常婧 周婭靜 石海燕 胡志勇

(山西太原中北大學(xué)化工與環(huán)境學(xué)院化學(xué)工程系 山西太原 030051)

甘草(Glycyrrhiza uraiensis Fisch)又名甜草,屬根豆科植物甘草(Glycyrrhiza uralensisFisch)、脹果甘(Glycyrrhiza inflata Bat)或光果甘草(Glycyrrhiza glabra)的干燥根及根莖。其藥用部位,味甘性平,既能益氣補中,又能緩急止痛、緩和藥性,是最常用的草藥[1-3]。目前為止,對甘草提取物的抑菌活性還沒有作詳細(xì)的研究報道。本文對甘草提取物不同極性成分進(jìn)行了抑菌活性研究,對該藥材中抑菌成分的分離分析提供參考。

1 器材

甘草(山西中醫(yī)學(xué)院)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌/營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、牛肉膏、蛋白胨、慶大霉素(?？泼羯锟萍加邢薰?。

RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、DHP-80型電熱恒溫培養(yǎng)箱、XFS-280CB自動不銹鋼手提式壓力蒸汽滅菌器、BH-Y040型潔凈工作臺、A600092型電子分析天平。

2 方法

2.1 制備甘草提取物

稱取甘草藥材500g,粉碎,在75℃時,用95%乙醇回流提取3次,每次1小時。經(jīng)減壓濃縮至無醇,并回收溶劑,得總提取物70g。用蒸餾水加熱溶解總提取物,置于分液漏斗中,依次加入等體積的有機溶劑氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取,得到各種提取物,干燥成粉末,備用。

2.2 抑菌活性分析[4]

2.2.1 藥敏紙片的制備

通過打孔機將定性濾紙打成直徑為6 mm的圓形紙片,然后通過壓力蒸汽滅菌器將溫度控制在121℃,高壓滅菌20min,室溫干燥。分別取0.5,1.0,2.0mg三個不同重量的供試樣品,選擇合適溶劑溶解,用制備的濾紙片充分吸收樣品,室溫晾干,備用。

2.2.2 制備培養(yǎng)基

固體培養(yǎng)基制備:稱取36 g營養(yǎng)瓊脂,將其置于1000ml燒杯中,并加入蒸餾水加熱攪拌至完全溶解。經(jīng)壓力蒸汽滅菌器在121℃、20min高壓滅菌,然后倒入高壓滅菌的培養(yǎng)皿,液體厚度控制在3～5mm,等待冷卻凝固。

液體培養(yǎng)基制備:用天平準(zhǔn)確稱取0.3g的牛肉膏,1g的蛋白胨,0.5g的氯化鈉置于500ml燒杯中,加入100ml蒸餾水后,加熱并不斷攪拌,用1%NaOH溶液調(diào)節(jié)pH在7.2～7.4,然后放入壓力蒸汽滅菌器中經(jīng)121℃、20min高壓滅菌,分裝于試管中,備用。

2.2.3 制備菌懸液

表1 甘草提取物抑菌圈活性

用接種環(huán)取不同菌種,接種于液體培養(yǎng)基中,放入培養(yǎng)箱中在37℃下培養(yǎng)24h,用滅菌生理鹽水分別稀釋至1×10-5CFU/ml濃度,備用。

2.2.4 測定藥物抑菌作用

采用K-B紙片擴散法[5],移取0.1mL稀釋好的菌懸液,于培養(yǎng)基中央位置,用涂布器盡可能的涂抹均勻。用無菌鑷子夾取已制備好的含藥濾紙片均勻貼在培養(yǎng)基表面,陽性對照選用含藥量為10μg的慶大霉素細(xì)菌藥敏試紙。在37℃下,培養(yǎng)24h后,觀察并測量抑菌圈直徑,結(jié)果以mm表示。每種不同含藥量的提取物樣品對三種菌平行做三次,試驗結(jié)果取平均值。

3 結(jié)果與分析

甘草提取物不同極性成分,以細(xì)菌大腸桿菌和金色葡萄球菌霉菌作為指示菌進(jìn)行的抑菌實驗,結(jié)果見表1。

由上表可知,除了氯仿部分的提取物對金黃色葡萄球菌沒有明顯的抑制效果,其余各部分提取物均對金黃色葡萄球菌均有較為明顯的抑制作用,其中正丁醇部分的提取物的抑菌活性最強,乙酸乙酯提取物的抑菌活性次之,水提取物和95%乙醇提取物也表現(xiàn)出一定的抑菌活性。同時,低含藥量的各部分提取物幾乎沒有抑菌活性,增加紙片的含藥量,可以增強其抗菌作用。

4 討論

本研究表明:甘草提取物不同極性組分對大腸桿菌和金色葡萄球菌霉菌兩種供試菌都表現(xiàn)出一定的抑菌作用,且對金色葡萄球菌的抑菌活性效果要比對大腸桿菌的抑菌活性好。研究結(jié)果有望指導(dǎo)甘草中抑菌活性成分的分離分析,從而提高拓展甘草的藥用價值,更好的開發(fā)利用甘草資源。

[1]楊路路,陳建軍,楊天順等.我國西北地區(qū)藥用植物甘草(Glycyrrhiza uralensis)野生資源的地理分布與調(diào)查[J].中國野生植物資料,2013,32(5):27-31.

[2]王兵,王亞新,趙紅燕等.甘草的主要成分及其藥理作用的研究進(jìn)展[J].吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報,2013,34(3):215-217.

[3]陳云華,黃明進(jìn),王文全等.不同來源甘草藥材成分含量及其保肝降酶作用比較[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2013,19(18):283-286.

[4]劉曉軍,劉鈾,陳紹紅等.構(gòu)樹葉提取物抑菌活性的初步觀察[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2013,19(19):113-116.

[5]時維靜,路振香,李立順.白頭翁不同提取物及復(fù)方體外抑菌作用的實驗研究[J].中國中醫(yī)藥科技,2006,13(3):166-168.