楊敬敏，黃蘇珍，楊永恒

〔江蘇省·中國(guó)科學(xué)院植物研究所(南京中山植物園)，江蘇南京210014〕

甜菊(Stevia rebaudiana Bertoni)又名甜葉菊，隸屬于菊科(Asteraceae)甜菊屬(Stevia Cav.)，為多年生草本植物，原產(chǎn)南美洲巴拉圭與巴西交界的阿曼拜山脈，當(dāng)?shù)卦∶窈茉缇蛯⑻鹁兆鳛樘橇鲜褂?。從甜菊中獲得的甜味提取物甜菊糖苷的甜度約為蔗糖的300倍，不但甜度高，還具有熱量低、口感好、穩(wěn)定性強(qiáng)的特點(diǎn)，對(duì)高血壓、糖尿病和兒童齲齒也有預(yù)防和輔助治療作用，目前被譽(yù)為“最佳天然甜味劑”［1－2］。甜菊自20世紀(jì)70年代中期引入中國(guó)后被廣泛引種和推廣栽培，目前中國(guó)已成為全世界最大的甜菊種植國(guó)及甜菊糖苷的生產(chǎn)和出口國(guó)。甜菊優(yōu)良品種選育與優(yōu)質(zhì)甜菊糖苷的生產(chǎn)密切相關(guān)，因此選育具有甜菊糖苷含量高、高產(chǎn)并具有優(yōu)良抗性的新品種是甜菊育種的主要目標(biāo)［3－4］。

目前，常規(guī)育種方法是雜交育種，它可以將2個(gè)親本的不同優(yōu)良性狀集中于同一后代，但受選育周期較長(zhǎng)和自然變異率較低等因素限制［5－6］。輻射誘變因其變異率較高和較易獲得變異材料等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于作物育種［7－9］。甜菊種子十分細(xì)小且表皮極薄，對(duì)γ射線和離子的阻擋作用較低，使γ射線和離子很易直接作用于種胚DNA，低劑量的射線和離子注入即可產(chǎn)生顯著的影響，因而適宜進(jìn)行γ射線和離子注入誘變［10］。諸多研究結(jié)果均表明利用輻射誘變進(jìn)行甜菊育種是有效的［10－16］。沈明山等［12］的研究結(jié)果表明:注入碳離子的甜菊種子的萌發(fā)率和株高均高于對(duì)照組。舒世珍等［15－16］認(rèn)為:使用一定劑量的氮離子束輻射處理甜菊種子，不僅可以促進(jìn)幼苗根及葉的生長(zhǎng)、提高產(chǎn)量，同時(shí)還可以提高糖苷含量以及萊鮑迪苷A的含量。

作者以甜菊5個(gè)雜交組合F1代種子［17］為實(shí)驗(yàn)材料，選用60Co－γ和離子束為輻射源進(jìn)行輻照，對(duì)種子萌發(fā)率和幼苗成活率進(jìn)行比較，同時(shí)對(duì)實(shí)生單株的生長(zhǎng)和形態(tài)指標(biāo)進(jìn)行觀測(cè)與分析，以期篩選出兼具抗寒和優(yōu)良農(nóng)藝性狀的甜菊優(yōu)良單株，并為甜菊誘變育種的進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

供試材料為甜菊人工雜交種子，于2010年8月至11月通過(guò)人工雜交獲得。雜交組合及其種子數(shù)量分別為:組合Ⅰ‘守田2號(hào)’ב中山3號(hào)’(‘Shoutian No.2’בZhongshan No.3’)F1代種子 292 粒;組合Ⅱ‘守田 2號(hào)’ב中山 4號(hào)’(‘Shoutian No.2’בZhongshan No.4’)F1代種子271粒;組合Ⅲ‘中山3號(hào)’ב守田2號(hào)’(‘Zhongshan No.3’בShoutian No.2’)F1代種子149粒;組合Ⅳ‘中山3號(hào)’ב守田3號(hào)’(‘Zhongshan No.3’בShoutian No.3’)F1代種子220粒;組合Ⅴ‘守田3號(hào)’自交(‘Shoutian No.3’בShoutian No.3’)F1代種子346粒，共計(jì)1 278粒種子。

