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(大連醫(yī)科大學(xué) 附屬第一醫(yī)院 中西醫(yī)結(jié)合外科，遼寧 大連 116011)

基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)

陽(yáng)明腑實(shí)證大鼠小腸神經(jīng)-ICC網(wǎng)絡(luò)形態(tài)學(xué)損傷和下法施治研究

梁國(guó)剛，謝明征，曹萬(wàn)龍，嚴(yán)露，齊清會(huì)

(大連醫(yī)科大學(xué) 附屬第一醫(yī)院 中西醫(yī)結(jié)合外科，遼寧 大連 116011)

目的觀察陽(yáng)明腑實(shí)證大鼠小腸神經(jīng)-Cajal 間質(zhì)細(xì)胞(interstitial cells of Cajal,ICC)—平滑肌細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)的形態(tài)學(xué)變化，探討陽(yáng)明腑實(shí)證胃腸運(yùn)動(dòng)障礙的產(chǎn)生機(jī)制及下法的作用機(jī)制。方法成年Wistar大鼠100只，雌雄不限，隨機(jī)分成3組，對(duì)照組20只；陽(yáng)明腑實(shí)證模型組40只；大承氣湯治療組40只。存活大鼠取上段小腸10.0 cm組織制作腸肌層全厚組織標(biāo)本，進(jìn)行c-Kit和乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)體(VAChT)/一氧化氮合酶(nNOS)免疫熒光雙標(biāo)記染色后用于激光掃描共聚焦顯微鏡檢測(cè)、分析。結(jié)果(1)共聚焦顯微鏡檢測(cè)ICC網(wǎng)絡(luò)：與對(duì)照組相比，模型組大鼠小腸ICC數(shù)量明顯減少(P<0.01)，ICC突觸的數(shù)量減少，相互間的連接不連續(xù)，完整的網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu)消失，細(xì)胞熒光強(qiáng)度減弱(P<0.01)。(2)共聚焦顯微鏡檢測(cè)腸神經(jīng)-ICC網(wǎng)絡(luò)：與對(duì)照組相比，模型組膽堿能/氮能神經(jīng)數(shù)目明顯減少(P<0.01/P<0.01)，神經(jīng)網(wǎng)結(jié)構(gòu)紊亂，彼此間的連接減少，神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的熒光強(qiáng)度減弱(P<0.01/P<0.01)；ICC與腸神經(jīng)纖維兩者間失去緊密連接，腸神經(jīng)-ICC網(wǎng)絡(luò)的完整結(jié)構(gòu)受到破壞。 (3)治療組較模型組ICC數(shù)量明顯恢復(fù)(P<0.01)，網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu)的完整性有所恢復(fù)，與模型組比較細(xì)胞熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)(P<0.01)。膽堿能神經(jīng)/氮能神經(jīng)纖維數(shù)目明顯增加(P<0.01)，神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)再次好轉(zhuǎn)，彼此間的網(wǎng)絡(luò)連接的完整性恢復(fù)明顯，神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的熒光強(qiáng)度增加(P<0.01)，ICC與腸神經(jīng)纖維間的連接接近正常，ICC-腸神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)恢復(fù)明顯。結(jié)論陽(yáng)明腑實(shí)證大鼠小腸ICC和神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)受到破壞。大承氣湯治療后小腸膽堿能/氮能神經(jīng)和ICC數(shù)量恢復(fù)，腸神經(jīng)-ICC網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)得到改善。

陽(yáng)明腑實(shí)證；Cajal間質(zhì)細(xì)胞；腸神經(jīng)

