4+CD25+CD127low/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平升高，化療后外周血Treg細(xì)胞水平降低，結(jié)論血清β2微球蛋白和CD4+CD25+CD127low/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測(cè)對(duì)非霍奇金淋巴瘤的診斷，療效及預(yù)后的判斷具有重要的臨床價(jià)值。

非霍奇金淋巴瘤; β2微球蛋白;血清; CD4+CD25+CD127low/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞 流式細(xì)胞術(shù)

β2微球蛋白(β2-MG)是機(jī)體內(nèi)一種小分子蛋白質(zhì)，以構(gòu)成MHC-I類分子發(fā)揮作用[1]。非霍奇金淋巴瘤(NHL)是一組高度異質(zhì)性的淋巴系統(tǒng)惡性腫瘤[2]。由于克隆性增生的淋巴細(xì)胞功能不一，并在體內(nèi)廣泛分布，因此它可以累及任何一個(gè)器官。骨髓是其常侵犯的部位之一[3]。淋巴瘤中，β2-MG可以從腫瘤細(xì)胞和免疫細(xì)胞上脫落，β2-MG升高預(yù)示著疾病進(jìn)展和和預(yù)后不良。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells,Treg)由Sakaguchi等在1995年首次報(bào)道，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在多種實(shí)體腫瘤如卵巢癌、肺癌、肝癌、黑色素瘤、胃腸道腫瘤等患者的外周血和腫瘤局部組織升高[4]可抑制CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞的功能，參與腫瘤負(fù)調(diào)控，作為預(yù)后較差的一個(gè)獨(dú)立指標(biāo)。我們檢測(cè)了67例NHL患者血清中的β2-MG水平和外周血CD4+CD25+CD127low/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)百分率，了解其在非霍奇金淋巴瘤中的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1研究對(duì)象 2005年2月至2009年2月在我院住院的NHL患者67例，男43例，女24例，年齡8～74歲，中位年齡48歲。均經(jīng)病理學(xué)或細(xì)胞穿刺確診，骨髓涂片檢查分類中淋巴瘤細(xì)胞比例≥25%或外周血出現(xiàn)淋巴瘤細(xì)胞診斷為淋巴瘤細(xì)胞白血?。?%≤淋巴瘤細(xì)胞≤20%診斷為骨髓侵潤(rùn)；<5%或未找到典型淋巴瘤細(xì)胞為無(wú)骨髓侵潤(rùn)組[5]。根據(jù)上述分類標(biāo)準(zhǔn)將67例患者分為:淋巴瘤白血病20例；骨髓侵潤(rùn)組23例，無(wú)骨髓侵潤(rùn)組24例。所有患者均除外可能引起血清β2-MG水平和外周血CD4+CD25+CD127low/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞升高的其他疾病。對(duì)照組40例均為來(lái)我院健康體檢者，男15例，女25例，年齡9歲～76歲，平均年齡51.1歲。

1.2方法 患者治療前及治療2～4個(gè)療程后,分別于清晨空腹采集靜脈血4 ml,2 ml EDTA-2K抗凝，流式細(xì)胞術(shù)分析；2 ml分離出血清，β2-MG采用免疫透射比濁法，在AU2700全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行檢測(cè)，試劑由奧林巴斯原廠提供，β2-MG<2 mg/L為正常。

1.3外周血CD4+CD25+CD127low/-Treg檢測(cè) 取兩個(gè)流式試管，分別加入mouseIgG1-FITC/mouse IgG1 - PE/CD4-PE-Cy5和CD25-FITC/CD127 - PE/CD4-PE-Cy5,每管再加100ul抗凝全血，混勻，避光孵育30 min,2 ml溶血素溶血，PBS洗兩次，流式細(xì)胞儀檢測(cè)，CellQuest軟件獲取并分析，計(jì)算外周血CD4+CD25+CD127low/-Treg占CD4+淋巴細(xì)胞比例，試劑均采用美國(guó)BD公司產(chǎn)品，包括溶血素(FACSLying)等。FACSCalibur型流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)BD公司。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1①NHL各組的β2-MG水平明顯高于對(duì)照組，差異有顯著性(P<0.01),其中淋巴瘤白血病組與骨髓侵潤(rùn)組β2-MG水平均高于無(wú)骨髓侵潤(rùn)組(P<0.01)；淋巴瘤白血病組β2-MG水平高于骨髓侵潤(rùn)組(P<0.01)。②NHL患者CD4+CD25+CD127low/-Treg表達(dá)高于健康對(duì)照組，差異有顯著性(P<0.05)，其中淋巴瘤白血病組與骨髓侵潤(rùn)組Treg水平均高于無(wú)骨髓侵潤(rùn)組(P<0.05)；淋巴瘤白血病組Treg水平高于骨髓侵潤(rùn)組(P<0.05)，詳見(jiàn)表1。