雜交親本品種‘中山3號(hào)’、‘中山4號(hào)’、‘守田2號(hào)’和‘守田3號(hào)’均來(lái)源于江蘇省·中國(guó)科學(xué)院植物研究所，其中，‘中山3號(hào)’為總苷高含量品種，‘中山4號(hào)’為萊鮑迪苷A高含量兼較高產(chǎn)品種，‘守田2號(hào)’為高產(chǎn)品種，‘守田3號(hào)’為萊鮑迪苷A高含量品種［18］。

1.2 方法

1.2.1 誘變處理 誘變輻射源分別為60Co－γ和離子束。將各雜交組合種子平均分成3組，分別為對(duì)照、60Co－γ 注入(劑量15 Gy，劑量率0.5 Gy·min－1)和離子束注入(能量 20 keV，劑量 2.6×1016N+·cm－2)處理組。60Co－γ注入在安徽雙豐農(nóng)業(yè)高新技術(shù)有限責(zé)任公司進(jìn)行，離子束注入在中國(guó)科學(xué)院合肥物質(zhì)科學(xué)研究院進(jìn)行，對(duì)照組種子不進(jìn)行任何處理。

1.2.2 播種和育苗 于2011年4月上旬至5月下旬進(jìn)行播種和育苗。將對(duì)照及輻射處理后的種子按照不同的雜交組合和處理分別播種于育苗盤(pán)(長(zhǎng)和寬均為40.0 cm、高4.5 cm)中，栽培基質(zhì)為V(細(xì)沙)∶V(園土)∶V(泥炭)=1∶1∶2 的混合基質(zhì)。播種前輕輕揉搓去掉冠毛，分小區(qū)均勻播在基質(zhì)上，輕輕覆1層薄土。播種后保持基質(zhì)濕潤(rùn)，自然光照。每天觀察種子的發(fā)芽情況，記錄各處理各雜交組合種子的發(fā)芽數(shù)并計(jì)算發(fā)芽率。待實(shí)生苗長(zhǎng)至5～6對(duì)真葉時(shí)移栽至大田中，統(tǒng)計(jì)不同處理各雜交組合幼苗的存活數(shù)并計(jì)算存活率。

1.2.3 植株形態(tài)學(xué)性狀觀測(cè) 對(duì)定植在田間的5個(gè)雜交組合后代的所有實(shí)生植株的形態(tài)性狀(包括株高、葉寬、葉長(zhǎng)、莖粗、分枝數(shù)、節(jié)數(shù)和平均節(jié)間長(zhǎng)度)進(jìn)行觀測(cè)，觀測(cè)時(shí)期為初蕾期，即植株最早出現(xiàn)花蕾的時(shí)期。株高為從地面到植株頂端的高度;葉寬為植株中部最寬葉片的寬度;葉長(zhǎng)為植株中部最長(zhǎng)葉片葉基至葉尖的長(zhǎng)度;莖粗為距地面5 cm處主莖的直徑;分枝數(shù)為著生于主莖10 cm以上的一級(jí)分枝數(shù);節(jié)數(shù)為主莖上第1節(jié)至頂芽間的節(jié)數(shù);以株高除以主莖的節(jié)數(shù)計(jì)算平均節(jié)間長(zhǎng)度。其中，株高用卷尺測(cè)量，葉寬和葉長(zhǎng)用直尺測(cè)量，莖粗用游標(biāo)卡尺測(cè)量;每個(gè)指標(biāo)重復(fù)測(cè)量3次，取平均值。