陽(yáng)明腑實(shí)證是指在外感熱病病程中所出現(xiàn)的邪熱內(nèi)熾，又伴有腹部實(shí)證癥狀的一組臨床常見全身性綜合證候。如不能得到及時(shí)診治，常可導(dǎo)致多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS),最終危及生命[1]。腸神經(jīng)-ICC-平滑肌細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)是胃腸道動(dòng)力功能基本單位，胃腸道興奮性神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿(acetylcholine,ACH)引起平滑肌的收縮，增加基礎(chǔ)張力或節(jié)律性收縮的幅度。腸道抑制性神經(jīng)遞質(zhì)一氧化氮(nitric oxide,NO)引起平滑肌松弛，抑制基礎(chǔ)張力或節(jié)律性收縮活動(dòng)。多種胃腸道運(yùn)動(dòng)功能障礙疾病與腸神經(jīng)-ICC-平滑肌細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)形態(tài)結(jié)構(gòu)損傷密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)以陽(yáng)明腑實(shí)證大鼠模型為研究對(duì)象，觀察小腸神經(jīng)-ICC網(wǎng)絡(luò)的形態(tài)學(xué)變化，探討陽(yáng)明腑實(shí)證胃腸運(yùn)動(dòng)障礙的產(chǎn)生機(jī)制，為臨床治療提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材 料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。大腸桿菌(E.coli.)菌株由大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院細(xì)菌室所提供，血清型O127：H6，用無菌蒸餾水制成8×108個(gè)/mL混懸液。兔抗大鼠c-kit多克隆抗體(c-19，Santa cruz,Biotech,USA)；山羊抗大鼠VAChT(vesicular acetylcholine transporter)多克隆抗體；山羊抗大鼠nNOS(neuronal nitric oxide synthase)多克隆抗體；FITC-小鼠抗兔IgG抗體；Texas Rad-驢抗山羊IgG抗體(均為Santa cruz,Biotech,USA)。

中藥“大承氣顆粒沖劑”由天津南開醫(yī)院藥廠提供，成分為：大黃12 g，芒硝6 g，厚樸9 g，枳實(shí)9 g。每劑藥物加入無菌蒸餾水36 mL，溶解制成含生藥100%的藥液(1 g/mL)。藥物灌胃前加溫至37 ℃。陽(yáng)明腑實(shí)證造模應(yīng)用中藥：附子、肉桂、干姜由大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院中藥房提供，附子∶肉桂∶干姜以1∶1∶1比例制成水煎劑4 ℃保存。

1.2 動(dòng)物分組

健康成年Wistar大鼠100只(大連醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)，雌雄各半，體重200～250 g，隨機(jī)分為3組：對(duì)照組20只；陽(yáng)明腑實(shí)證模型組(模型組)40只；大承氣湯治療組(治療組)40只。造模48 h后，以上每組存活動(dòng)物標(biāo)本用于激光掃描共聚焦顯微鏡檢測(cè)。

1.3 陽(yáng)明腑實(shí)證模型制作和大承氣湯藥物治療方法

動(dòng)物模型制作：參照樊新榮等[2]陽(yáng)明病腸熱腑實(shí)證造模方法。每天用附子、肉桂、干姜水煎劑灌胃,公斤體重計(jì)算其給藥量按(20 g/kg)。用藥12 d后，禁食(不禁水)12 h，給100 g/L大鼠自身糞便混懸液2 mL灌胃，2次/d，連續(xù)2 d；第3天用8×108個(gè)/mL大腸桿菌滅活菌液，0.1 mL腹腔內(nèi)注射，15 d后造模成功。對(duì)照組用等劑量的生理鹽水。治療組，造模成功當(dāng)日開始每天中藥大承氣湯灌胃，2次/d，每次1 mL/100g。中藥治療5 d后取小腸組織用于實(shí)驗(yàn)。記錄各組大鼠的死亡率，同時(shí)觀察并記錄造模中大鼠的毛發(fā)色澤、行為狀態(tài)、飲食、大便等外觀方面的變化。

1.4 激光掃描共聚焦顯微鏡觀測(cè)