2.2①67例非霍奇金淋巴瘤患者治療前的β2-MG的平均檢測(cè)結(jié)果為(6.60±1.12)mg/L，治療后的檢測(cè)結(jié)果為(3.45±1.19)mg/L，治療后的檢測(cè)結(jié)果明顯下降，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。②化療前外周血CD4+CD25+CD127low/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平升高，化療后外周血Treg細(xì)胞水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表1 各組非霍奇金淋巴瘤患者與對(duì)照組Treg和β2-MG檢測(cè)結(jié)果

表2 67例非霍奇金淋巴瘤治療前，后檢測(cè)結(jié)果

3 討論

β2-MG是一種相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)，為細(xì)胞膜上完整組織相容性抗原的一部分。除紅細(xì)胞與胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞外，所有正常有核細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞表面均存在，是一種非特異性腫瘤標(biāo)志物，有研究表明惡性淋巴瘤患者血清β2-MG濃度增高，可能是由于細(xì)胞周轉(zhuǎn)增加，它通常反映了腫瘤的負(fù)荷，廣泛病變者高于局限病變者[6]。人體β2-MG水平相當(dāng)恒定，β2-MG容易通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)膜，幾乎全部由近曲小管以胞飲方式攝取，在局部被代謝降解為氨基酸[7]。在排除肝臟，腎臟疾病和自身免疫性疾病后，β2-MG水平明顯增高提示骨髓可能發(fā)生侵潤(rùn)。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，β2-MG水平持續(xù)升高，提示病情惡化，腫瘤患者治療后β2-MG水平明顯下降者病情多穩(wěn)定。β2-MG升高組復(fù)發(fā)率高于β2-MG正常組。本文檢測(cè)結(jié)果顯示：非霍奇金淋巴瘤組β2-MG含量顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，差異具有顯著性。淋巴瘤白血病組與骨髓侵潤(rùn)組β2-MG水平均高于無(wú)骨髓侵潤(rùn)組(P<0.01)；淋巴瘤白血病組β2-MG水平高于骨髓侵潤(rùn)組(P<0.01)。由此可見(jiàn)：β2-MG是一個(gè)重要的非霍奇金淋巴瘤血清學(xué)標(biāo)記物，對(duì)非霍奇金淋巴瘤的診斷及對(duì)骨髓是否侵潤(rùn)具有重要的臨床意義。67例非霍奇金淋巴瘤β2-MG水平從化療前的(6.60±1.12)mg/L下降至化療有效后的(3.45±1.19)mg/L，前后有顯著性差異(P<0.01)。以上數(shù)據(jù)說(shuō)明，β2-MG升高水平與疾病進(jìn)展成正比，與治療反應(yīng)和疾病預(yù)后成反比。

本研究顯示NHL患者CD4+CD25+CD127low/-Treg表達(dá)率高于健康對(duì)照組，其中淋巴瘤白血病組尤高，與無(wú)骨髓侵潤(rùn)組相比有顯著性差異。Treg細(xì)胞比例升高可抑制機(jī)體免疫功能，可能是NHL腫瘤細(xì)胞逃避抗腫瘤免疫反應(yīng)，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生、發(fā)展的原因之一。

有許多研究表明，腫瘤患者摘除腫瘤組織或化療后體內(nèi)的CD4+CD25+CD127low/-Treg降低[8]。本研究同時(shí)比較了NHL患者化療前與化療后外周血CD4+CD25+CD127low/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例，發(fā)現(xiàn)化療前外周血Treg細(xì)胞比例升高，化療后及緩解期患者較治療前患者外周血Treg細(xì)胞比例明顯降低，提示腫瘤負(fù)荷與NHL患者體內(nèi)的CD4+CD25+CD127low/-Treg數(shù)量有關(guān)，治療或緩解期患者的免疫抑制狀態(tài)得到一定糾正，這可能是細(xì)胞免疫功能恢復(fù)，產(chǎn)生抗腫瘤免疫反應(yīng)，從而抑制腫瘤生長(zhǎng)或殺滅腫瘤的原因之一。CD4+CD25+CD127low/-Treg細(xì)胞比例可作為腫瘤患者免疫功能狀態(tài)的一種客觀標(biāo)志，對(duì)臨床觀察病情發(fā)展有很大的指導(dǎo)意義。

以往研究表明，IPI,LDH,β2-MG對(duì)NHL患者的預(yù)后有重要提示作用，本研究分析了初診患者Treg細(xì)胞表達(dá)水平與這些常規(guī)預(yù)后指標(biāo)間的關(guān)系，結(jié)果表明67例初診患者中Treg細(xì)胞的表達(dá)與IPI,LDH和β2-MG之間呈明顯正相關(guān)。

綜上所述，β2-MG代表NHL的腫瘤負(fù)荷，Treg細(xì)胞可作為腫瘤患者免疫功能狀態(tài)的一種客觀標(biāo)志，項(xiàng)目聯(lián)合檢測(cè)可以提高疾病的診斷效率，聯(lián)合檢測(cè)β2-MG和Treg細(xì)胞可提高非霍奇金淋巴瘤的療效和判斷預(yù)后的敏感度和特異度，對(duì)非霍奇金淋巴瘤的治療、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移提供依據(jù)。

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