在植株越冬休眠前統(tǒng)計(jì)從植株基部萌發(fā)的腳芽數(shù)量，以此評(píng)價(jià)雜交組合后代植株的耐寒性。

1.3 數(shù)據(jù)處理

按以下公式計(jì)算種子發(fā)芽率和幼苗成活率［19－20］:種子發(fā)芽率=(發(fā)芽種子數(shù)/播種種子數(shù))×100%;幼苗成活率=(成活幼苗數(shù)/發(fā)芽種子數(shù))×100%。采用Excel 2010和SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析以及變異系數(shù)［21］計(jì)算。

2 結(jié)果和分析

2.1 60Co－γ和離子束注入對(duì)甜菊不同雜交組合后代種子發(fā)芽率和幼苗成活率的影響

經(jīng)60Co－γ和離子束注入處理后甜菊不同雜交組合F1代種子的發(fā)芽率和幼苗的成活率見(jiàn)表1。由表1可以看出:與對(duì)照相比，經(jīng)60Co－γ注入后的雜交組合‘中山3號(hào)’ב守田2號(hào)’后代種子和經(jīng)離子束注入后的雜交組合‘守田2號(hào)’ב中山3號(hào)’后代種子的發(fā)芽率顯著高于對(duì)照組，經(jīng)60Co－γ和離子束注入后的其他雜交組合后代種子的發(fā)芽率均顯著低于對(duì)照組。從幼苗成活率看，經(jīng)60Co－γ注入后雜交組合‘守田2號(hào)’ב中山3號(hào)’和‘守田2號(hào)’ב中山4號(hào)’以及經(jīng)離子束注入后的雜交組合‘中山3號(hào)’ב守田2號(hào)’及‘中山3號(hào)’ב守田3號(hào)’后代幼苗的成活率均顯著高于對(duì)照，而在這2種輻照條件下其他雜交組合后代幼苗的成活率均顯著低于對(duì)照。說(shuō)明使用合適的輻射源對(duì)于提高甜菊雜交組合后代的種子發(fā)芽率和幼苗成活率有一定作用。

表1 60Co－γ和離子束注入對(duì)甜菊不同雜交組合F1代種子發(fā)芽率和幼苗成活率的影響1)Table 1 Effects of60Co-γ and ion beam injections on F1seed germination and seedling survival rate of different cross combinations of Stevia rebaudiana Bertoni1)

從5個(gè)雜交組合后代種子發(fā)芽率和幼苗成活率的平均值來(lái)看，這2種輻照方式均對(duì)甜菊雜交后代種子萌發(fā)有一定影響，60Co－γ和離子束注入后種子發(fā)芽率的平均值均顯著低于對(duì)照，其中離子束注入后種子發(fā)芽率的平均值降幅更大;60Co－γ注入后5個(gè)雜交組合后代幼苗成活率的平均值均顯著高于對(duì)照，而離子束注入后幼苗成活率的平均值均顯著低于對(duì)照。此外，由表1還可見(jiàn):60Co－γ和離子束注入后各雜交組合后代種子發(fā)芽率和幼苗成活率的變異系數(shù)均顯著大于對(duì)照。

上述研究結(jié)果說(shuō)明:60Co－γ和離子束注入對(duì)甜菊的種子發(fā)芽率和幼苗成活率產(chǎn)生了顯著的誘導(dǎo)效應(yīng)，對(duì)部分雜交組合后代種子發(fā)芽率和幼苗成活率的提高有一定的作用。

2.2 60Co－γ和離子束注入對(duì)甜菊不同雜交組合后代幼苗植株形態(tài)性狀的影響

2.2.1 對(duì)莖部形態(tài)性狀的影響 經(jīng)60Co－γ和離子束注入處理后甜菊不同雜交組合后代植株莖部形態(tài)性狀的變化見(jiàn)表2。

從株高看，僅離子束注入后的‘守田2號(hào)’ב中山3號(hào)’雜交組合后代和‘守田3號(hào)’自交后代幼苗的株高與對(duì)照組間差異不顯著，其他處理組各雜交組合后代幼苗的株高均顯著低于對(duì)照組，說(shuō)明60Co－γ和離子束注入這2種輻射處理方式均有助于甜菊雜交后代植株的矮化。