1.4.1 小腸肌層全厚標(biāo)本制備

取對(duì)照組、模型組、治療組存活大鼠予脫頸處死，迅速取出距幽門2 cm的上段小腸。沿系膜緣剖開去除內(nèi)容物，在解剖顯微鏡下，用顯微解剖鑷將黏膜和黏膜下層作為一層剝除，制作小腸肌層全厚標(biāo)本。將標(biāo)本切成1 cm2大小片段放于4 ℃丙酮中固定10 min。1%BSA孵育 1 h，分別加入乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)體(VAChT)和一氧化氮合酶(nNOS)抗體，4 ℃孵育48 h，PBS充分漂洗后加入Texas Red標(biāo)記的二抗室溫下孵育1 h。

1.4.2 共聚焦顯微鏡檢測(cè): 以適于FITC(484 nm)和Texas Red(595 nm)的激發(fā)波長(zhǎng)觀測(cè)標(biāo)本。用于圖像采集的顯微鏡物鏡為40×油鏡，數(shù)值孔徑為1.3,c-Kit陽(yáng)性熒光為綠色，VAChT/nNOS陽(yáng)性熒光為紅色。采用雙通道同步掃描，測(cè)量每一視野免疫陽(yáng)性組織的面積。根據(jù)每一標(biāo)本的掃描厚度分別計(jì)算標(biāo)本VAChT及nNOS免疫陽(yáng)性組織的體積。得到每個(gè)視野各種免疫陽(yáng)性組織占總體積的百分比,每組取3個(gè)標(biāo)本檢測(cè)，每一標(biāo)本隨機(jī)選取3個(gè)高倍視野，用Leica圖像分析軟件進(jìn)行圖像的三維重建和熒光半定量分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 動(dòng)物的一般表現(xiàn)

模型組動(dòng)物精神萎靡不振，行動(dòng)遲慢，但觸之易激惹，掙扎無力，進(jìn)食量較少，體重略有下降，排便次數(shù)少且大便干結(jié)，偶有成硬球，模型組動(dòng)物5天后的死亡率32.5%。治療組動(dòng)物精神稍欠佳，第2 d精神好轉(zhuǎn)，行動(dòng)活潑，掙扎有力，進(jìn)食量逐日增加，大便稀軟，偶有成型，呈棕褐色，死亡率12.5% (P>0.05)。

2.2 胃腸大體標(biāo)本肉眼觀察

對(duì)照組大鼠：胃腸形態(tài)正常，所有腸管呈粉紅色，無粘連，胃腸蠕動(dòng)正常。陽(yáng)明腑實(shí)證模型組：胃腸極度擴(kuò)張，內(nèi)容物和大量氣體滯留于胃腸內(nèi)，漿膜充血腫脹，網(wǎng)膜可見有出血斑點(diǎn)，腹腔內(nèi)少量滲出液，部分出現(xiàn)血性腹水，均呈略混濁，腹腔內(nèi)存在感染現(xiàn)象。大部分腸管呈灰色，系膜肥厚，腸腔內(nèi)大量液體潴留，潴留液為糞水樣液體，明顯存在慢性腸道動(dòng)力功能減弱征象。治療組：胃腸道內(nèi)潴留物較少或胃內(nèi)無物滯留。腸壁紅潤(rùn)，腸壁和系膜無水腫，腸道蠕動(dòng)功能良好。

2.3 激光掃描共聚焦顯微鏡檢測(cè)

對(duì)照組：ICC在環(huán)縱行肌間神經(jīng)叢自身形成網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu)。膽堿能神經(jīng)和氮能神經(jīng)彼此相接形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)含有成串的神經(jīng)節(jié)。ICC網(wǎng)絡(luò)圍繞著膽堿能神經(jīng)和氮能神經(jīng)并與之形成網(wǎng)絡(luò)。ICC長(zhǎng)的突觸與肌纖維平行走行，短的突觸彼此相連并與神經(jīng)纖維和平滑肌纖維緊密連接；ICC、膽堿能神經(jīng),氮能神經(jīng)熒光強(qiáng)度均勻，腸神經(jīng)-ICC網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)完整。

