摘要：目的：探索丹參飲口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒定方法。方法：采用薄層色譜法鑒別丹參，紫外-可見分光光度法和高效液相色譜法鑒別并測(cè)定丹參飲口服液中丹參素鈉的含量。色譜條件：Inertsil ODS-SP C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫40℃，流動(dòng)相甲醇-1%冰乙酸（13∶87），二元梯度洗脫，流速1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長280 nm。結(jié)果：丹參飲口服液以及丹參藥材在薄層色譜中可獲得清晰的斑點(diǎn)。丹參素鈉紫外-可見光譜的最大吸收峰在282 nm。丹參素鈉在0.83 ～ 6.64 μg線性關(guān)系良好，r=0.999 5；加樣回收率試驗(yàn)（n=6）測(cè)得平均回收率為97.22%，RSD為1.17%。結(jié)論：薄層色譜法鑒別丹參，紫外-可見光譜、HPLC測(cè)定丹參飲口服液中丹參素鈉的含量，專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，簡(jiǎn)便可靠。

關(guān)鍵詞：丹參飲口服液；丹參素鈉；薄層鑒別；紫外-可見光譜；高效液相色譜法

中圖分類號(hào)：R286文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007-2349（2013）01-0061-03

丹參飲口服液，本品處方來源于《時(shí)方歌括》卷下，由丹參、砂仁、檀香3味藥經(jīng)提取、濃縮制成的口服液，具有活血祛瘀、行氣止痛的功效[1]。臨床上常用于氣滯血瘀所致心胃諸痛等癥。2009年四川省藥品食品監(jiān)督管理局制定的《四川省醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑研究技術(shù)要求》中古代經(jīng)典名方目錄（第一批）已將丹參飲收錄其中，本文初步建立丹參飲口服液的質(zhì)控項(xiàng)目，采用紫外-可見分光光度法，高效液相色譜法測(cè)定丹參飲口服液中丹參素鈉含量以及對(duì)丹參的薄層鑒別進(jìn)行研究[2]。

1儀器與試藥

1.1儀器LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津）；ZF-Ⅰ型三用紫外分析儀（上海佑科儀表有限公司）；TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；JA203H型電子天平（常州市幸運(yùn)電子設(shè)備有限公司）；ZQ-1.2型脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌器（武漢市江漢醫(yī)療制藥設(shè)備有限公司）。

1.2試劑與試藥丹參素納對(duì)照品（批號(hào)110855-200809，供含量測(cè)定用，中國藥品生物制品檢定所）；丹參、檀香、砂仁藥材（購自瀘州百草堂中藥飲片有限公司，經(jīng)瀘州醫(yī)學(xué)院附屬中醫(yī)醫(yī)院趙劍副主任中藥師鑒定為唇形科植物丹參（Savia miltiorrhiza Bge.） 的干燥根和根莖，檀香科檀香（Santalum album L）樹干的心材，姜科多年生草本陽春砂（Amomum villosum Lour）的干燥成熟果實(shí)，均符合《中國藥典》2010年版一部該藥材項(xiàng)下規(guī)定）；丹參飲口服液（瀘州醫(yī)學(xué)院附屬中醫(yī)醫(yī)院，批號(hào)：20120306，20120307，20120308，規(guī)格20 mL/支）；甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2丹參的薄層鑒別

2.1溶液制備

2.1.1對(duì)照品溶液：取丹參素鈉對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含2 mg的溶液。

2.1.2對(duì)照藥材溶液：取丹參藥材l g加水煎煮，放冷至室溫后過濾，濾液用稀鹽酸調(diào)pH至2.0，用乙酸乙酯20 mL提取，提取液蒸干，殘?jiān)胠 mL甲醇溶解。

2.1.3供試品溶液：取丹參飲口服液20 mL，超聲處理30 min，用鹽酸調(diào)解pH至2.0，過濾，濾液用乙酸乙酯提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解。

2.1.4陰性樣品溶液：按處方（除丹參藥材外）與制法，制成陰性對(duì)照樣品。其余處理同供試品溶液。

2.2展開劑的選擇經(jīng)過初步試驗(yàn)以及參考其他相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[3]，選擇氯仿-丙酮-甲酸（10︰4︰2）作為展開劑。

2.3薄層色譜鑒別照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗(yàn)[4]，吸取2.1四種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸（10︰4︰2）為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸氣中熏至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品及對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且陰性樣品無干擾，結(jié)果見圖1。

3紫外-可見光譜測(cè)定丹參素鈉含量

3.1溶液制備

3.1.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹參素鈉對(duì)照品0.0083 g，置25 mL棕色量瓶中，加入甲醇溶解并定容；準(zhǔn)確吸取上述溶液2 mL，至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

3.1.2供試品溶液的制備精密量取本品5 mL，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，?0 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過；準(zhǔn)確吸取續(xù)濾液5 mL，至100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

3.1.3陰性樣品溶液按處方（除丹參藥材外）與制法，制成陰性對(duì)照樣品。其余處理同供試品溶液。

3.2紫外-可見光譜的測(cè)定以3 mL甲醇溶液作為參比，用紫外-可見分光光度計(jì)進(jìn)行基線校準(zhǔn)，此后參照池不變，取3 mL對(duì)照品溶液于空置的樣品池中，對(duì)其紫外-可見光譜進(jìn)行測(cè)定；紫外-可見分光光度計(jì)參數(shù)設(shè)定：掃描范圍210～300 nm，橫坐標(biāo)：λ/nm縱坐標(biāo)：吸光度