從節(jié)數(shù)看，經(jīng)60Co－γ注入后5個(gè)雜交組合后代幼苗的節(jié)數(shù)均顯著低于對(duì)照組;而離子束注入后，僅‘中山3號(hào)’ב守田3號(hào)’雜交后代幼苗的節(jié)數(shù)顯著低于對(duì)照組，其他雜交組合后代幼苗的節(jié)數(shù)與對(duì)照組間均無(wú)顯著差異。說(shuō)明60Co－γ注入對(duì)甜菊植株節(jié)數(shù)的誘變效果較為顯著。

表2 60Co－γ和離子束注入對(duì)甜菊不同雜交組合后代幼苗莖部形態(tài)性狀的影響(±SE)1)Table 2 Effects of60Co-γ and ion beam injections on stem morphological character of progeny seedlings of different cross combinations of Stevia rebaudiana Bertoni(±SE)1)

表2 60Co－γ和離子束注入對(duì)甜菊不同雜交組合后代幼苗莖部形態(tài)性狀的影響(±SE)1)Table 2 Effects of60Co-γ and ion beam injections on stem morphological character of progeny seedlings of different cross combinations of Stevia rebaudiana Bertoni(±SE)1)

1)同列中不同的小寫(xiě)字母表示差異顯著(P＜0.05)Different small letters in the same column indicate the significant difference(P＜0.05).2)Ⅰ:‘守田2號(hào)’ב中山3 號(hào)’‘Shoutian No.2’בZhongshan No.3’;Ⅱ:‘守田2 號(hào)’ב中山4 號(hào)’‘Shoutian No.2’בZhongshan No.4’;Ⅲ:‘中山3號(hào)’ב守田2號(hào)’‘Zhongshan No.3’בShoutian No.2’;Ⅳ:‘中山3 號(hào)’ב守田3號(hào)’‘Zhongshan No.3’בShoutian No.3’;Ⅴ:‘守田3 號(hào)’ב守田3 號(hào)’‘Shoutian No.3’בShoutian No.3’.

?

從平均節(jié)間長(zhǎng)度看，除‘中山3號(hào)’ב守田3號(hào)’和‘守田3號(hào)’ב守田3號(hào)’雜交組合外，經(jīng)60Co－γ和離子束注入后其他雜交組合后代幼苗的平均節(jié)間長(zhǎng)度均顯著低于對(duì)照組。說(shuō)明60Co－γ和離子束注入均可誘導(dǎo)甜菊植株節(jié)間長(zhǎng)度縮短，有利于株型緊湊型后代的誘導(dǎo)。

從分枝數(shù)看，經(jīng)60Co－γ和離子束注入后‘守田3號(hào)’自交后代幼苗的分枝數(shù)較對(duì)照組有所增加;而經(jīng)60Co－γ和離子束注入后其他雜交組合后代幼苗的分枝數(shù)則均較對(duì)照組有所降低。說(shuō)明2種輻射源處理均能誘導(dǎo)‘守田3號(hào)’自交后代幼苗分枝數(shù)的增加，有利于篩選高產(chǎn)后代單株;而對(duì)于其他雜交組合，這2種輻射源處理均能誘導(dǎo)后代幼苗分枝數(shù)的減少，有利于抗倒伏后代單株的篩選。

從莖粗看，經(jīng)過(guò)60Co－γ和離子束注入處理后，‘中山3號(hào)’ב守田2號(hào)’雜交后代植株的莖粗顯著增加，‘守田2號(hào)’ב中山4號(hào)’和‘中山3號(hào)’ב守田3號(hào)’雜交組合后代及‘守田3號(hào)’自交后代植株的莖粗均較對(duì)照組顯著降低;經(jīng)60Co－γ注入處理后‘守田2號(hào)’ב中山3號(hào)’雜交組合后代植株的莖粗顯著小于對(duì)照組，而經(jīng)離子束注入后其后代植株的莖粗與對(duì)照組無(wú)顯著差異。說(shuō)明60Co－γ和離子束注入這2種輻照方式對(duì)甜菊不同雜交后代植株莖粗的誘變效應(yīng)有差異，選擇合適的雜交組合進(jìn)行誘變有可能得到莖粗增加的變異后代。

