李 慧 時 陽 孫 遜 王麗波 孟祥偉 (吉林大學(xué)第一醫(yī)院胃腸內(nèi)科，吉林 長春 3002)

胃癌發(fā)生、發(fā)展是多因素、多階段、多基因變異的病理過程，其形成是由數(shù)個基因改變累積的多步驟過程組成，包括癌基因的激活和腫瘤抑癌基因的失活〔1〕。其中P53基因是迄今發(fā)現(xiàn)與人類腫瘤關(guān)系最為密切的抑癌基因，其突變或缺失可導(dǎo)致細(xì)胞惡化〔2〕。Ki-67是判斷細(xì)胞增殖活性的重要指標(biāo)〔3〕。本文探討胃癌組織中P53和Ki-67蛋白表達(dá)的關(guān)系及與胃癌生物學(xué)行為的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 一般資料 收集2009年1月至2011年6月吉林大學(xué)第一醫(yī)院經(jīng)術(shù)后病理證實為胃腺癌的住院患者290例，其中男216例(74.4%)，女74例(25.6%)，年齡28～83歲，平均58.3歲。術(shù)前均未行放化療。胃癌TNM分期采用2003國際抗癌聯(lián)盟(UICC)制定的TNM標(biāo)準(zhǔn)。組織分型采用Lauren分型(腸型、彌漫型、混合型)和 Borrmannan分型(0/Ⅰ/Ⅱ和Ⅲ/Ⅳ)。P53、Ki-67試劑盒均采用福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司的即用型免疫組化EliVision Plus試劑盒;抗體選用鼠抗人P53蛋白免疫組化單克隆抗體，鼠抗人Ki-67抗原免疫組化單克隆抗體。

1.2 P53及Ki-67測量方法 采用EliVision Plus免疫組織化學(xué)染色方法檢測胃腺癌中P53和Ki-67的蛋白表達(dá)，均按照試劑盒說明書的染色步驟進(jìn)行，所有標(biāo)記均設(shè)陽性對照并用正常血清代替一抗做陰性對照。P53和Ki-67陽性染色為棕黃色顆粒，均為核表達(dá)，P53陽性細(xì)胞以40倍高倍鏡下記數(shù)共1 000個細(xì)胞的陽性細(xì)胞數(shù)所占比例為標(biāo)準(zhǔn)，＜10%為(－)，≥10%為陽性;Ki-67陽性細(xì)胞以50倍高倍鏡下記數(shù)1 000個細(xì)胞的陽性細(xì)胞數(shù)所占比例為標(biāo)準(zhǔn)，＜50%為(－)，≥50%為(+)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS16.0軟件進(jìn)行χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 胃腺癌中P53和Ki-67蛋白的表達(dá) 290例胃腺癌中P53陽性表達(dá)136例，陽性表達(dá)率為46.9%(136/290);Ki-67陽性表達(dá)228例，陽性表達(dá)率為78.6%(228/290)。

2.2 胃腺癌中P53和Ki-67蛋白表達(dá)陽性率與臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性 290例胃腺癌中P53蛋白陽性表達(dá)與腫瘤部位、Lauren分型、Borrmannan分型、分化程度、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)(均P＜0.05)，而與患者性別、年齡、腫瘤大小、浸潤深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(均P＞0.05);Ki-67蛋白陽性表達(dá)與Lauren分型、Borrmannan分型、分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(均P＜0.05)，而與患者性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、TNM分期、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(P＞0.05)。見表1。

2.3 胃腺癌中P53和Ki-67蛋白表達(dá)的關(guān)系 290例胃腺癌中P53和Ki-67雙陽性121例，雙陽性47例，僅P53陽性15例，僅Ki-67陽性107例，兩者呈正相關(guān)(r=0.292，P＜0.05)。

表1 胃腺癌中P53和Ki-67蛋白表達(dá)陽性率與臨床相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系〔n(%)〕