模型組：ICC數(shù)量明顯減少(表1)，完整的網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu)消失，細(xì)胞熒光強(qiáng)度減弱(表2、圖1)。膽堿能神經(jīng)(圖2)和氮能神經(jīng)(圖3)纖維數(shù)目明顯減少(表1)，神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)紊亂，彼此間的連接減少，神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的熒光強(qiáng)度減弱(表2)；ICC與膽堿能神經(jīng)(圖4)和氮能神經(jīng)(圖5)間的連接松散或消失，ICC-腸神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)遭受明顯破壞。

治療組： ICC數(shù)量較模型組明顯恢復(fù)(表1)，網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu)已恢復(fù)，細(xì)胞熒光強(qiáng)度增強(qiáng)(表2，圖1)。膽堿能神經(jīng)(圖2)和氮能神經(jīng)(圖3)纖維數(shù)目明顯增加(表1)。神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)再次好轉(zhuǎn)，彼此間的連接增加，神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的熒光強(qiáng)度增加(表2)，ICC與膽堿能神經(jīng)(圖4)和氮能神經(jīng)(圖5)間的連接接近正常，ICC-腸神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)恢復(fù)明顯。

表1 ICC-神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)計(jì)數(shù)分析

c-Kit免疫陽(yáng)性細(xì)胞VAChT陽(yáng)性神經(jīng)纖維nNOS陽(yáng)性神經(jīng)纖維對(duì)照組(n=20)24±2．519±1．928±0．5模型組(n=27)6±0．81)9±0．91)5±0．31)治療組(n=35)8±0．52)13±1．12)7±0．52)

1)與對(duì)照組比較，P<0.01；2) 與模型組比較，P<0.01

表2神經(jīng)-ICC網(wǎng)絡(luò)熒光半定量分析

c-Kit免疫陽(yáng)性VAChT陽(yáng)性神經(jīng)nNOS陽(yáng)性神經(jīng)對(duì)照組(n=20)33±2．4233±9．4253±3．4模型組(n=27)9±2．71)56±4．11)82±3．01)治療組(n=35)25±1．22)104±8．22)111±9．72)

1)與對(duì)照組比較，P<0.01；2)與模型組比較，P<0.01

圖1 對(duì)照組、模型組和治療組ICC熒光表達(dá)的比較

a: 對(duì)照組， b:模型組，c:治療組。模型組與對(duì)照組比較，ICC數(shù)目減少，細(xì)胞熒光減弱，ICC網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)模糊不清，結(jié)構(gòu)紊亂。治療組ICC數(shù)目，ICC熒光度增強(qiáng)。ICC網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)清晰，結(jié)構(gòu)完整。(藍(lán)色箭頭：ICC)

圖2 對(duì)照組、模型組和治療組VAChT陽(yáng)性神經(jīng)熒光表達(dá)的比較

a: 對(duì)照組， b:模型組，c:治療組。模型組與對(duì)照組比較，膽堿能神經(jīng)纖維數(shù)目減少，熒光減弱，神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)紊亂，神經(jīng)纖維間模糊不清。治療組膽堿能神經(jīng)纖維數(shù)目增加，熒光度增強(qiáng)，神經(jīng)纖維清晰可見，神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)完整。(灰色箭頭：膽堿能神經(jīng))

圖3 對(duì)照組、模型組和治療組nNOS陽(yáng)性神經(jīng)熒光表達(dá)的比較

a: 對(duì)照組， b:模型組，c:治療組。模型組與對(duì)照組比較，氮能神經(jīng)纖維數(shù)目減少，熒光減弱，神經(jīng)纖維間結(jié)構(gòu)模糊不清，神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)破壞。治療組氮能神經(jīng)纖維數(shù)目增加，熒光度增強(qiáng)，神經(jīng)纖維間結(jié)構(gòu)清晰，神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)恢復(fù)。(灰色箭頭：氮能神經(jīng))