從5個(gè)雜交組合后代莖部形態(tài)性狀5個(gè)指標(biāo)的平均值來(lái)看，經(jīng)60Co－γ和離子束注入后，植株的株高、節(jié)數(shù)、分枝數(shù)、平均節(jié)間長(zhǎng)度及莖粗均顯著低于對(duì)照，而且60Co－γ處理組5個(gè)指標(biāo)的平均值均顯著低于離子束處理組。說(shuō)明60Co－γ和離子束注入均對(duì)植株莖部上述各指標(biāo)有顯著誘變作用，而且60Co－γ注入的誘變作用較離子束注入更顯著。因此，采用這2種輻射源處理均有助于選育分枝較少、節(jié)間較短的株型緊湊型甜菊植株后代。

經(jīng)60Co－γ注入后各雜交組合后代植株的株高、節(jié)數(shù)及分枝數(shù)的變異系數(shù)均顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明經(jīng)60Co－γ注入后各雜交組合后代植株的這3個(gè)莖部指標(biāo)的變異譜增加，從不同雜交組合后代中篩選出植株高、節(jié)間短和分枝多等性狀植株的概率增加，從而有利于獲得高產(chǎn)后代單株。經(jīng)離子束注入后各雜交組合后代植株的株高和平均節(jié)間長(zhǎng)度的變異系數(shù)顯著低于對(duì)照，分枝數(shù)則顯著高于對(duì)照組，而節(jié)數(shù)的變異系數(shù)與對(duì)照差異不顯著，表明離子束注入有利于矮生、株型緊湊且分枝多的后代單株的選育。經(jīng)離子束注入后各雜交組合后代植株莖粗的變異系數(shù)顯著低于對(duì)照，但經(jīng)60Co－γ注入后莖粗的變異系數(shù)顯著高于對(duì)照，說(shuō)明通過(guò)60Co－γ誘變可篩選得到相對(duì)抗倒伏的后代單株。

2.2.2 對(duì)葉部形態(tài)性狀的影響 經(jīng)60Co－γ和離子束注入處理后甜菊不同雜交組合后代植株葉部性狀的變化見(jiàn)表3。

由表3可以看出:經(jīng)60Co－γ和離子束注入后，‘守田2號(hào)’ב中山3號(hào)’雜交后代的葉寬及葉寬/葉長(zhǎng)比均顯著低于對(duì)照組，‘守田2號(hào)’ב中山4號(hào)’雜交后代的葉寬、葉長(zhǎng)及葉寬/葉長(zhǎng)比均顯著低于對(duì)照組;經(jīng)離子束注入后‘守田3號(hào)’自交后代的葉寬及葉寬/葉長(zhǎng)比也顯著低于對(duì)照組;而經(jīng)60Co－γ和離子束這2種輻射源處理后其他雜交組合后代的3個(gè)指標(biāo)與對(duì)照組均無(wú)顯著差異。

從葉部3個(gè)性狀指標(biāo)的平均值和變異系數(shù)來(lái)看，經(jīng)60Co－γ及離子束注入后5個(gè)雜交組合后代植株的葉寬和葉長(zhǎng)的平均值均顯著低于對(duì)照組;植株葉長(zhǎng)的變異系數(shù)均高于對(duì)照組，而葉寬以及葉寬/葉長(zhǎng)比的變異系數(shù)均低于對(duì)照組，說(shuō)明經(jīng)60Co－γ和離子束這2種輻射源處理后甜菊雜交后代植株葉長(zhǎng)的變異概率增加。