3 討論

胃癌的發(fā)生、發(fā)展是一個多階段、多基因參與的復(fù)雜過程，癌基因的激活和抑癌基因的失活與腫瘤的發(fā)展有密切聯(lián)系。野生型P53基因是細(xì)胞生長的負(fù)調(diào)控因子，具有穩(wěn)定基因組、調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄、抑制細(xì)胞周期進(jìn)展、促進(jìn)凋亡以及抑制血管形成等抑癌功能〔4〕;可因突變、缺失、重排等形式失活，失去對細(xì)胞生長、凋亡、DNA修復(fù)等調(diào)節(jié)作用，由抑癌基因變?yōu)榘┗颉?〕;在正常組織用常規(guī)免疫組化難以檢測出，而突變后P53蛋白穩(wěn)定性增強(qiáng)，半衰期延長，可被檢測到。國內(nèi)外研究表明，胃癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌等腫瘤均存在P53蛋白過表達(dá)〔6〕。

研究所示P53的表達(dá)與年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、Lauren分型、Borrmannan分型、臨床分期等密切相關(guān)，本研究結(jié)果與此基本一致〔7〕。在性別及腫瘤大小上不同結(jié)果可能是由于病例標(biāo)本數(shù)量及檢測手法等不同所致。Deveci等〔8〕報道42例胃腺癌中P53表達(dá)48%，男性、低分化、小腫瘤(≤3 cm)、有明顯炎癥反應(yīng)和有淋巴管浸潤陽性率更高，大多數(shù)P53陽性和＞5個淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者預(yù)后更差。對于Lauren分型，相關(guān)研究表明〔9〕，P53陽性表達(dá)率腸型顯著高于彌漫型和混合型，與本研究結(jié)果一致。P53參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展，促進(jìn)了胃癌的浸潤、轉(zhuǎn)移，可作為評價胃癌患者預(yù)后的一項參考指標(biāo)。

Ki-67與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移及預(yù)后有密切聯(lián)系;目前常用來反映腫瘤細(xì)胞增殖活性，評價腫瘤預(yù)后。

本研究顯示，Ki-67陽性表達(dá)率越高，腫瘤細(xì)胞惡性程度越高;一些外國學(xué)者研究顯示〔10〕，相比 EGC、AGC、P53 表達(dá)，Ki-67標(biāo)記指數(shù)對腫瘤細(xì)胞增殖的預(yù)后價值更突出。國內(nèi)外一些研究表明〔3〕：Ki-67在男性、Lauren 分型中腸型、Borrmannan 0/Ⅰ/Ⅱ、浸潤肌層/漿膜層、管狀腺癌/印戒細(xì)胞癌顯著高于女性、Lauren分型中彌漫型、BorrmannanⅢ/Ⅳ、浸潤黏膜層/黏膜下層、黏液腺癌中的表達(dá)，與本研究大體一致。以上研究表明Ki-67表達(dá)率越高，胃腺癌細(xì)胞生長速度越快、惡性程度越高，患者預(yù)后越差。但Elpek等〔11〕用免疫組化評估Ki-67與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系時發(fā)現(xiàn)，Ki-67與臨床病理特征之間沒有任何聯(lián)系，不能預(yù)測預(yù)后。本研究表明P53陽性表達(dá)的胃腺癌細(xì)胞有更強(qiáng)的增殖活性，更強(qiáng)的浸潤轉(zhuǎn)移能力及較差的預(yù)后;P53與Ki-67表達(dá)呈顯著正相關(guān)，且兩者均與胃腺癌的浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān)，陽性表達(dá)的患者預(yù)后較差。

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10 Aoki R，Yasuda M，Torisu R，et al.Relationship between lymph node metastasis and E-cadherin expression in submucosal invasive gastric carcinomas with gastric-phenotype〔J〕.J Med Invest，2007;54(1-2)：159-67.

11 Elpek Go，Gelen T，Aksoy NH，et al.Microvessel count，proliferating cell nuclear antigen and Ki-67indices in gastric adenocarcinoma〔J〕.Korean J Gastroenterol，2005;45(6)：394-400.