圖4 對(duì)照組、模型組和治療組c-kit熒光和VAChT陽(yáng)性神經(jīng)熒光雙標(biāo)記表達(dá)的比較

a: 對(duì)照組， b:模型組，c:治療組。模型組與對(duì)照組比較，膽堿能神經(jīng)-ICC網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)紊亂，彼此間的連接結(jié)構(gòu)模糊不清，減少，膽堿能神經(jīng)-ICC網(wǎng)絡(luò)的熒光強(qiáng)度減弱。治療組膽堿能神經(jīng)-ICC網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)恢復(fù)，彼此間的連接結(jié)構(gòu)清晰，數(shù)目增加，膽堿能神經(jīng)-ICC網(wǎng)絡(luò)的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。(灰色箭頭：膽堿能神經(jīng)；藍(lán)色箭頭：ICC)

圖5 對(duì)照組、模型組和治療組c-kit熒光和nNOS陽(yáng)性神經(jīng)熒光雙標(biāo)記表達(dá)的比較 Fig 5 Compare of doublelabelling fluorescent c-kit and nNOS nerves in control group,model group and therap group

a: 對(duì)照組， b:模型組，c:治療組。模型組與對(duì)照組比較，氮能神經(jīng)-ICC網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)紊亂，彼此間的連接減少，彼此間的連接結(jié)構(gòu)模糊不清，氮能神經(jīng)-ICC網(wǎng)絡(luò)的熒光強(qiáng)度減弱。治療組氮能神經(jīng)-ICC網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)恢復(fù)，彼此間的連接結(jié)構(gòu)清晰，數(shù)目增加，氮能神經(jīng)-ICC網(wǎng)絡(luò)的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。(灰色箭頭：氮能神經(jīng)；藍(lán)色箭頭：ICC)

3 討 論

陽(yáng)明腑實(shí)證是諸多急腹癥發(fā)病過程中共同出現(xiàn)的一個(gè)證候，可以概括為兩大類型的實(shí)證：一為燥熱亢盛，腸胃無燥屎阻結(jié)的熱證；二為燥熱之邪與腸中糟粕相搏結(jié)而成燥屎的實(shí)證。若邪熱熾盛,津傷熱結(jié),陽(yáng)明氣機(jī)通降則受障礙,從而產(chǎn)生陽(yáng)明腑實(shí)之證[3]。參考樊新榮等方法，以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，建立陽(yáng)明腑實(shí)證模型。實(shí)驗(yàn)觀察大鼠外觀行為、體溫、小腸運(yùn)動(dòng)功能等改變證實(shí)該方法比較符合陽(yáng)明腑實(shí)證的中醫(yī)病因病機(jī)。實(shí)驗(yàn)大鼠出現(xiàn)精神和行為改變，出現(xiàn)納差，便秘。胃腸功能受損和腹腔感染現(xiàn)象。這可能是模型組動(dòng)物死亡(32.5%)的原因之一。