2.2.3 對(duì)越冬前腳芽數(shù)量的影響 經(jīng)60Co－γ和離子束注入后甜菊不同雜交組合后代植株越冬前腳芽數(shù)量的變化見(jiàn)表4。

從表4可以看出:經(jīng)60Co－γ注入后‘守田2號(hào)’ב中山4號(hào)’和‘中山3號(hào)’ב守田2號(hào)’雜交組合后代植株越冬前萌發(fā)的腳芽數(shù)量顯著低于對(duì)照組，而經(jīng)60Co－γ和離子束這2種輻射源處理后其他雜交組合后代的腳芽數(shù)量均與對(duì)照組無(wú)顯著差異。

從腳芽數(shù)量的平均值和變異系數(shù)看，經(jīng)60Co－γ和離子束注入后，5個(gè)甜菊雜交組合后代植株在越冬前萌發(fā)的腳芽數(shù)量平均值均顯著低于對(duì)照組，而腳芽數(shù)量的變異系數(shù)均顯著高于對(duì)照組，表明60Co－γ和離子束注入對(duì)甜菊雜交后代植株越冬前腳芽的萌發(fā)有較大影響，從而也說(shuō)明輻射誘變是甜菊抗寒后代選育的有效方法之一［22］。

表3 60Co－γ和離子束注入對(duì)甜菊不同雜交組合后代幼苗葉部形態(tài)性狀的影響(±SE)1)Table 3 Effects of60Co-γ and ion beam injections on leaf morphological character of progeny seedlings of different cross combinations of Stevia rebaudiana Bertoni(±SE)1)

表3 60Co－γ和離子束注入對(duì)甜菊不同雜交組合后代幼苗葉部形態(tài)性狀的影響(±SE)1)Table 3 Effects of60Co-γ and ion beam injections on leaf morphological character of progeny seedlings of different cross combinations of Stevia rebaudiana Bertoni(±SE)1)

1)同列中不同的小寫(xiě)字母表示差異顯著(P＜0.05)Different small letters in the same column indicate the significant difference(P＜0.05).2)Ⅰ:‘守田2號(hào)’ב中山3 號(hào)’‘Shoutian No.2’בZhongshan No.3’;Ⅱ:‘守田2 號(hào)’ב中山4 號(hào)’‘Shoutian No.2’בZhongshan No.4’;Ⅲ:‘中山3號(hào)’ב守田2號(hào)’‘Zhongshan No.3’בShoutian No.2’;Ⅳ:‘中山3 號(hào)’ב守田3號(hào)’‘Zhongshan No.3’בShoutian No.3’;Ⅴ:‘守田3 號(hào)’ב守田3 號(hào)’‘Shoutian No.3’בShoutian No.3’.

?

表4 60Co－γ和離子束注入對(duì)甜菊不同雜交組合后代植株越冬前腳芽數(shù)量的影響(±SE)1)Table 4 Effects of60Co-γ and ion beam injections on rhizome sucker number of progeny seedlings of different cross combinations of Stevia rebaudiana Bertoni before overwintering(±SE)1)

表4 60Co－γ和離子束注入對(duì)甜菊不同雜交組合后代植株越冬前腳芽數(shù)量的影響(±SE)1)Table 4 Effects of60Co-γ and ion beam injections on rhizome sucker number of progeny seedlings of different cross combinations of Stevia rebaudiana Bertoni before overwintering(±SE)1)

1)同列中不同的小寫(xiě)字母表示差異顯著(P＜0.05)Different small letters in the same column indicate the significant difference(P＜0.05).2)Ⅰ:‘守田2號(hào)’ב中山3 號(hào)’‘Shoutian No.2’בZhongshan No.3’;Ⅱ:‘守田2 號(hào)’ב中山4 號(hào)’‘Shoutian No.2’בZhongshan No.4’;Ⅲ:‘中山3號(hào)’ב守田2號(hào)’‘Zhongshan No.3’בShoutian No.2’;Ⅳ:‘中山3 號(hào)’ב守田3號(hào)’‘Zhongshan No.3’בShoutian No.3’;Ⅴ:‘守田3 號(hào)’ב守田3 號(hào)’‘Shoutian No.3’בShoutian No.3’.

