閆志芳，段秀俊，張俊英

（山西中醫(yī)學(xué)院，山西 太原 030024）

芎芷止痛顆粒由川芎、白芷、黃芩、柴胡等12 味中藥組成，可行氣活血、通絡(luò)止痛，用于血管神經(jīng)性頭痛屬氣滯血瘀者的輔助治療。為山西瑞福萊制藥有限公司的主要產(chǎn)品，企業(yè)曾很長時(shí)間被成品制劑中黃芩苷檢測不合格而困擾，為幫助企業(yè)解決問題，實(shí)驗(yàn)兼顧各藥味有效成分的特點(diǎn)，對(duì)原定水提醇沉工藝進(jìn)行了改良，黃芩采用單煎，其余十一味藥合煎醇沉。本文采用正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)提取工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

Alltech 高效液相色譜儀及其工作站，LINEARUVIS-201 紫外檢測器（Alltech 公司），AB135-S電子分析天平（瑞士METTLER 公司）。甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純；黃芩苷（含量測定用，批號(hào)110715-200212）及甘草酸單銨鹽（含量測定用，批號(hào)110731-200510）標(biāo)準(zhǔn)物購自中國藥品生物制品檢定所。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃芩煎煮條件的篩選

2.1.1 正交試驗(yàn) 本實(shí)驗(yàn)以黃芩苷提取率為考核指標(biāo)，加水量（A）、煎煮時(shí)間（B）、煎煮次數(shù)（C）為考察因素，每因素確定3 水平，采用L9（34）正交表安排正交試驗(yàn)，見表1。

表1 因素水平表

2.1.2 藥材的提取 稱取每份黃芩10 g，共9 份。根據(jù)L9（34）正交表的設(shè)計(jì)方案分別進(jìn)行煎煮，煎煮液濃縮至稠膏，烘干，準(zhǔn)確稱量后粉碎，備用。

2.1.3 干膏中黃芩苷提取量的測定 分別稱取以上9 種干浸膏粉各0.1 g，精密稱定，置50 mL 容量瓶中，加入70%乙醇約40 mL，超聲處理20 min，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密稱取干燥至恒重的黃芩苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL 含0.12 mg 的對(duì)照品溶液［1-2］。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）為流動(dòng)相，280 nm 為檢測波長，HPLC 色譜圖見圖1。測定峰面積值，計(jì)算各個(gè)實(shí)驗(yàn)條件下的黃芩苷提取率，結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。由表2、表3 可見，A、B 因素對(duì)黃芩苷的提取率影響不顯著，而C 因素顯著。統(tǒng)計(jì)結(jié)果最佳組合為A2B3C3，實(shí)際試驗(yàn)最佳組合為A2B2C3，將兩種方案各做重復(fù)實(shí)驗(yàn)3 次，結(jié)果黃芩苷提取率無明顯差異，從省時(shí)節(jié)能角度考慮，選擇A2B2C3為最佳組合，即加水量為10 倍，煎煮時(shí)間為1.0 h，煎煮次數(shù)為3 次，黃芩苷提取率約75%左右。

圖1 黃芩工藝考察HPLC 色譜圖

表2 黃芩單煎正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 黃芩單煎方差分析結(jié)果

2.2 川芎、牛膝等十一味藥材煎煮條件的篩選

2.2.1 正交試驗(yàn) 本試驗(yàn)以甘草酸提取率為考核指標(biāo)，加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)為考察因素，每因素設(shè)計(jì)3 水平，采用L9（34）正交表安排正交試驗(yàn)，因素水平見表1。

2.2.2 藥材的提取 按處方比例分別稱取川芎、白芷、甘草等各適量，共9 份。根據(jù)L9（34）正交表的設(shè)計(jì)方案分別進(jìn)行煎煮，將煎煮液濃縮至1 mL 約相當(dāng)于原藥材1 g，放冷，加95%乙醇使藥液含醇量達(dá)70%，靜置12 h，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，70 ℃干燥，準(zhǔn)確稱量后粉碎，備用。

2.2.3 干膏中甘草酸提取量的測定 分別稱取以上9 種干浸膏粉約1.5 g，精密稱定，置25 mL 容量瓶中，加入流動(dòng)相22 mL，超聲處理（功率250 W，頻率20 kHz）30 min，取出，放冷，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液［3-4］。另取干燥至恒重的甘草酸單銨鹽，加流動(dòng)相制成每1 mL 含0.2 mg的對(duì)照品溶液（折合甘草酸為每1 mL 含0.195 9 mg）。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.2 mol/L 醋酸銨溶液（含3.03%冰醋酸）（67∶33）為流動(dòng)相，250 nm 為檢測波長，HPLC 色譜圖見圖2，測定峰面積值，計(jì)算各個(gè)實(shí)驗(yàn)條件下甘草酸提取率，結(jié)果見表4，方差分析結(jié)果見表5。

圖2 群藥工藝考察HPLC色譜圖

表4 他藥合煎正交試驗(yàn)結(jié)果

表5 他藥合煎方差分析結(jié)果

由表4、表5 可知，A、C 因素對(duì)甘草酸提取率影響顯著，而B 因素不顯著。統(tǒng)計(jì)結(jié)果最佳組合為A2B2C2，實(shí)際試驗(yàn)最佳組合為A2B2C3，將兩種方案各做重復(fù)實(shí)驗(yàn)3 次，結(jié)果甘草酸提取率沒有明顯差異。從省時(shí)節(jié)能角度考慮選擇A2B2C2為最佳組合，即加水量為10 倍，煎煮時(shí)間為1.0 h，煎煮次數(shù)為2 次，該條件下甘草酸轉(zhuǎn)移率約45%左右。

3 討論

芎芷止痛顆粒為山西瑞福萊藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，原工藝采用了水煎醇沉處理，但在成品制劑中黃芩苷檢測不合格?？紤]其主要原因是黃芩苷溶于熱水而在冷水及冷乙醇中溶解度很小，原工藝的醇沉處理造成了黃芩苷大量損失。實(shí)驗(yàn)曾初步設(shè)計(jì)全方水煎而不醇沉，但出膏率近50%，服用量過大。為既解決黃芩提取問題又兼顧服用量問題，實(shí)驗(yàn)選擇了黃芩單煎，其余十一味藥水提醇沉處理，并對(duì)提取條件進(jìn)行了優(yōu)化，從研究結(jié)果看選定的提取工藝既保證了制劑療效，又保證了成品制劑質(zhì)量符合要求。

本實(shí)驗(yàn)提示了含黃芩中成藥的制劑原則。如果黃芩在處方中起主要治療作用，或黃芩苷是含量測定的主要藥效成分或指標(biāo)性成分，在制劑工藝過程中必須考慮黃芩苷的溶解度問題，避免冷處理對(duì)黃芩苷造成的大量損失。

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：282-283.

［2］耿紅梅，王廣慶，段春改，等.當(dāng)歸拈痛丸的鑒別及黃芩苷的測定［J］.華西藥學(xué)雜志，2007，22（6）：673-675.

［3］裴妙榮，段秀俊，裴香萍.酸堿對(duì)藥附子與甘草在四逆湯中配伍的化學(xué)研究［J］.中國中藥雜志，2009，34（16）：2 047-2 050.

［4］裴香萍，段秀俊，裴妙榮.酸堿對(duì)藥麻黃與甘草在麻杏石甘湯中配伍的化學(xué)研究［J］.中國中藥雜志，2009，34（19）：2 466-2 468.