胃腸運(yùn)動(dòng)的作用細(xì)胞是平滑肌細(xì)胞。調(diào)控平滑肌細(xì)胞的內(nèi)在神經(jīng)系統(tǒng)以肌間神經(jīng)叢的腸神經(jīng)-Cajal-平滑肌細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)為調(diào)控腸道運(yùn)動(dòng)功能的基本單位。ICC與壁內(nèi)神經(jīng)及平滑肌間存在密切的三維聯(lián)系。它們之間形成的特殊結(jié)構(gòu)“腸神經(jīng)-ICC-平滑肌細(xì)胞”是胃腸動(dòng)力功能的基本結(jié)構(gòu)單位。胃腸道平滑肌都受兩種運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元支配，即腸道興奮性神經(jīng)元及腸道抑制性神經(jīng)元。腸道興奮性神經(jīng)元的主要遞質(zhì)乙酰膽堿(acetylcholine,ACH)引起平滑肌的收縮，增加基礎(chǔ)張力或節(jié)律性收縮的幅度。腸道抑制性神經(jīng)元的主要遞質(zhì)一氧化氮(nitric oxide,NO)引起平滑肌松弛，抑制基礎(chǔ)張力或節(jié)律性收縮活動(dòng)。本研究發(fā)現(xiàn)陽(yáng)明腑實(shí)證組大鼠小腸膽堿能神經(jīng)纖維數(shù)量減少,神經(jīng)纖維熒光強(qiáng)度減弱，神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu)受到破壞。因此認(rèn)為陽(yáng)明腑實(shí)證大鼠小腸肌間神經(jīng)叢膽堿能神經(jīng)減少和膽堿能神經(jīng)網(wǎng)結(jié)構(gòu)的破壞可能是胃腸電節(jié)律失常的一個(gè)重要原因，并由此進(jìn)一步導(dǎo)致胃腸運(yùn)動(dòng)障礙。大承氣湯治療后，乙酰膽堿神經(jīng)數(shù)目增加，熒光強(qiáng)度增加，是因?yàn)橐阴Ｄ憠A濃度，神經(jīng)纖維，神經(jīng)元和受體的恢復(fù)，進(jìn)而影響乙酰膽堿對(duì)平滑肌細(xì)胞的興奮性控制恢復(fù)，并恢復(fù)胃腸道運(yùn)動(dòng)功能。研究發(fā)現(xiàn)ICC-DMP受膽堿能和氮能神經(jīng)雙重支配，ICC-DMP與腸神經(jīng)以及鄰近的平滑肌細(xì)胞間存在特殊的連接[4]。本研究中陽(yáng)明腑實(shí)證動(dòng)物胃腸功能減弱時(shí)，小腸肌間神經(jīng)叢形態(tài)學(xué)發(fā)生了改變，氮能神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目明顯減少，熒光強(qiáng)度減弱，氮能神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)出現(xiàn)紊亂，網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)受到損傷，提示陽(yáng)明腑實(shí)證大鼠小腸肌間神經(jīng)叢氮能神經(jīng)數(shù)目和網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)改變抑制平滑肌蠕動(dòng)是導(dǎo)致胃腸運(yùn)動(dòng)障礙的原因之一。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物灌服大承氣湯后，氮能神經(jīng)纖維數(shù)目增加，熒光強(qiáng)度有所恢復(fù)，網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)恢復(fù)，提示氮能神經(jīng)對(duì)平滑肌抑制性蠕動(dòng)恢復(fù)是治療組胃腸動(dòng)力功能恢復(fù)的原因。

腸神經(jīng)-Cajal-平滑肌細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)中腸神經(jīng)和Cajal 組成的網(wǎng)絡(luò)連接的完整性以及細(xì)胞數(shù)量的多少對(duì)小腸運(yùn)動(dòng)功能起到?jīng)Q定性的影響[5-8]。ICC位于神經(jīng)末梢和平滑肌之間，介導(dǎo)神經(jīng)與平滑肌細(xì)胞(smooth muscle cell,SMC)之間的信號(hào)的傳導(dǎo)。通過ICC與平滑肌細(xì)胞的縫隙連接產(chǎn)生興奮性連接電位(excltory 1unction potential，EJP)，使平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生去極化。本研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)陽(yáng)明腑實(shí)證大鼠小腸的ICC數(shù)目減少，ICC相互連接減少，網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)損傷時(shí)，胃腸道動(dòng)力功能下降。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)論提示胃腸道內(nèi)腸神經(jīng)及ICC的異常改變可能引起ICC節(jié)律起搏和傳播功能的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)受到破壞，導(dǎo)致胃腸電節(jié)律起搏和神經(jīng)傳導(dǎo)功能受到影響；腸運(yùn)動(dòng)神經(jīng)相互間的網(wǎng)絡(luò)聯(lián)系遭到破壞，胃腸神經(jīng)信號(hào)無法正常傳導(dǎo)。大承氣湯治療后，胃腸動(dòng)力功能的恢復(fù)和神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)恢復(fù)有關(guān)?？傊?，當(dāng)ICC與腸神經(jīng)纖維間存在的聯(lián)系結(jié)構(gòu)顯著減少，小腸肌層神經(jīng)-ICC網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)受到破壞，神經(jīng)末梢與ICC之間的突觸樣連接以及ICC之間的縫隙連接損傷或消失時(shí)，將引起腸神經(jīng)信號(hào)減弱或向ICC和平滑肌傳導(dǎo)的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)受損，其慢波傳導(dǎo)和神經(jīng)肌電活動(dòng)功能必然受到影響，從而破壞了胃腸運(yùn)動(dòng)功能的基本單位：腸神經(jīng)系統(tǒng)-ICC-平滑肌細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)，導(dǎo)致陽(yáng)明腑實(shí)證大鼠胃腸動(dòng)力功能失調(diào)。