?

3 討 論

甜菊為異花授粉植物，因此其有性繁殖品種的品質(zhì)極易退化，而甜菊優(yōu)良品種選育與優(yōu)質(zhì)甜菊糖的生產(chǎn)密切相關(guān)。輻射誘導(dǎo)突變是選育植物新品種的快速有效方法之一，其有價(jià)值突變體的獲得率主要受被輻射材料、輻射源種類(lèi)及輻射劑量等因素影響［23－25］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:采用60Co－γ和離子束注入處理甜菊雜交組合F1代種子，有利于部分甜菊雜交組合種子發(fā)芽率和幼苗成活率的提高。Shen等［12］的研究結(jié)果也表明:碳離子注入甜菊種子后，種子萌發(fā)期的合成代謝和呼吸代謝能力明顯強(qiáng)于對(duì)照組。輻射在單一性狀改良方面，特別是在降低株高［11］、提高抗性、縮短生育期、改變花色等方面，具有更快更理想的效果［26］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:選取適宜的60Co－γ和離子束注入劑量有助于選育葉形一致、分枝較少、節(jié)間長(zhǎng)度較短、株型緊湊、抗倒伏、抗寒的甜菊矮型植株，但這2種處理方式對(duì)不同雜交組合后代植株不同性狀的誘變效應(yīng)并不完全一致，說(shuō)明輻射誘發(fā)的突變具有一定的隨機(jī)性，應(yīng)對(duì)篩選出來(lái)的表型特異的植株進(jìn)行反復(fù)鑒定，以確定其表型性狀的可靠性和遺傳穩(wěn)定性［27］。

采用傳統(tǒng)雜交育種方法結(jié)合輻射誘變進(jìn)行甜菊育種，可以提高突變頻率，得到豐富的變異體，增加選擇幾率，縮短育種周期，可為甜菊育種提供豐富的育種材料，但輻射誘變的方法和劑量要根據(jù)實(shí)際需要不斷完善。從輻射誘變后甜菊不同雜交組合后代植株的主要形態(tài)指標(biāo)及變異幅度看，利用60Co－γ和離子束輻射誘變?cè)谝欢ǔ潭壬贤貙捔颂鹁盏倪z傳譜，從而提高了獲得優(yōu)良后代單株的可能性。

［1］苗玉新.甜菊的綜合利用［J］.黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，1998(2):42－43.

［2］MAURI P，CATALANO G，GARDANA C，et al.Analysis of Stevia glycosides by capillary electrophoresis［J］.Electrophoresis，1996，17:367－371.

［3］SHIBATA H，SONOKE S，OCHIAI H，et al.Glucosylation of steviol and steviol-glucosides in extracts from Stevia rebaudiana Bertoni［J］.Plant Physiology，1991，95:152－156.

［4］YADAV A K，SINGH S，DHYANI D，et al.A review on the improvement of stevia 〔Stevia rebaudiana(Bertoni)〕［J］.Canadian Journal of Plant Science，2011，91(1):1－27.

［5］楊兆民，張 璐.輻射誘變技術(shù)在農(nóng)業(yè)育種中的應(yīng)用與探析［J］.基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2011，30(1):87－91.

［6］王少平.輻射育種在園林植物育種中的應(yīng)用［J］.種子，2008，27(12):63－68.

［7］郭建秋.電離輻射和航天搭載對(duì)大豆的誘變效應(yīng)［D］.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所，2008.

［8］YANG Z，PENG X M，PENG W Z，et al.Study on mutagenic effect of space flight in two-line sterile rice［J］.Agricultural Science and Technology，2009，10(4):105－107，174.

［9］王俊敏，徐建龍，魏力軍，等.空間環(huán)境和地面γ輻照對(duì)水稻誘變的差異［J］.作物學(xué)報(bào)，2006，32(7):1006－1010.

