張麗燕 郝偉偉 方鵬飛邱文英 徐 靜 余 謙 向丕元 張 莉 曾 誼

（四川省華派生物制藥有限公司 四川簡(jiǎn)陽(yáng) 641400）

豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉分別是由傳染性胃腸炎病毒和流行性腹瀉病毒引起的豬的一種高度接觸傳染性疾病［1-2］，主要表現(xiàn)為發(fā)熱、嘔吐、嚴(yán)重脫水和2周齡以內(nèi)的仔豬死亡率高等癥狀。臨床治療時(shí)，多種抗生素、止瀉藥均無(wú)明顯療效，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失［3］。疫苗佐劑作為一種非特異性免疫增強(qiáng)劑，可增強(qiáng)機(jī)體的免疫應(yīng)答能力或改變免疫應(yīng)答的類型，是疫苗發(fā)揮免疫作用的重要組成部分，選擇合適的佐劑，對(duì)于提高疫苗免疫效果有重要的意義［4］。為進(jìn)一步提高豬傳染性胃腸炎-流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗的免疫效果，以仔豬為試驗(yàn)動(dòng)物，利用新型稀釋液和PBS分別稀釋疫苗，進(jìn)行疫苗免疫效果的比較試驗(yàn)［5-6］，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 豬傳染性胃腸炎-流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗 由四川省華派生物制藥有限公司研發(fā)中心研制。

1.2 稀釋液 13115稀釋液：由四川省華派生物制藥有限公司研發(fā)中心研制；PBS：由四川省華派生物制藥有限公司研發(fā)中心配制。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物 14～21日齡健康仔豬20頭，PED、TGE抗體檢測(cè)陰性（中和抗體效價(jià)均不高于1:4）。

1.4 抗體的測(cè)定 在免疫接種后每隔7 d分別對(duì)試驗(yàn)豬進(jìn)行采血，5 000 r/min離心15 min分離血清，通過抗體中和試驗(yàn)分別檢測(cè)血清中的PED以及TGE中和抗體效價(jià)。

1.5 免疫效果試驗(yàn) 將20頭14～21日齡健康仔豬編號(hào)，隨機(jī)分為A、B兩組，每組10頭。A組豬注射疫苗時(shí)用13115稀釋液進(jìn)行稀釋，B組豬注射疫苗時(shí)用PBS進(jìn)行稀釋。

A、B組豬均采用后海穴注射免疫，劑量均為1頭份/頭。在免疫接種后每隔7 d分別對(duì)試驗(yàn)豬進(jìn)行采血，5 000 r/min離心15 min分離血清，通過抗體中和試驗(yàn)檢測(cè)血清中PED、TGE中和抗體效價(jià)。

2 結(jié)果與分析

2.1 免疫后中和抗體效價(jià) 在免疫接種后第7、14、21、28、35、42 d，分別對(duì) A、B 兩組試驗(yàn)豬進(jìn)行采血，5 000 r/min離心15 min分離血清，采用抗體中和試驗(yàn)分別測(cè)定血清中TGE以及PED中和抗體效價(jià)，結(jié)果見表1。

由表1可知，分別用13115稀釋液和PBS稀釋豬傳染性胃腸炎-流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗，通過后海穴免疫仔豬后，采用13115稀釋液組TGE和PED中和抗體效價(jià)均在21 d達(dá)到峰值，且其中和抗體效價(jià)是PBS液稀釋組的3倍甚至3倍以上。

表1 中和抗體效價(jià)測(cè)定結(jié)果

2.2 13115組和PBS組抗體消長(zhǎng) 根據(jù)表1中的數(shù)據(jù)制作抗體消長(zhǎng)曲線圖（見圖1-圖2），從圖中可以清楚的對(duì)比出A、B兩組抗體的消長(zhǎng)規(guī)律。A組用13115稀釋液稀釋TGE-PED二聯(lián)活疫苗具有更加明顯的優(yōu)勢(shì)，抗體產(chǎn)生早，中和效價(jià)上升速度快，并且達(dá)到的效價(jià)峰值更高，峰值維持時(shí)間更長(zhǎng)。