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Morphologicalchangesofentericnerve-interstitialcellsofCajal-smoothmusclecellsnetworkinYangMingFuShisyndromeandtherapeuticmechanismofXia-Faintraditionalchinese

LIANGGuo-gang,XIEMing-zheng,CAOWan-long,YANLu,QIQing-hui

(SurgeryofIntegratedTraditionalandWesterMedicine,theFirstAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian116011,China)

ObjectiveTo observe the morphological changes of enteric nerve and ICC of enteric nerve-ICC-smooth muscle cells network in rats with Yang Ming Fu Shi Syndrome,and to investigate the function of gastrointestinal motility and the therapeutic Mechanism of Xa-Fa in Traditional Chinese.MethodsOne handred Wistar rats of both sexes were randomly divided into three groups,the contrpl group 20 rats,the model group 40 rats and the therap group 40 rats. The proximal 10.0 cm segment of jejunum beginning 2 cm distal to the pylorus from each group,was studied using c-Kit and vesicular acetylcholine transporter (VAChT)/ neuronal nitric oxide synthase (nNOS) immunohistochemical double-staining with whole-mount preparation technique and confocal laser scanning microscopy.ResultsChange of enteric nerve-ICC net work with confocal laser scanning microscopy:Model group: Compare with control group,the numbers of ICC were significantly decreased (P<0.01),network was disrupted,fluorescence intensity of ICC decreased. Compare with control group,the numbers of vesicular acetylcholine transporter (VAChT) and neuronal nitric oxide synthase (nNOS) were significantly decreased (P<0.01),nerves network disordered,each connection decreased,fluorescence intensity of enteric nerve decreased(P<0.01).The connection of ICCs and enteric nerves were loosen or disappeared.ICC- enteric nerve network was significantly disrupted.Treat group: Compare with control group,the numbers of ICC were significantly increased (P<0.01),network was recovered,fluorescence intensity of ICC increased. the numbers of vesicular acetylcholine transporter (VAChT) and neuronal nitric oxide synthase (nNOS) were significantly increased (P<0.01),network was recovered,fluorescence intensity of nerves increased (P<0.01). The connection of ICCs and enteric nerves were approaching normal,ICC- enteric nerve network was significantly recovered.ConclusionGastrointestinal tract distended in Yang Ming Fu Shi Sydrom rats. Function of gastrointestinal was significantly disordered; and recoveried after Da Cheng Qi decoction treated.In Yang Ming Fu Shi Sydrom rats,numbers of vesicular acetylcholine transporter (VAChT) and neuronal nitric oxide synthase (nNOS) were significantly decreased; and numbers of ICC were decreased too.entric nerve-ICCnetwork was disrupted; after treated,numbers of nerves and ICC were increased,and network was recoveried.

Yang Ming Fu Shi Sydrom; ICC;entric nerve

10.11724/jdmu.2013.06.03

R4

A

1671-7295(2013)06-0520-06

梁國(guó)剛，謝明征，曹萬(wàn)龍，等.陽(yáng)明腑實(shí)證大鼠小腸神經(jīng)-ICC網(wǎng)絡(luò)形態(tài)學(xué)損傷和下法施治研究[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013,35(6)：520-525.

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(33772860)；遼寧省科技廳項(xiàng)目(2011225030)

梁國(guó)剛(1967-),男，遼寧大連人，教授。E-mail：anniu@163.com

齊清會(huì)，教授。E-mail：qiqh@medmail.com.cn

2013-10-10；

2013-11-02)