［10］慎 玫，王彩蓮，陳秋方，等.氮離子注入甜菊的細(xì)胞學(xué)效應(yīng)［J］.核農(nóng)學(xué)報(bào)，1997，11(3):141－144.

［11］羅茂春，沈明山，徐金森，等.低能碳離子對(duì)甜菊生長(zhǎng)和葉綠體發(fā)育的影響［J］.廈門(mén)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2000，39(1):96－101.

［12］SHEN M S，JIANG X Z，XU J S，et al.Biological effects of Stevia rebaudianum induced by carbon ion implantation［J］.植物學(xué)報(bào)，2000，42(9):892－897.

［13］沈明山，徐金森，丁 亮，等.氮離子注入對(duì)甜菊幼苗生長(zhǎng)發(fā)育和細(xì)胞核的影響［J］.廈門(mén)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2000，39(3):386－391.

［14］王彩蓮，慎 玫，陳秋方，等.離子注入甜菊的誘變效應(yīng)研究［J］.核農(nóng)學(xué)報(bào)，1998，12(6):347－352.

［15］舒世珍，王彩蓮，陳秋芳，等.離子注入甜菊種子生物效應(yīng)的研究Ⅰ.低能離子注入甜菊種子對(duì)其植物學(xué)性狀的影響［J］.中國(guó)糖料，1998(1):14－17.

［16］舒世珍，陸 挺，王彩蓮，等.離子注入甜菊種子生物效應(yīng)的研究Ⅱ.甜菊糖甙成分及其產(chǎn)量分析［J］.中國(guó)糖料，1998(4):6－9.

［17］吳廣文，王其斌，簡(jiǎn)善亮，等.甜菊雜種優(yōu)勢(shì)利用和制種技術(shù)研究［J］.安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2005，11(1):73－74.

［18］楊永恒，黃蘇珍，佟海英.甜菊不同雜交組合結(jié)實(shí)率及其F1代萌發(fā)和生長(zhǎng)及對(duì)NaCl耐性的比較［J］.植物資源與環(huán)境學(xué)報(bào)，2012，21(2):73－78.

［19］韓玉林，黃蘇珍，汪鴻江，等.甜菊扦插繁殖快速成苗的研究［J］.特產(chǎn)研究，2001(2):36－37.

［20］湯訪評(píng)，陳素梅，陳發(fā)棣，等.栽培菊與菊屬—近緣屬雜種遠(yuǎn)緣雜交的研究［J］.園藝學(xué)報(bào)，2011，38(1):101－107.

［21］張國(guó)防，于靜波，馮 娟.芳樟無(wú)性系葉精油及芳樟醇含量變異分析［J］.植物資源與環(huán)境學(xué)報(bào)，2012，21(2):117－118.

［22］許 瑛，陳發(fā)棣.菊花8個(gè)品種的低溫半致死溫度及其抗寒適應(yīng)性［J］.園藝學(xué)報(bào)，2008，35(4):559－564.

［23］程備久，李 展，王公明，等.氮離子注入棉花種子的誘變效應(yīng)［J］.核農(nóng)學(xué)報(bào)，1993，7(2):73－80.

［24］張慧琴，謝 鳴，蔣桂華，等.60Co－γ射線對(duì)草莓組培苗誘變效應(yīng)［J］.浙江大學(xué)學(xué)報(bào):農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版，2007，33(2):180－183.

［25］劉麗強(qiáng)，劉軍麗，張 杰，等.60Co－γ輻射對(duì)觀賞海棠組培苗的誘變效應(yīng)［J］.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，43(20):4255－4264.

［26］洪亞輝，朱兆海，黃 璜，等.菊花組織培養(yǎng)與輻射誘變的研究［J］.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2003，29(6):457－461.

［27］李中存.輻射小麥幼胚誘發(fā)和篩選白粉病抗性突變體的研究［J］.華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2002，17(2):58－61.