圖1 TGE中和抗體效價(jià)曲線圖

圖2 PED中和抗體效價(jià)曲線圖

3 討論

1)為了預(yù)防由豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒引起的仔豬腹瀉，越來越多的養(yǎng)殖場(chǎng)采用豬傳染性胃腸炎-流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗來對(duì)種豬及仔豬進(jìn)行免疫，這與豬傳染性胃腸炎-流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗產(chǎn)生的免疫效力密不可分。相比于滅活疫苗，活疫苗具有更加明顯的優(yōu)勢(shì)：接種后在體內(nèi)有生長(zhǎng)繁殖能力，接近于自然感染，可激發(fā)機(jī)體對(duì)病原的持久免疫力，用量較小且免疫持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。但是近年來在注射疫苗后的豬場(chǎng)仍有部分仔豬發(fā)生腹瀉，這與仔豬個(gè)體有很大關(guān)系，因此，進(jìn)一步提高該疫苗的免疫效果是當(dāng)前的重中之重。本試驗(yàn)通過利用新型13115疫苗稀釋液來稀釋豬傳染性胃腸炎-流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗，以PBS稀釋疫苗作為對(duì)照，得到了較理想的免疫效果。

2)在病毒感染過程中，往往是先通過體液免疫來阻止病毒在機(jī)體內(nèi)傳播，若動(dòng)物機(jī)體內(nèi)已具有高滴度的抗體，對(duì)于預(yù)防疾病的傳播就具有非常重大的意義。本試驗(yàn)用新型佐劑稀釋豬傳染性胃腸炎-流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗后，與用PBS稀釋相比，新型佐劑組展現(xiàn)出了很大的優(yōu)勢(shì)：7 d內(nèi)抗體迅速升高，高抗體持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)等，對(duì)于豬場(chǎng)TGE和PED疫苗免疫有很好的借鑒參考。

3)試驗(yàn)所使用的佐劑為一種新研制開發(fā)的疫苗佐劑，其中含有免疫增強(qiáng)劑、免疫調(diào)節(jié)劑和免疫緩釋成分，采用特殊工藝加工處理后，使佐劑與抗原具有良好的親和性，保持穩(wěn)定的特性，刺激機(jī)體免疫細(xì)胞持續(xù)性產(chǎn)生抗體。

4)試驗(yàn)中采取的免疫方式為后海穴注射，非專業(yè)人員對(duì)該種注射方法在操作過程中可能會(huì)有些許誤差，容易造成因?yàn)橹饔^操作而致使免疫效價(jià)不高甚至免疫失敗。而對(duì)肌肉注射都很熟悉，因此，在后續(xù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)中，擬進(jìn)行后海穴及肌肉注射方式的對(duì)比試驗(yàn)。

［1］ 殷震，劉景華.動(dòng)物病毒學(xué)［M］.2版.北京:科學(xué)出版社，1997.

［2］ 蔡寶祥.動(dòng)物傳染病診斷學(xué)［M］.南京:江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，1993.

［3］ Saif L J，Wes1ey R D.Transmissib1e gastroenteritis.In:Swine Disease ［M］.7th ed.Ames:Iowa State University Press，1996:362-386.

［4］ 穆楊，周麗梅，侯宏虎，等.三種佐劑對(duì)雞體液免疫影響的比較［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2007，28(10):37-39.

［5］ 趙卓，潘延缽，鄧玉芹，等.用新型納米佐劑配置豬偽狂犬病滅活疫苗的免疫效果研究［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2010(1):144-146.

［6］ 朱剛，黃炯，符子華，等.口蹄疫A型油佐劑和1eo佐劑弱毒滅活疫苗免疫持續(xù)期的研究［J］.中國(guó)獸藥雜志，2006，40(8):5-8.