高賽珍 歐 慧 魯婧婧 李兆琦 朱遠(yuǎn)鋒 羅小銘 劉洪波

廣東省中山市疾病預(yù)防控制中心，廣東中山 528403

CD4+T淋巴細(xì)胞是免疫反應(yīng)的中心細(xì)胞，并為HIV感染的主要靶細(xì)胞。人體感染了HIV后，可導(dǎo)致CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量的不斷減少，從而繼發(fā)免疫缺陷。CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)可以評價(jià)HIV感染者免疫狀況、預(yù)測判斷疾病進(jìn)程、評價(jià)抗病毒治療效果和估測預(yù)后，為HIV感染患者免疫系統(tǒng)損害狀況最明確的指標(biāo)。目前，我國尚未建立Partec PAS流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)CD4+T淋巴細(xì)胞的生物參考區(qū)間，中山地區(qū)亦未建立本地區(qū)人群的CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)生物參考區(qū)間。本研究使用Partec PAS流式細(xì)胞儀測定了140例中山地區(qū)健康成人外周血的CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)，以確定本地區(qū)健康成人外周血CD4+T淋巴細(xì)胞的生物參考區(qū)間。

1 對象與方法

1.1 研究對象

本研究采用配額抽樣的方法，選取140名15～59歲的本地區(qū)健康個(gè)體，分為5組：15～19歲年齡組，男9名，女8名；20～29歲年齡組，男17名，女18名；30～39歲年齡組，男20名，女20名；40～49歲年齡組，男15名，女15名；50～59歲年齡組，男9名，女9名。納入對象需經(jīng)常規(guī)體檢無異常，實(shí)驗(yàn)室檢測HBV表面抗原以及HCV、HIV和梅毒抗體均陰性，谷丙轉(zhuǎn)氨酶和血細(xì)胞常規(guī)計(jì)數(shù)均正常。

1.2 檢測儀器及試劑

德國Partec公司的PAS型流式細(xì)胞儀和配套的CD4+T細(xì)胞快速計(jì)數(shù)試劑、校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)微球、樣品管及鞘液，質(zhì)控品為BECKMAN IMMUNO-TROLTM Cells。

1.3 標(biāo)本的采集和檢測

采集靜脈血2～3mL，置于含K3-EDTA抗凝劑真空采血管；用標(biāo)準(zhǔn)微球?qū)x器進(jìn)行校準(zhǔn)，然后在樣品管中加入20μL抗凝全血，再加入 20μL PE 標(biāo)記的 CD4 分子抗體，混勻并于室溫避光放置10～15min使之充分反應(yīng)，最后加入800μL 免洗緩沖液并輕輕混勻上機(jī)；質(zhì)控品與樣品同樣處理和測定。處理后的樣品檢測在6h內(nèi)完成。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用 SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各組數(shù)據(jù)皆呈正態(tài)分布且具方差齊性，因此各年齡組間的CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果均值比較采用方差分析，而相同年齡組男性和女性之間的CD4+T細(xì)胞均值比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以x±1.96s確定參考區(qū)間。

2 結(jié)果

2.1 離群值的剔除

根據(jù)CLSI C28-A3 文件[1]，各組數(shù)據(jù)按大小順序排列后，將疑似離群值與其相鄰值的差值（D）和數(shù)據(jù)全距（R）相除，若D/R＞1/3則考慮為離群值。根據(jù)該文件規(guī)則，男性20～29歲年齡組一數(shù)據(jù)為離群值而被剔除。

2.2 中山地區(qū)健康成人的CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果

表1 中山地區(qū)不同年齡和性別的健康成人CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果比較（個(gè)/μL）

2.3 中山地區(qū)健康成人的外周血CD4+ T淋巴細(xì)胞數(shù)參考區(qū)間

由于所分各組的CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)均值差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此合并本研究獲得的全部個(gè)體的CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果。合并數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，故以（±s1.96）確定其95%的分布范圍，結(jié)果為（804.7±387.3）個(gè)/μL。

3 討論

淋巴細(xì)胞亞群能反映機(jī)體的免疫狀況、判斷藥物療效，并且還可以預(yù)示疾病進(jìn)展的快慢，因而在感染性疾病、腫瘤和自身免疫性疾病的研究中越來越受到重視。美國疾病預(yù)防控制中心測定成人外周血CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)的參考范圍為（844±247）個(gè)/μL，并規(guī)定CD4+T淋巴細(xì)胞絕對數(shù)≤500個(gè)/μL作為AIDS診斷依據(jù)之一，以此作為HIV感染后需要開始進(jìn)行抗病毒治療的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)[2]。然而，外周血中淋巴細(xì)胞含量受生活環(huán)境、社會(huì)經(jīng)濟(jì)、種族特點(diǎn)的影響，不同地域及不同種族的正常參考值不盡相同，不同儀器和試劑獲得的結(jié)果也存在一定的偏差。因此，《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009年修訂版）》要求各地應(yīng)建立本地區(qū)的包括CD4+T淋巴細(xì)胞絕對計(jì)數(shù)的正常參考范圍[3]。

本研究結(jié)果顯示，中山地區(qū)健康成人外周血CD4+T淋巴細(xì)胞的參考范圍為（804.7±387.3）個(gè)/μL。其變異范圍與陳鐵龍等[4-5]的研究結(jié)果類似，但明顯大于美國和國內(nèi)大都數(shù)實(shí)驗(yàn)室建立的CD4+T淋巴細(xì)胞參考范圍[6-10]。這可能與使用的儀器、試劑等的不同有關(guān)。另外，本研究結(jié)果表明，不同性別和年齡的健康成人外周血CD4+T淋巴細(xì)胞之間沒有差異，這與已有的大部分研究結(jié)果相一致[6-9]。

本研究建立的中山地區(qū)健康成人外周血的CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)參考范圍，可以為本地區(qū)艾滋病患者的臨床分期診斷、抗病毒治療效果提供參考依據(jù)。由于兒童外周血CD4+T細(xì)胞的參考范圍與成人不同[3]，我們下一步工作將建立本地區(qū)不同年齡段兒童的外周血CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)的參考范圍。

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