A.對(duì)照品；B.供試品；C.陰性樣品

4HPLC法測(cè)定丹參素鈉含量

4.1色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)色譜柱：Inertsil ODS-SP C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫40 ℃，流動(dòng)相甲醇-1%冰乙酸（13∶87），二元梯度洗脫，流速1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長280 nm，進(jìn)樣量10 μL，理論塔板數(shù)按丹參素鈉計(jì)算應(yīng)不低于3000[7]。

4.2溶液的制備

4.2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹參素鈉對(duì)照品0.0083 g，置25 mL棕色量瓶中，加入甲醇溶解并定容，即得0.332 mg·mL-1溶液。

4.2.2供試品溶液的制備精密吸取試驗(yàn)樣品適量，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得[8]。

4.3測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得，結(jié)果見圖3。本品每1 mL含丹參以丹參素鈉（C9H10O5Na）計(jì)，不得少于0.15 mg。

4.4線性關(guān)系試驗(yàn)取4.2.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液2.5，5，10，15，20 μL，按4.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。以對(duì)照品量對(duì)色譜峰面積進(jìn)行線性回歸，結(jié)果丹參素鈉的回歸方程為A=106C-649883，R2=0.9995（n=5），線性范圍為0.83～6.64 μg。

4.5精密度試驗(yàn)取濃度為0.166 mg·mL-1的丹參素鈉對(duì)照品溶液10 μL連續(xù)測(cè)定5次，其峰面積均值1448746，RSD 1.32%。表明儀器精密度良好。

4.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液（20120306）10 μL，分別在0，1.5，3，6，9，12 h進(jìn)樣，記錄峰面積，結(jié)果丹參素鈉峰面積平均值為1410746，RSD為3.23%。表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

4.7重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)（20120306）樣品6份，按4.2.2方法制備，測(cè)定，結(jié)果丹參素鈉平均含量為0.18 mg·g-1，RSD為1.04%，表明分析方法重復(fù)性良好。

4.8加樣回收試驗(yàn)精密稱取同一批（20120306）樣品共6份，分別精密加入一定量的丹參素鈉對(duì)照品，按4.2.2項(xiàng)下制備供試品溶液，各取10 μL進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。丹參素鈉平均回收率為97.22%，RSD為1.17%，表明本方法準(zhǔn)確可靠。

丹參常用于治療婦科病、冠心病、缺血性中風(fēng)、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病，活性成分主要有脂溶性和水溶性兩類，脂溶性成分主要是丹參酮、隱丹參酮、丹參酮ⅡA等[9]。近10多年來國內(nèi)外對(duì)丹參及其同屬植物的脂溶性成分進(jìn)行了大量的研究，僅從丹參中分離的二萜醌類化合物就有40多個(gè)，并且對(duì)其藥理也進(jìn)行研究。然而中醫(yī)藥傳統(tǒng)上用其水煎劑，即丹參的水溶性部位，所以研究丹參的水溶性成分相對(duì)來說更有意義[10]。研究表明，其水溶性成分主要是丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸（A，B，C，D，E，F(xiàn)，G）等。丹參素在自然界中不穩(wěn)定，把其做成鈉鹽，功效和丹參素一樣[11]。因此，用薄層色譜法鑒別丹參，紫外-可見光譜、HPLC測(cè)定丹參飲口服液中丹參素鈉的含量。本文所建立的丹參素鈉HPLC經(jīng)方法學(xué)考察其專屬性、重現(xiàn)性，簡(jiǎn)便可靠，適用于丹參飲口服液質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定。

本試驗(yàn)在用紫外-分光光度計(jì)法測(cè)定丹參素鈉含量時(shí)，丹參素鈉對(duì)照品用甲醇溶解，丹參飲口服液未進(jìn)行蒸干，直接用甲醇進(jìn)行稀釋定容，結(jié)果丹參飲口服液紫外-可見光譜最大吸收峰287 nm，偏離對(duì)照品丹參素鈉282 nm 5個(gè)單位，超出了正常范圍（280～284 nm）。通過多次試驗(yàn)，改為3.1.2供試品的處理方法，最大吸收峰284 nm，在一定程度上消除了中藥成方制劑成分復(fù)雜的干擾，重現(xiàn)性好，測(cè)定結(jié)果更準(zhǔn)確。

丹參飲作為中醫(yī)藥傳統(tǒng)經(jīng)典古方，在臨床上具有良好的應(yīng)用基礎(chǔ)，通過現(xiàn)代制劑技術(shù)將其開發(fā)成新的院內(nèi)制劑，以及進(jìn)一步開發(fā)成國內(nèi)新藥，因而需要對(duì)丹參飲口服液的質(zhì)量進(jìn)行控制，建立丹參飲口服液初步的質(zhì)量指標(biāo)，體現(xiàn)中醫(yī)藥特色，為患者提供安全、有效、經(jīng)濟(jì)穩(wěn)定的中成藥。

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（收稿日期：2012-11-19）作者簡(jiǎn)介：肖笛（1991～），女，漢族，四川自貢人，2009級(jí)藥學(xué)本科生.

△通訊作者：彭芳，教授，主要從事藥理學(xué)方向研究；email：pengfang101@sohu.com